臍血干細胞的生產(chǎn)與作用臍血干細胞的生產(chǎn)與作用生產(chǎn)生物技術(shù)及應用

1、江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學院.PAGE 4：.；PAGE 5江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學院畢業(yè)設(shè)計論文SNL/QR7.5.4-3臍血干細胞的消費與作用專業(yè) 生物技術(shù)及運用學生姓名 江曄班級 06生物技術(shù)及運用(1)學號 061401109指點教師 劉遠完成日期2021年6月4日附1：成果評議學號061401109姓名江曄標題臍血干細胞的運用指點教師建議成果：評閱教師建議成果：爭辯小組建議成果：院爭辯委員會評閱意見及評定成果：爭辯委員會主任簽字蓋章：年月日附2：畢業(yè)設(shè)計論文義務書姓名江曄學號061401109班級06生物技術(shù)及運用1班標題臍血干細胞的消費與作用設(shè)計(論文)主要內(nèi)容臍血干細胞的分別冷凍技術(shù)與臍血干細

2、胞在各個領(lǐng)域所發(fā)揚的作用。重點研討問題臍血干細胞分別冷凍的技術(shù)主要技術(shù)目的臍血經(jīng)過分別后有核細胞的回收率到達85%以上，紅細胞的去除率到達50%以上。其它要闡明的問題臍血在冷凍時防凍液的參與必需在2分鐘內(nèi)完成，且參與前必需預冷到4以下。指點教師意見指點教師簽字：年月日附3：指點教師意見對論文的簡短評價：1.指出論文存在的問題及錯誤2.對發(fā)明性任務評價3.建議成果優(yōu)良中及格不及格指點教師簽字年月日評閱教師意見對論文的簡短評價：1.指出論文存在的問題及錯誤2.對發(fā)明性任務評價3.建議成果優(yōu)良中及格不及格評閱教師簽字年月日附4：爭辯小組評議意見學號061401109姓名江曄標題臍血干細胞的消費與作用

3、爭辯小組意見：1、對論文的評價2.建議成果等級優(yōu)良中及格不及格3.需求闡明的問題爭辯小組長簽字年月日江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學院畢業(yè)論文(設(shè)計)江曄：臍血干細胞的消費與作用 6 I臍血干細胞的消費與作用江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學院 06生物技術(shù)1班 江曄摘要：本文引見了臍血干細胞消費上的技術(shù)與臍血干細胞在醫(yī)學上的作用。從臍血干細胞的分別冷凍入手引見了這一前沿科技，從臍血干細胞在醫(yī)療方面的作用表達了臍血干細胞移植作為一種新型醫(yī)療方式的宏大效果。關(guān)鍵詞：臍血干細胞；干細胞的分別與冷凍；疾病治療；抗衰老；Application of umbilical cord blood stem cellsAbstract:

4、In this paper, the production of cord blood stem cells in umbilical cord blood stem cell technology and the role of medicine. From umbilical cord blood stem cells from frozen start to introduce the cutting-edge technology, from the umbilical cord blood stem cells in medical expressed the role of cor

5、d blood stem cell transplantation as a great new way of the effectiveness of health care.Keywords：Cord blood stem cells; disease treatment; anti-aging; stem cell isolation and frozen目錄 前言 本課題的提出1 1 定義：干細胞11.1臍血干細胞的作用1 1.2臍血干細胞的分別和冷凍22 結(jié)論4 3 討論5 3.1冷凍液對臍血的作用及危害5 3.3離心對分別的影響5 3.4程控降溫對細胞的影響5 4 干細胞的前景與展

