中藥化學課件-陳勇-黃酮類化合物

1、 中藥化學藥學院中藥化學教研室陳 勇黃酮類化合物黃酮類化合物是一類重要的含氧雜環(huán)天然有機化合物。 分布廣泛：高等植物中常見 存在形式：苷元、苷 活性多樣：抗氧化、心血管、保護肝臟、抗炎、 抗癌、雌激素作用等概 述經典含義：主要是指根本母核為2苯基色原酮類的化合物；現(xiàn)代定義：泛指二個苯環(huán)A環(huán)和B環(huán)通過三個碳原子相互連接而成的一系列化合物的總稱，即具有C6-C3-C6結構的一類化合物的總稱。概 述黃酮類化合物一、苷元的結構與分類 分類依據 1三個碳的飽和程度 2三個碳鏈是否成環(huán) 3C環(huán)上羥基取代位置3位羥基取代與否 4B-環(huán)連接位置(2、3-位) 5C-4是否有羰基等分 類黃酮B環(huán)連接位置C環(huán)羥基

2、取代位置黃酮醇異黃酮三碳鏈是否成環(huán)C-4是否有羰基查耳酮花色素黃烷-3-醇三碳氧化程度二氫黃酮二氫異黃酮二氫黃酮醇二氫查耳酮分 類木犀草素，抗菌作用黃芩苷，清熱解毒槲皮素：R = H蘆 ?。篟 = 蕓香糖 具有Vp樣作用， 恢復毛細血管的正常彈性 。最常見的黃酮醇類化合物 黃酮類 flavones 黃酮醇類 flavonols 分 類9 二氫黃酮類 flavanones 二氫黃酮醇類 flavanonols 橙皮苷 Vp樣作用 甘草素 對潰瘍有抑制作用 水飛薊素 保肝作用分 類 異黃酮類 isoflavones 二氫異黃酮類 isoflavanones 魚藤酮 農業(yè)殺蟲劑大豆異黃酮分 類大豆異

3、黃酮 進入20世紀90年代，國內外的生物學家、化學家、醫(yī)學家被一種神奇 的物質所吸引，這存在于大豆中的神奇物質被稱作“大豆異黃酮。 流行病學資料說明，長期食用大豆的東南亞人群中，癌癥、動脈粥樣硬化等心血管病癥的發(fā)病率明顯低于西方。在日本，乳腺癌的發(fā)病率是美國的1/4；婦女更年期綜合癥的發(fā)病率只有美國的1/3；這個現(xiàn)象已引起科學家的注意。經研究發(fā)現(xiàn)，大豆中含有一種結構與雌激素相似的物質叫異黃酮，它是大豆中的一種非營養(yǎng)成份，具有生理活性，能產生類似雌激素的效應，而被稱之為“植物雌激素。 對身體雌激素的雙向調節(jié)作用。當人體內雌激素水平低時，大豆異黃酮占據雌激素受體，發(fā)揮弱雌激素效應，表現(xiàn)出提高雌激素

4、水平的作用。當人體內雌激素水平高時，大豆異黃酮以“競爭方式占據受體位置，同樣發(fā)揮弱雌激素效應，但由于它的活性僅為體內雌激素的2%，因而從總體上表現(xiàn)出降低體內雌激素水平的作用，這就是著名的大豆異黃酮對雌激素的雙向調節(jié)作用機制。 分 類大豆異黃酮對身體雌激素的雙向調節(jié)作用 抗癌作用 降低膽固醇，預防動脈硬化 改善骨質疏松 預防冠心病 大豆異黃酮美國的食品藥物管理局FDA把大豆列為能夠“真正降低心臟病危險的食品之一 分 類12 植物雌激素雌二醇12 分 類 查耳酮類 chalcones 花色素類 anthocyanidins矢車菊素：R1 = OH, R2 = H飛燕草素：R1 = R2 = OH天

5、竺葵素：R1 = R2 = H錦葵花素：R1 = R2 = OCH3分 類 黃烷醇類 黃烷-3-醇 R = H黃烷-3,4-二醇 R = OH兒茶素：抗癌活性麻黃寧A/B：抗癌活性分 類 橙酮類 aurones 較少見黃花波斯菊花：硫黃菊素酮類 xanthones異芒果苷：止咳祛痰芒果葉和知母葉分 類分 類雙黃酮 構成雙黃酮的單黃酮分別是黃酮和二氫黃酮；是由兩分子黃酮、或兩分子二氫黃酮、或一分子黃酮和一分子二氫黃酮通過C-C或C-O-C鍵方式連接而成。多局限分布在裸子植物。如銀杏的雙黃酮是由兩分子黃酮通過C-C鍵連接的。分 類其他特殊黃酮類化合物水飛薊素既屬于黃酮又屬于木脂素榕堿既屬于黃酮又屬