6、望5 參考文獻6 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學院畢業(yè)論文設(shè)計江曄：臍血干細胞的消費與作用 5 -干細胞是一種神奇的細胞，它可以分化成各種組織細胞，身體的各個部分全部是由干細胞分化而來的。所以干細胞可以治療很多疾病。臍帶血中的干細胞含量最高，把臍血中的干細胞分別出來放入液氮罐中冷凍可以保管最少十年，自體的還可以防止本身的免疫排斥反響。臍血干細胞的移植在醫(yī)學領(lǐng)域扮演著一個萬能藥物的角色，它可以治療白血病，先天性紅斑狼瘡等罹難病癥，并且臍血干細胞還可以運用于保健行業(yè)簡單的說就是可以活化細胞延緩衰老提高人體免疫力等成效?？梢哉f干細胞在人體中的運用到達了一個其他化學類藥物所無法企及的高度。干細胞的分別技術(shù)是其運用

7、于各個領(lǐng)域的根底。1.定義：干細胞(stemcells,SC)是一類具有自我復制才干的多潛能細胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞。是一種未充分分化，尚不成熟的細胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能，醫(yī)學界稱之為“萬用細胞。所以干細胞才可以治療很多罹難雜癥，發(fā)明奇觀，讓病人重獲安康。臍血干細胞：是剛出生的嬰兒的臍帶血中所含的一類干細胞，其分化程度最低，并且對移植者的免疫排斥反響低，在生才干也比成體的干細胞高很多，因此成為干細胞移植的新生寵兒。但臍血中的紅細胞太多，直接打入病人身體中會添加病人身體的負擔加重病情所以干細胞的分別就是要去除多余的紅細胞，隨著HES分別技術(shù)的誕生可以把大部分

8、的紅細胞去除才使得臍血干細胞可以運用于臨床。臍血干細胞的根底和臨床研討1在最近的一、兩年中獲得了快速的開展,對臍血干細胞的生物學特性、采集與凍存、體外擴增及其臨床運用情況進展研討有利于其更廣泛地運用.1.1臍血干細胞的作用臍血分別后，其有核細胞的回收率可以到達85%以上，而紅細胞的含量可以降低到50%以下，經(jīng)過幾天的培育就可以移植入病人體內(nèi)，雖然HIV沒有配型提高了移植的難度，但由于臍血干細胞的低免疫排斥反響所以病人的身體是可以接受的。臍血的來源比骨髓要廣泛的多，并且臍血干細胞是打入靜脈血中的，這樣就免除了手術(shù)的風險和來源的困難，使更多的病人得到及時的治療。臍帶血干細胞移植(HSCT)是目前治

9、療難治性血液病、免疫缺陷病及惡性腫瘤的主要手段之一，而臍帶血作為造血干細胞HSCs)的重要來源，自1988年Gluckman等采用臍帶血移植(UCBT)勝利地治療了l例患Fanconi貧血的5歲兒童以來，目前臨床上采用臍帶血移植治療的疾病曾經(jīng)到達8O余種，治療的患者(包括兒童、成人)全世界已超越6000例J大量的根底研討和臨床實際顯示臍血移植優(yōu)勢明顯2。對于臍血等成體干細胞移植的臨床運用前景，國際醫(yī)學權(quán)威雜志(TheNewEnglandJournalofMedicine)和(Blood)雜志曾對此做過全面的綜述“。UCBT現(xiàn)階段可治療的疾病血色素與血液異常巨細胞缺乏性血小板減少癥(AMT)，再

10、生妨礙性貧血，先天性血球細胞缺乏癥，鐮狀細胞性貧血，地中海性貧血，BlackfanDiamond貧血，Evan綜合征，F(xiàn)ancon貧血，Kostmann綜合征疾病急性淋巴細胞性白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，急性非淋巴細胞性白血病(ANL)，慢性淋巴細胞性白血病(CLL)，慢性骨髓細胞性白血病(CML)，年青型骨髓單核細胞性白血病(JML)，骨髓發(fā)育不良綜合征(MDS)，多發(fā)性骨髓瘤。體性腫瘤腦瘤，何杰金病，非何杰金淋巴瘤，Ew。ng肉瘤，生殖細胞腫瘤，神經(jīng)母細胞瘤,卵巢癌，小細胞性肺癌，睪丸癌。先天性代謝性缺陷腦白質(zhì)腎上腺營養(yǎng)不良癥，淀粉樣變性，巴爾淋巴球綜合征，先天性角化不良