6、于生物堿分 類氧苷碳苷 黃酮 異黃酮黃酮苷分 類常見重要黃酮苷中糖的結構蕓香糖新陳皮糖龍膽雙糖槐糖分 類黃酮類化合物的生理活性一對心血管系統(tǒng)的作用 1、降低血管脆性及異常的通透性 如：蘆丁、橙皮苷 2、擴冠作用 如：槲皮素、葛根素 3、降低血脂及膽固醇的作用二抗肝臟毒活性 如：水飛薊素、兒茶素三抗炎作用 如：蘆丁、羥乙基蘆丁、橙皮苷-甲基查爾酮四雌激素樣作用 如：染料木素、大豆素等分 類蘆丁片 蘆丁是從中國所獨有的國槐的花蕾中提取的植物藥，也稱維生素P，具有降低毛細血管的異常通透性和脆性的作用，是心腦血管保護藥，國內用于心腦血管藥品制劑的主要成分，國外還大量用于食品添加劑和化裝品。 曲克蘆丁片

7、(羥乙基蘆丁片) 毛細血管保護藥。具有防止血管通透性異常升高，抑制紅細胞和血小板凝集，改善微循環(huán)等作用。可用于閉塞性腦血管病，中心性視網膜炎、動脈硬化、冠心病、堵塞前綜合癥、血栓性靜脈炎等疾病。 分 類黃酮類化合物的生理活性五抗菌作用 如：木犀草素、黃芩素、黃芩苷六抗病毒作用 如：槲皮素、山柰酚等七瀉下作用 如：營實苷A八解痙作用 如：異甘草素、大豆素等九其它作用 止咳、祛痰、平喘等作用分 類黃酮類化合物一、性狀1 、形態(tài) 黃酮類化合物多為結晶形固體，少數(shù)苷類為粉未狀 2、旋光性 苷元？ 一般沒有，除了C環(huán)氫化苷？有，糖上有手性C原子3、熒光 顏色與結構有關，C環(huán)氫化沒有理化性質4、顏色1顏色

8、與結構中是否存在交叉共軛有關。苯甲酰系統(tǒng)吡喃酮環(huán)桂皮酰系統(tǒng)理化性質灰黃黃色淺黃色橙黃色灰黃黃色無色無色2黃酮和黃酮醇在C-7和C-4位引入-OH及-OCH3后 顏色加深，其他位置影響小。理化性質3花色素及其苷元顏色隨pH不同而改變。4、顏色pH8.5 顯蘭色。pH 非平面性分子 平面性分子7、4-OH因處于交叉共軛系統(tǒng)的端基，較其它位置的-OH極性大理化性質4、苷上糖的數(shù)目和位置與溶解度1苷親水與糖數(shù)目 糖數(shù)目多親水性強。原生苷大于次生苷。2苷親水與糖的位置 3-OH苷化的親水性大于7-OH苷化的親水性。如棉黃素理化性質三、酸堿性1、酸性7,4-二羥基 7或4-羥基一般酚羥基5-羥基5%NaH

9、CO3 5%Na2CO3 0.2%NaOH 4%NaOH用于pH梯度別離理化性質注意1：二氫黃酮和異黃酮的4-OH 注意2：不是所有黃酮母核上的羥基都是酚羥基。5%NaHCO3 5%Na2CO3理化性質2、堿性H+在濃硫酸或濃鹽酸溶液中表現(xiàn)堿性。生成 鹽，難溶有機溶劑，不穩(wěn)定，加水稀釋，黃酮又游離。 呈堿性與-吡喃環(huán)上的醚氧原子有關。理化性質四、顯色反響及其應用一復原反響1、鹽酸-鎂粉或鋅粉反響1反響對象 黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇濃鹽酸2陽性判斷依據 反響升起泡沫呈紅色，為陽性。3應用 用于上述四種黃酮與其它黃酮的鑒別。理化性質2、四氫硼酸鈉鉀反響1反響試劑 四氫硼鈉、鹽酸2鑒別對象

10、 二氫黃酮類化合物3反響現(xiàn)象 紅紫 理化性質練習-鑒別(化學方法)ABCD理化性質二金屬鹽類試劑的絡合反響5-羥基、4-酮基3-羥基、4-酮基鄰酚羥基常見的金屬離子：鋁鹽、鋯鹽、鎂鹽、鍶鹽等。理化性質1、三氯化鋁反響反響試劑：鑒別對象：反響現(xiàn)象：反響機制： 注意：1%AlCl3-EtOH具3-OH，4 C=O、5-OH，4 C=O、鄰二酚的黃酮鄰二OH絡合不穩(wěn)定，加酸后即分解可見光下黃色加深，紫外下鮮黃色熒光加深4-OH黃酮醇、7,4-二OH黃酮醇天藍色熒光。鋁的絡合物理化性質1 2 3 4 5 取本品粉末2g，加甲醇50ml,加熱回流1小時，濾過，濾液濃縮至干，加10鹽酸溶液10ml，在水浴

11、中加熱水解1小時，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取槲皮素對照品、山奈酚對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法中國藥典2005年版一部附錄 B試驗，吸取上述兩種溶液各2l，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸5：2：1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5三氯化鋁溶液，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，見圖3。理化性質2、鋯鹽-枸櫞酸反響反響試劑：鑒別對象：反響現(xiàn)象：2% ZrOCl2/ EtOH和 2

12、%枸櫞酸/ EtOH檢查黃酮中是否存在3-OH或5-OH樣品黃色2%枸櫞酸2%ZrOCl2有3-OH和/或5-OH3-OH或3，5-二OH無3-OH，但有5-OH黃色不減褪黃色減褪理化性質 3、Mg(Ac)2反響反響試劑：鑒別對象：反響現(xiàn)象：1% Mg(Ac)2-EtOH區(qū)別二氫黃酮(醇)與其它類黃酮二氫黃酮(醇)：天藍色熒光 其它黃酮呈黃褐色熒光理化性質4、氨性氯化鍶反響1試劑2反響對象3現(xiàn)象4應用氨水+甲醇+氯化鍶具有鄰二酚羥基的黃酮。綠色至棕色乃至黑色沉淀 鑒別黃酮結構上的鄰酚羥基理化性質練習-化學鑒別化合物理化性質三硼酸顯色反響1、試劑2、反響對象酸性條件，硼酸可見光-黃色紫外光 -黃

13、綠色熒光3、顯現(xiàn) 用于鑒別黃酮結構上的5-OH和查耳酮上的6-OH存在理化性質查耳酮二氫黃酮OH-H+同分異構體橙黃色無色四堿性試劑顯色反響反響試劑：氨水/氫氧化鈉對象/現(xiàn)象：黃酮 -黃橙 黃酮醇-黃/棕色(空氣) 二氫黃酮-黃橙/紅紫 異黃酮-黃 鄰三OH黃酮-蘭綠理化性質1、以下黃酮中為無色的黃酮是 A、黃酮醇 B、查耳酮 C、二氫黃酮醇 D、異黃酮 E、花色素2、A、黃酮 B、二氫黃酮 C、異黃酮 D、黃酮醇 E、黃烷-3-醇1黃芩苷和黃芩素屬于A2兒茶素屬于E3大豆素屬于C4橙皮苷B3、以下化合物呈黃色的是C A、橙皮苷 B、杜鵑素 C、木犀草素 D、葛根素 E、柚皮素4、以下化合物酸

14、性最強的是A A、槲皮素 B、橙皮苷 C、黃芩素 D、橙皮苷元 E、槲皮素-7-葡萄糖苷5、可以區(qū)別黃酮與二氫黃酮的反響是 A、鹽酸-鎂粉反響 B、鋯鹽-檸檬酸反響 C、四氫硼酸鈉反響 D、氯化鍶反響 E、三氯化鋁反響CC理化性質6、A、查耳酮 B、黃酮和黃酮醇 C、花色素 D、二氫黃酮 E、異黃酮1隨pH不同而改變顏色的是 2自身無色，但在堿液中變?yōu)槌壬氖?7、黃酮類化合物分類的依據是 A、中央三碳鏈的氧化程度 B、苯環(huán)取代的羥基情況 C、4位是否具有羰基 D、B環(huán)連接位置 E、三碳鏈是否成環(huán)8、黃酮類化合物的顏色主要取決于分子結構中的 A、酚羥基 B、色原酮 C、酮基 D、苯環(huán) E、交叉

15、共軛體系9、水溶性最大的黃酮苷元是 A、黃酮醇 B、查耳酮 C、花色素 D、黃烷 E、黃烷醇10、能溶于5%碳酸氫鈉水溶液的化合物是A A、木犀草素 B、水飛薊素 C、黃芩素 D、漢黃芩素 E、橙皮苷元CDACDEEC理化性質11、黃酮母核上酚羥基的酸性以5-OH為最弱的原因是 A、p-共軛效應 B、吸電子誘導效應 C、供電子效應 D、交叉共軛效應 E、分子內氫鍵效應12、黃酮類化合物可與強無機酸形成鹽是由于其分子中含有 A、羥基 B、羰基 C、雙鍵 D、氧原子 E、內酯環(huán)13、某中藥提取液不加鎂粉，只加鹽酸即產生紅色，那么提示可能含有 A、黃酮 B、黃酮醇 C、花色素 D、二氫黃酮 E、異黃

16、酮14、山柰酚和槲皮素的鑒別用A A、SrCl2/NH3 B、Mg-HCl C、AlCl3 D、AlCl3/HCl E、MgAc2 15、黃酮類化合物加2%ZrOCl2甲醇液顯黃色，再參加2%枸櫞酸甲醇溶液，黃色顯著消褪，該黃酮類化合物是 A、3-羥基黃酮 B、4,7-二羥基異黃酮 C、5-羥基黃酮 D、4,7-二羥基黃酮 E、7-羥基二氫黃酮EDCC理化性質黃酮類化合物提 取原理：黃酮類化合物的溶解性和酸性 相似相溶與酸堿理論提?。很赵簶O性小的溶劑，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取苷及極性大的苷元： 用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加熱提取 極性稍大的苷元一般指：羥基黃酮、雙黃酮、 橙