11、，家族性噬紅細胞性淋巴組織細胞增生癥，Gaucher疾病，Gunter疾病，Hunter綜合征，Hurler綜合征，遺傳性神經(jīng)元蠟樣脂褐質(zhì)冷靜癥，Krabbe疾病(嬰兒遺傳性腦白質(zhì)萎縮)，Langerhan細胞組織細胞增生癥，LeschNyhan疾病，骨硬化病(骨質(zhì)石化病)，白細胞黏著缺乏癥。免疫缺陷病變腺嘌呤去氨酵素缺乏(ADA)，慢性肉芽腫疾病(CGD)，嚴重性結(jié)合免疫缺陷疾病(SCIDs)，X一性連鎖性淋巴組織增生疾病(KLP)，WiskottAldrich癥候。自體免疫疾病多發(fā)性硬化癥，風濕性關(guān)節(jié)炎，紅斑性狼瘡3。1.2臍血干細胞的分別和冷凍如今庫存分別干細胞最廣泛的方法是HES羥乙基

12、淀粉沉淀分別法4。可以有效的去除多余紅細胞，保管絕大多數(shù)的有核細胞。從而到達臨床運用的規(guī)范。而冷凍主要是往分別后的臍血中參與DMSO和右旋糖苷配置的防凍液后迅速把溫度降低至零下180并轉(zhuǎn)移至液氮罐中保管。1.2.1庫存臍血干細胞的分別1、器材5ml，10ml，15ml，20ml,30ml,50ml的注射器，EP管，10ml軟試管，100ml轉(zhuǎn)移袋，50ml冷凍袋，止血鉗，滅菌剪刀，超凈任務臺，血漿夾，熱合機，電子秤，酒精燈，碘酒，75%酒精，醫(yī)用棉簽，細菌培育瓶，HES，離心機，天平2、步驟第一步離心 把血液放入超凈任務臺中。用止血鉗夾住皮管，并用碘酒擦拭要剪開的部位擦拭完后用酒精脫碘。用滅菌

13、剪刀剪開止血鉗上部的皮管，取1ml的血液用做有核細胞的讀數(shù)和血型檢測。抽取HES打入血液中，抽取的量約為血液總量的五分之一。把混合后的血液轉(zhuǎn)移至100ml轉(zhuǎn)移袋中，放入離心機中離心7分鐘，離心的時候袋口部位朝下以利于離心后抽去紅細胞。第二步離心，走離心機中取出血液，取的時候盡量防止震蕩以免破壞分層。血液分別后分為三層，上層為透明狀的血漿，中層為半透明的紅細胞與有核細胞的混合體，下層為沉淀的紅細胞。用止血鉗夾住轉(zhuǎn)移袋頂端并掛在超凈臺的頂部使其懸空。用止血鉗夾住皮管，按無菌抄作規(guī)范剪開止血鉗下部，抽去沉淀的紅細胞，抽去的量最少是參與HES的量。熱合剪開部位放入離心機中離心21分鐘。去除多余血漿，

14、走離心機中取出血液，取的時候盡量防止震蕩以免破壞分層。這步離心后分為三層，上層為透明狀的血漿，中層為有核細胞層，下層為剩余紅細胞與有核細胞的混合層。把離心后的血液放入血漿夾中，緩慢夾緊以防止有核細胞的騰起所呵斥的損失。用止血鉗夾住皮管，按無菌操作剪開皮管，緩慢翻開止血鉗放出多余氣體。用注射器抽取15ml血漿打入細菌培育瓶中檢測能否染菌。抽去多余血漿只留下32ml的血液。用無塵布悄然擦拭轉(zhuǎn)移袋外部，把內(nèi)部貼壁的有核細胞擦下。混勻后用注射器抽去0.6ml用作讀數(shù)。有核細胞回收率的計算數(shù)據(jù)如表(1)表1 有核細胞回收率的計算數(shù)據(jù)血液含量有核細胞每ml含量分別前146ml5.71012分別后32ml2