17、酮、查爾酮多糖苷類：一般用沸水提取 水或醇-水，加熱提取提取液濃縮，加3-4倍醇醇水液沉淀水雜濃縮，回收醇，加水水 液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚層氯仿層乙酸乙酯層正丁醇層水層葉綠素等脂溶性成分黃酮苷元大極性苷元小極性的苷黃酮苷多糖蛋白質藥 材1、溶劑提取法 2、堿提酸沉法 利用黃酮苷元具有酸性，可溶于堿水，難溶于酸水的性質提取黃酮苷元。常用的堿水：稀氫氧化鈉溶液、石灰水 花、果藥材提取黃酮最適宜采用石灰乳或石灰水。石灰水的作用？提 取槐花米0.4%硼酸水溶液煮沸15min,滴加石灰水, pH 89提取液加鹽酸, pH 5沉淀水洗蘆丁注意： a 當分子中有鄰二酚羥基時，可加硼

18、酸保護。 b 堿水濃度不可過高，以免破壞黃酮母核 c 酸化時，酸性不可太強，以免生成烊鹽而溶解提 取極性酚羥基酸性分子量官能團溶劑法硅膠、氧化鋁色譜聚酰胺色譜pH梯度葡聚糖凝膠化學別離分 離一柱色譜法1、硅膠柱色譜應用范圍： 主要別離小極性和中等極性的化合物，應用最為廣泛。 異黃酮、二氫黃酮醇、高度甲基化乙酰化的黃酮及黃酮醇 多羥基黃酮、黃酮醇及其苷類：硅膠加水去活化吸附規(guī)律： 極性大吸附能力強e g ： A 苷元 B 二糖苷 C 單糖苷 Rf：A C B分 離原理：氫鍵吸附作用洗脫規(guī)律：先后母核上羥基增加，洗脫順序遞減羥基數(shù)目相同時，有締合羥基 無締合羥基苷元相同：三糖苷 雙糖苷 單糖苷 苷

19、元 不同類型黃酮類化合物的洗脫先后順序為： 異黃酮二氫黃酮醇黃酮黃酮醇。分子中芳香程度高、共軛雙鍵多，那么聚酰胺對其的吸附力強，故難于洗脫。應用范圍：適合各種類型的黃酮類化合物，包括苷、苷元、 查耳酮及二氫黃酮2、聚酰胺柱色譜分 離溶劑洗脫能力 水甲醇丙酮稀堿甲酰胺二甲基甲酰胺槲皮素 氯仿:甲醇 (7：3) 聚酰胺柱層析 槲皮素 蘆丁分 離聚酰胺“雙重色譜原理 正相色譜 反相色譜聚酰胺：極性固定相極性酰胺基團 洗脫劑：有機溶劑氯仿-甲醇，極性小先洗脫：游離黃酮苷元，極性小 Rf值： 苷元 苷 非極性固定相非極性脂肪鏈含水溶劑甲醇-水，極性大 苷極性大柱色譜別離苷元 流動相醇極性時為正相聚酰胺

20、固定相聚酰胺脂肪鏈極性 7或4-OH 其它一般酚-OH 5-OH 5%NaHCO3 5%Na2CO3 0.2%NaOH 4%NaOH 分 離乙醚液脂雜乙醚液乙醚液乙醚液游離總黃酮乙醚液堿液(3或5-OH黃酮)堿液(一般酚OH黃酮)堿液(7,4-二OH黃酮)堿液(7或4-OH黃酮)5% NaHCO35% Na2CO30.2% NaOH4% NaOH梯度pH萃取法分 離四特殊官能團分 離原理：利用分子中某些特定官能團性質進行別離 具有鄰二酚羥基的成分，用醋酸鉛沉淀 不具有鄰二酚羥基的成分，用堿式醋酸鉛沉淀 具有鄰二酚羥基的黃酮類化合物還可以與硼酸反響形成溶于水的硼酸絡合物，可以與不具有鄰二酚羥基的

21、其它黃酮類化合物別離1、常用堿提取酸沉淀法的是 A、黃酮類 B、甾體皂苷 C、生物堿 D、香豆素 E、羥基蒽醌2、在聚酰胺色譜上對黃酮類化合物洗脫能力最弱的溶劑是 A、95%乙醇 B、丙酮 C、水 D、甲酰胺 E、堿水3、用聚酰胺層析別離以下黃酮苷元，以醇-水混合溶劑洗脫，最先洗脫下來的是 A、黃酮 B、二氫黃酮醇 C、查耳酮 D、黃酮醇 E、異黃酮4、從總黃酮乙醇浸膏中萃取黃酮單糖苷，用 A、石油醚 B、乙酸乙酯 C、氯仿 D、乙醚 E、苯ADECEB練 習5、假設提取黃酮多糖苷，最常用的提取溶劑是 A、沸水 B、酸水 C、乙醇 D、醋酸乙酯 E、氯仿6、當藥材為花或果實時，采用堿溶酸沉淀提