15、0.81012有核細胞回收率=20.8101232(5.71012 146)87%1.2.2庫存臍血干細胞的冷凍配置防凍液 抽取右旋糖酐8ml打入轉(zhuǎn)移袋中，放入冰水混合物中冷卻5分鐘，抽取8mlDMSO緩慢打入轉(zhuǎn)移袋中，混勻。冷卻7分鐘。防凍液與血液混勻 把血液放入冰水混合物中冷卻7分鐘。用注射器抽出防凍液往血液中參與，加的時候要特別緩慢，加一次需求搖50秒左右，使溫度一直在4血液的轉(zhuǎn)移 血液參與防凍液后冷卻7分鐘。用50ml注射器抽出血液，打入防凍袋中。排出防凍袋中的氣泡。這里要留意從抽出血液開場到排出氣泡為止不能超越兩分鐘。程控降溫 把冷凍袋中的血液與冰水混合物一同放入傳送窗。外部人員翻開

16、程控降溫儀，把血液放入程控降溫儀中開場程控降溫。首先調(diào)試溫度，當配型管中的溫度與箱體內(nèi)部溫度堅持恒定時放入血液。點下開場按鈕。終了時血液溫度為-80凍存的臍血干細胞可以保管1020年之久，當嬰兒長大需求用的時候只需求把凍存的臍血復蘇后培育12天就可以運用。相當于買了份生命保證，尤其是自體的臍血干細胞治愈幾率大大提高。此外臍血干細胞從采集時間起24小時內(nèi)分別后經(jīng)23天的培育可以直接用于臨床。1.2.3臨床用臍血干細胞的分別器材預備 50ml離心管，5ml移液管，10ml移液管，10ml軟試管，細菌培育瓶，生理鹽水，淋巴分別液，紅細胞裂解液，培育瓶。第一次離心 把臍血放入超凈任務臺，按無菌操作剪開

17、皮管，把臍血分裝入離心管中1000r每分鐘離心10分鐘。第二次離心 去上清液，加生理鹽水至刻度45ml，用移液槍混勻，用移液槍抽取混勻的血液轉(zhuǎn)移至放有淋巴分別液的離心管中。放入離心機中2000r每分鐘離心21分鐘。由于紅細胞比淋巴分別液重而有核細胞比淋巴分別液輕，所以這一步可以去掉大部分的紅細胞。第三次離心 離心后的血液分為四層，第一層是血漿，第二層呈霧狀為有核細胞層，第三層為淋巴分別液層，最下層是沉淀的紅細胞層。用移液槍深化有核細胞層按畫圈的方法把有核細胞轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加生理鹽水混勻，放入離心機中1000r每分鐘離心10分鐘。第四次離心 離心后有核細胞與剩余的紅細胞沉淀在底部，倒去上層

18、液體加紅細胞裂解液進展裂解，裂解時間不能超越45秒否那么會使有核細胞死亡。加生理鹽水至刻度45ml混勻放入離心機中1000r每分鐘離心10分鐘。第五次離心 倒去上層液體，加生理鹽水至45ml混勻放入離心機中1000r每分鐘離心10分鐘。第六次離心 取上清參與細菌培育瓶中檢測能否染菌。反復第五次離心。細胞培育 每個培育瓶中放15ml的液體培育基。把得到的有核細胞與生理鹽水混勻分裝入培育基中，用移液槍混勻，放入二氧化碳培育箱中培育。有核細胞與生理鹽水混勻后取0.6ml留作讀數(shù)。假設(shè)檢測出染菌那么丟棄。檢測合格的培育25天就可做臨床發(fā)放了。普通一個成年人需求注射的有核細胞數(shù)量不小于5.6108。2.