22、取黃酮類化合物，常選用的堿液為 A、5%碳酸氫鈉液 B、5%碳酸鈉液 C、飽和石灰水 D、1%氫氧化鈉液 E、10%氫氧化鈉液7、別離黃酮類化合物的方法有 A、溶劑萃取法 B、聚酰胺吸附法 C、pH梯度法 D、硼酸絡合法 E、離子交換樹脂法ACABCD練 習從檸檬果皮中別離降血壓有效成分提取別離實例1使要得到的化合物溶解，而使蛋白質、黏液質等大極性成分形成沉淀除去 溶劑萃取法鉛鹽沉淀法凝膠色譜法硅膠色譜法除去Pb，生成PbCO3 提取別離實例1滿山紅化學成分的提取別離 提取別離實例2黃酮類化合物 一 色譜法的應用二 UV三 1H-NMR四 13C-NMR五 MS結構鑒定一、黃酮類化合物的檢識顏

23、色：多呈黃色母核檢識： 鹽酸-鎂粉反響 黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇 四氫硼鈉反響 二氫黃酮醇類取代基團檢識：鋯鹽-枸櫞酸反響 3-OH、 5-OH黃酮鑒別 氨性氯化鍶反響 鄰二酚羥基理化檢識結構鑒定硅膠TLC：用于分析與鑒定弱極性黃酮類化合物。展開劑：甲苯-甲酸甲酯-甲酸(5:4:1)，苯-甲醇，氯仿-甲醇等。聚酰胺TLC： 適合于含游離酚OH的黃酮及其苷類的分析。 聚酰胺對黃酮類化合物吸附能力強，大多數(shù)展開劑中含有醇、酸或水。紙色譜PC： 適用于各種黃酮類化合物及其苷類的分析色譜法一、黃酮類化合物的檢識結構鑒定色譜法83第一相展開采用醇性展開劑如: BAW n-BuOH: HOAc:

24、H2O=4:1:5上層 TBA t-BuOH: HOAc: H2O=3:1:1 水飽和n-BuOH層析行為: Rf值: 苷元單糖苷雙糖苷一般:苷元在以上，而苷那么小于。分配作用第二相展開采用水性展開劑 如：26% HOAc水溶液 3% NaCl 水溶液 HOAc:濃HCl:H2O= 30: 3 : 10層析行為: 連接糖鏈越長, Rf 越大(0.5); 苷元Rf較小，有的留在原點。吸附作用ABCDABCD苷元苷元紙色譜結構鑒定色譜法雙向PC 第I向 醇性展開劑 第II向 水性展開劑BAW、TBA、水飽和正丁醇 28%HAc、3%NaCl、1%HCl 正相色譜 反相色譜固定相水極性 流動相 *有

25、認為是吸附原理？Rf規(guī)律：極性小的化合物Rf大 極性大的化合物Rf大 苷元以上 單糖苷 雙糖苷以下 苷元中，平面型分子 非平面型分子 Rf規(guī)律與左邊相反 母核相同，2-OH 3-OH 4-OH 5- OH黃酮 苷元的別離鑒別黃酮苷及花色素類 結構鑒定色譜法苷元:平面型分子: 黃酮(醇)、查耳酮的Rf小, 幾乎留在原點不動 Rf 0.02非平面型分子: 二氫黃酮(醇)、二氫查耳酮的Rf大, 因親水 性較強 層析檢查方法: 觀察熒光,用紫外光燈照射看到有色斑點，NH3處理產生明顯的色變。 用2%AlCl3甲醇液噴霧,UV燈下呈亮黃色熒光斑點。雙向紙層析結構鑒定色譜法一般步驟： 1 待測樣品在甲醇中

26、的UV光譜 2 待測樣品在甲醇中參加各種診斷試劑后的UV光譜 診斷試劑：NaOCH3 , NaOAc, NaOAc/H3BO3, AlCl3, AlCl3/HCl 3 苷類水解前后的UV光譜，確定糖的連接位置及甙元結構。 二、UV光譜結構鑒定UV苯甲?；鶐I：240280nm桂皮酰基帶I：300400nm1、甲醇中的UV光譜結構鑒定UV兩者UV光譜圖形相似，但帶I位置不同。整個母核上氧取代程度越高，那么帶I將向長波方向位移紅移。 a. b. 黃酮、黃酮醇304-350 nm358-385 nm結構鑒定UV帶II吸收峰為主峰，帶I很弱，常在主峰的長波方向有一肩峰。c.d.異黃酮、二氫黃酮、二氫

27、黃酮醇270-295 nm245-270 nm結構鑒定UV共同特征是帶I很強，為主峰而帶II那么較弱，為次強峰。帶I的位置不同。e. f.查耳酮、橙酮類340-390 nm370-430 nm結構鑒定UV91峰形帶II（240285nm，苯甲酰系統(tǒng)）帶I（300400nm，桂皮酰系統(tǒng)）類型取代240-285304-350黃酮類OH取代可以使相應的帶I或I I紅移，環(huán)具有, 4羥基，帶II為雙峰328-385黃酮醇類（3-OR）352-385黃酮醇類（3-OH）245-270300-400異黃酮類B環(huán)OH和OMe對帶I影響不大270-295二氫黃酮220-270340-390查爾酮類2-OH使帶