19、結(jié)論我國的臍血干細胞的技術(shù)還處于開展階段，對于某些消費環(huán)節(jié)還比較模糊，全國范圍內(nèi)的規(guī)范還沒有明確，運用于臨床的臍血干細胞也會發(fā)生染菌呵斥患者病情加重，但要知道我國干細胞科技開展也不過四五年之久，速度曾經(jīng)相當快速了，這就呵斥細節(jié)不是太完善，需求改良的地方還很多。干細胞庫的建立改善了干細胞移植途徑的渠道，而嬰兒保管臍帶血也將成為一種產(chǎn)業(yè)，我國人口眾多使干細胞庫的建立曾經(jīng)刻不容緩。 臍血干細胞在醫(yī)療上的運用越來越廣泛，南京，深圳等大城市都建立起了干細胞移植的點，隨著干細胞對疾病治療的不斷開展更多的點都會建起。置信在不久的未來干細胞移植將為群眾效力，治療疾病，延緩衰老真正的成為一種萬能藥物。3討論3.

20、1冷凍液對臍血的作用及危害防凍液是由DMSO與右旋糖酐按1：1配置的。其中DNSO是高效浸透物質(zhì)，右旋糖酐可以最大程度降低超低溫對細胞的損傷，兩種混合配置的防凍液可以浸透入細胞內(nèi)部到達防凍效果。但DMSO在4對細胞有劇毒，所以對操作的需求很高?，F(xiàn)階段降溫的手段還是冰水混合物降溫。在細胞復蘇的時候是用生理鹽水洗出細胞中殘留的DMSO，假設(shè)沒把DMSO洗出那么會呵斥細胞大量死亡。3.2離心對分別的影響5離心時會產(chǎn)生高熱，有核細胞非常脆弱，一點溫度的差別都會對細胞活力產(chǎn)生影響。所以離心前需求先把離心機降溫。不同分量的臍血所需的離心條件都不同，但消費需求思索效率這樣就把離心條件規(guī)定死了，這樣就使得分量

21、高的臍血離心效果不斷不是太好，主要表如今分層不夠明顯，溶血等，呵斥有核細胞的回收率降低。所以離心條件需求有幾個規(guī)范，而不是就一個規(guī)范。3.3程控降溫對細胞的影響6降溫還是圍繞DMSO。前期溫度不能超越4。降溫分為7步。箱體內(nèi)有對看管，替代血液成分使降溫更準確。首先對看管溫度從4降到-5開場第一步，第二步箱體溫度升高到23，這一步有時升高幅度過大，超越3就會對細胞呵斥影響。第三步箱體溫度降到-5，第四步箱體溫度降到-20，第五步對看管溫度降低到-40，第六步對看管溫度降到-80，第七步終了。拿出血液放入液氮罐中。4.干細胞的前景與展望如今我國的干細胞庫還不是非常健全，還保管在全人工階段，而美國的

22、干細胞庫曾經(jīng)全自動化，大部分的嬰兒都保管了臍血干細胞，這樣就使得安康得到了保證。自動化后的臍血干細胞庫可以保管的臍血與復蘇后的運用勝利率都大大的提高了，我國13億人口每年要有多少的嬰兒出生!這是多么大的一個市場啊，前景將不可限量。 干細胞的運用非常廣泛，21世紀人們的生活理念都傾向于安康與美麗。而干細胞不僅僅是運用于醫(yī)療，其分化成各種組織細胞的才干完全可以改善人體細胞的活力，提高免疫力，活化皮膚細胞，活化頭皮細胞到達保健，美容等效果。而最新的報道說干細胞曾經(jīng)勝利培育成小鼠的皮膚細胞，假以時日假設(shè)可以用干細胞培育出人體的組織和器官那將會使人類的壽命跨出無與倫比的一步。參考文獻1LI Chun; GE Xiao-dong; ZHU J