28、I紅移370-430橙酮類帶I有3-4個小峰結構鑒定UV2、診斷試劑在黃酮、黃酮醇類結構測定中的應用 甲醇鈉(NaOCH3) 乙酸鈉(NaOCOCH3) 醋酸鈉/硼酸(NaOCOCH3/H3BO3) 三氯化鋁(AlCl3) 三氯化鋁/鹽酸(AlCl3/HCl)結構鑒定UV甲醇鈉(NaOCH3)-4-OH帶I 紅移40-60 nm 強度不降 有4-OH強度下降 有3-OH,無4-OH含有3,4- 二羥基或3, 3, 4- 三羥基的黃酮類，或其它鄰二羥基，吸收帶隨測定時間延長而衰退結構鑒定UV乙酸鈉(NaOCOCH3)-7-OH帶紅移5-20 nm對堿敏感的基團存在，吸收帶隨測定時間延長而衰退結構

29、鑒定UV醋酸鈉/硼酸(NaOCOCH3/H3BO3)-鄰二酚OH 在醋酸鈉堿性下，鄰二酚OH與硼酸絡合，引起峰帶紅移。B環(huán)有鄰二酚羥基：帶紅移1230nm，A環(huán)有鄰二酚羥基：帶紅移510nm不包括5,6-鄰二酚羥基結構鑒定UV三氯化鋁(AlCl3)、三氯化鋁/鹽酸(AlCl3/HCl)AlCl3/HCl 譜圖AlCl3 ：無鄰二酚羥基AlCl3/HCl 譜圖AlCl3 ：帶I 紫移30-40 nm B環(huán)有鄰二酚羥基分子中有3-OH，5-OH，鄰二酚OH時，可與Al3+絡合，引起吸收峰紅移。鋁絡合物穩(wěn)定性： 黃酮醇3-OH 黃酮5-OH 二氫黃酮5-OH 鄰二酚OH 二氫黃酮醇3-OH結構鑒定U

30、VOOHOOHHOOHOOOOHOOAlAlOOHOOHOOHAl帶I紫移30-40 nm2AlCl3HCl結構鑒定UVAlCl3/HCl 譜圖MeOH：無3-OH或5-OHAlCl3/HCl 譜圖 MeOH：可能有3-OH或5-OHa、帶I 紅移35-55nm, 有5-OH,無3-OHb、帶I 紅移5060nm, 有3-OH或3,5-二OH三氯化鋁(AlCl3)、三氯化鋁/鹽酸(AlCl3/HCl)結構鑒定UV診斷試劑帶II帶I歸屬NaOCH3紅移40-60nm, 強度不降示有4-OH紅移50-60nm, 強度下降示有3-OH, 但無4-OH吸收譜隨時間延長而衰退示有對堿敏感的取代方式NaO

31、Ac紅移5-20nm示有7-OHNaOAc/H3BO3紅移5-10nm示A環(huán)有鄰二酚羥基，但不包括5,6-二羥基紅移12-30nm示B環(huán)有鄰二酚羥基結構鑒定UV診斷試劑帶II帶I歸屬AlCl3及AlCl3/HClAlCl3/HCl譜圖 = AlCl3譜圖 示結構中無鄰二酚羥基AlCl3/HCl譜圖 AlCl3譜圖 示結構中可能有鄰二酚羥基帶I紫移30-40nm示B環(huán)有鄰二酚羥基AlCl3/HCl譜圖 = CH3OH譜圖 示無3-或5-OHAlCl3/HCl譜圖 CH3OH譜圖 示可能有3-或5-OH帶I紅移35-55nm示只有5-OH帶I紅移50-60nm示可能同時有3-和5-OH結構鑒定UV

32、蘆丁的UV光譜CH3OHNaOCH3AlCl3AlCl3/HClNaOCOCH3NaOCOCH3/H3BO3259, 266sh, 299sh, 359272, 327, 410275, 303sh, 433271, 300, 364sh, 402271, 325, 393262, 298, 387結構鑒定練習 結構解析 從中藥中分得一淡黃色結晶A，分子式為C27H30O16，HCl-Mg反響+，Molish反響+，ZrOCl2乙醇液顯黃色，加檸檬酸后黃色不褪。 將A以稀酸加熱水解，有黃色沉淀生成，精制后為結晶B, 母液經PC鑒定有glu，A以箱守法全甲基化后再甲醇解，糖的局部經檢識為3，4，

33、6-三甲基葡萄糖甲苷及2，3，4，6-四甲氧基葡萄糖甲苷。結構鑒定練習A和B的UV光譜數(shù)據如下： UV max(nm) 晶A 晶BMeOH 265 364 267 367NaOMe 265 425(5min消失) 276 422(5min消失)NaOAc 265 385 274 384 AlCl3 266 424 268 424AlCl3/HCl 266 422 269 424NaOAc/H3BO3 265 370 267 372試推測其可能的結構，并說明理由 結構鑒定練習結構鑒定練習常用溶劑: CDCl3、DMSO-d6、C5H5N;當用DMSO-d6 時: 5-OH: ; 7-OH: ;

34、3-OH: 。參加D2O交換后，-OH信號消失。結構鑒定1H NMR氫核磁共振根底知識一NMR根底知識氫核磁共振根底知識二102345678910111213C3CH C2CH2 C-CH3環(huán)烷烴CH2Ar CH2NR2 CH2S CCH CH2C=O CH2=CH-CH31.73CH2F CH2Cl CH2Br CH2I CH2O CH2NO210.512CHCl3 (7.27)910OH NH2 NHCR2=CH-RRCOOHRCHO常用溶劑的質子的化學位移值DNMR根底知識01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.0Chemical shift (d, ppm)Cl2

35、CHCH34 lines;quartet2 lines;doubletCH3CH核磁共振根底知識三NMR根底知識01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.0Chemical shift (d, ppm)BrCH2CH34 lines;quartet3 lines;tripletCH3CH2核磁共振根底知識四NMR根底知識01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.0Chemical shift (d, ppm)BrCH(CH3)27 lines;septet2 lines;doubletCH3CH核磁共振根底知識五NMR根底知識01.02.03.04.05

36、.06.07.08.09.010.0Chemical shift (d, ppm)OCH3HHHHClOCH3核磁共振根底知識六NMR根底知識doublet of doubletsdoubletdoublet核磁共振根底知識七NMR根底知識Chemical shift (d, ppm)ClCH2CH2CH2CH2CH3020406080100120140160180200CDCl3核磁共振根底知識八NMR根底知識Chemical shift (d, ppm)020406080100120140160180200核磁共振根底知識九NMR根底知識Chemical shift (d, ppm)020

37、406080100120140160180200OCCCHCHCHCH2CH2CH2CH3CCH2CH2CH2CH3O核磁共振根底知識十NMR根底知識1H-NMR在黃酮結構分析中的應用A 環(huán)質子 B環(huán)質子 C環(huán)質子 糖上質子 取代基團質子 芳環(huán)質子 芳環(huán)質子 與類型有關 端基質子 -OH、-CH3、 其他質子 -OCH3、-OCOCH3 黃酮類化合物各質子的信號特征、峰形狀、J、峰面積符合芳環(huán)質子規(guī)律結構鑒定1H NMR黃酮類化合物A、B環(huán)的取代模式結構鑒定1H NMR6-H 6.9 (d, J = 2.5 Hz)8-H 6.9 (d, J = 2.5 Hz)6-H信號總比8-H高場H-6H-

38、8黃酮、黃酮醇、異黃酮6.00-6.20, d6.30-6.50, d上述化合物7-O-糖苷6.20-6.40, d6.50-6.90, d二氫黃酮、二氫黃酮醇5.70-5.95, d5.90-6.10, d上述化合物7-O-糖苷5.90-6.10, d6.10-6.40, d5,7-二取代黃酮結構鑒定1H NMR芹菜素5,7-二取代黃酮實例結構鑒定1H NMR5-H 8.2 (d, J = 9.0 Hz)6-H 7.1 (dd, J=9.0, 2.5 Hz)8-H7.0 (d, J = 2.5 Hz)黃酮、黃酮醇、異黃酮二氫黃酮、二氫黃酮醇H-57.90-8.20, d7.70-7.90,

39、dH-66.70-7.10, dd6.40-6.50, ddH-86.70-7.00, d6.30-6.40, d7-取代黃酮結構鑒定1H NMR7-取代黃酮實例刺槐亭結構鑒定1H NMRB環(huán)質子形成H-2,6及H-3,5兩組形成AABB系統(tǒng)總體比A環(huán)質子低場H-2,6比H-3,5低場4-取代黃酮H-2,6H-3,5二氫黃酮類7.10-7.30, d6.50-7.10, d二氫黃酮醇類7.20-7.40, d異黃酮類7.20-7.50, d查耳酮類7.40-7.60, d橙酮類7.60-7.80, d黃酮類7.70-7.90, d黃酮醇類7.90-8.10, d結構鑒定1H NMR4-取代黃酮

40、實例芹菜素結構鑒定1H NMRH-2H-6黃酮類3,4-OH及3-OH,4-OMe7.20-7.30, d7.30-7.50, dd黃酮醇類3,4-OH及3-OH,4-OMe7.50-7.70, d7.60-7.90, dd黃酮醇類3-OMe,4-OH7.60-7.80, d7.40-7.60, dd黃酮醇類3,4-OH,3-O-糖7.20-7.50, d7.30-7.70, dd對于黃酮與黃酮醇H-5 (d, J=8.5 Hz)出現(xiàn)在處H-2(d, J=2.5 Hz)及H-6(dd, J=8.5, 2.5Hz) 出現(xiàn)在異黃酮、二氫黃酮及二氫異黃酮H-2,5,6作為一個多重峰出現(xiàn)在3,4-取代

41、黃酮結構鑒定1H NMR3,4-取代黃酮實例木犀草素結構鑒定1H NMR 假設3 位和5 位取代基相同時，H-2 , H-6 作為一個單峰，出現(xiàn)在。 假設3 位和5 位取代基不相同時， H-2 , H-6 將以不同的化學位移分別作為二重峰出現(xiàn)，J。3,4,5-取代黃酮結構鑒定1H NMR刺槐亭3,4,5-取代黃酮實例結構鑒定1H NMRH-3常作為一個鋒利的單峰信號出現(xiàn)在處，常會與H-6或H-8相混，應注意區(qū)別H-2常作為單峰出現(xiàn)在較低場區(qū) 7.6-7.8 (1H, s, CDCl3) 8.5-8.7 (1H, s, DMSO-d6)黃酮異黃酮結構鑒定1H NMR黃酮類C環(huán)1H NMR實例芹菜

42、素結構鑒定1H NMR黃酮類C環(huán)1H NMR實例奧洛波爾結構鑒定1H NMRH-2 5.2 (1H, dd, Jtrans=11.5, Jcis=5.0 Hz) H-3 2.8 (1H, dd, J=17.0Hz, J=11.5Hz) (1H, dd, J=17.0Hz, J=5.0Hz)二氫黃酮結構鑒定1H NMR黃酮類C環(huán)1H NMR實例甘草素結構鑒定1H NMR二氫黃酮醇二氫黃酮醇3-O糖苷H-24.8-5.0, d, J=11Hz5.0-5.6, d, J=11HzH-34.1-4.3, d, J=11Hz4.3-4.6 , d, J=11Hz二氫黃酮醇結構鑒定1H NMR黃酮類C環(huán)1

43、H NMR實例二氫槲皮素結構鑒定1H NMRH- 6.5-6.7 (1H, d, J=17.0Hz)H- 7.3-7.7 (1H, d, J=17.0Hz)芐氫 6.5-6.7 (1H, s, CDCl3) 6.4-6.9 (1H, s, DMSO-d6)查耳酮橙酮結構鑒定1H NMR糖上H-1黃酮醇3-O-鼠李糖苷5.0-5.1黃酮醇3-O-葡萄糖苷5.7-6.0黃酮類7-O-葡萄糖苷4.8-5.2黃酮類4-O-葡萄糖苷黃酮類5-O-葡萄糖苷黃酮類6-及8-C-糖苷二氫黃酮醇3-O-葡萄糖苷4.1-4.3二氫黃酮醇3-O-鼠李糖苷4.0-4.2糖結構鑒定1H NMR提供成苷位置的信息提供黃酮

44、醇3-OH成苷的糖種類的信息二氫黃酮醇3-OH成苷的糖種類無法區(qū)別黃酮類1H NMR實例芹菜素-7-O葡萄糖苷結構鑒定1H NMRHCH3甲基2.04-2.45 (3H,s)乙酰氧基2.30-2.45 (3H,s)甲氧基 3.45-4.10 (3H,s)5OH： 12 ppm7OH： 11 ppm3OH： 10 ppm其他取代基結構鑒定1H NMR黃酮類化合物骨架結構鑒定13C NMR黃酮類化合物骨架類型C=OC-2/C-C-3/C-類型168.6-169.8137.8-140.7122.1-122.3異橙酮類174.5-184.0160.5-163.2104.7-111.8黃酮類149.8-

45、155.4122.3-125.9異黃酮類147.9136.0黃酮醇類182.5-182.7146.1-147.7111.6-111.9=CH-橙酮類188.0-197.0136.9-145.4116.6-128.1查耳酮類75.0-80.342.8-44.6二氫黃酮類82.771.2二氫黃酮醇類結構鑒定13C NMR質譜在黃酮類化合物鑒定中的應用方法：EI-MS電子轟擊、FD-MS場解吸、FAB-MS快原子轟擊ESI-MS電噴霧苷元：EI-MS可得到分子離子峰(強, 往往為基峰)；苷：用FD-MS、FAB-MS、ESI-MS或將甙作成甲基化或三甲基硅醚化衍生物，再測EI-MS。結構鑒定MS主要

46、碎片離子峰為裂解途徑I 產生的A1和B1 母核確定及裂解途徑II產生的 B2+ A、B-環(huán)取代情況確定裂解途徑I RDA裂解結構鑒定MS裂解途徑II 通常，上述兩種根本裂解途徑是相互競爭、相互制約的。并且，途徑I裂解產生的碎片離子豐度大致與途徑II裂解產生的碎片離子的豐度互成反比。結構鑒定MS結構研究中注意的問題黃酮類6-及8-C-糖苷在常規(guī)酸水解的條件下不能被水解，而是發(fā)生互變，成為6-和8-C-糖苷的混合物。故確定其結構時常用核磁共振技術來解決。結構鑒定化學法：將黃酮類化合物與結構相似的化合物的旋光度進行比較來測定構型。單晶X-衍射法 ：常用方法之一，可信度高，但化合物必須是晶體。核磁共振法： 需使用手性的氘代試劑，利用其引起的化學位移的差異來