黃嘌呤氧化酶試劑盒

1、黃嘌吟氧化酶（XOD）測定試劑盒說明書一、測定意義黃嘌吟氧化酶主要存在與哺乳動物的乳汁及肝脾中，屬需要脫氫酶類，是體內(nèi)核酸代謝中的重要酶，在肝細(xì)胞損傷時，此酶早于SGPT釋放于 血清中，并且升高明顯，其對鑒別肝細(xì)胞性黃有明顯的意義，并且在缺氧過程中黃嘌吟脫氫酶很快形成黃嘌吟氧化酶，其對自由基的產(chǎn)生起了重 要的作用。二、測試原理：XOD可催化次黃嘌吟生成黃嘌吟，與此同時產(chǎn)生超氧陰離子自由基，當(dāng)有電子受體及顯色劑存在的情況下，生成紫紅色結(jié)合物，根據(jù)后者生成 量的多少可以推算出XOD的活力。三、試劑組成與配制（50T）試劑一：液體，20ml，3瓶，-20C以下保存，盡量避免反復(fù)凍溶試劑二：液體，5m

2、l，1瓶 4C保存試劑三：液體，6ml，2瓶 4C避光保存試劑四：粉劑，2支，稀釋液0.6ml*2支，-20C以下保存，盡量避免反復(fù)凍溶試劑五：60ml終止液，1瓶 4C保存一、操作：樣本前處理：（1）血清（漿）的測定：血清可直接取樣進(jìn)行檢測；血漿需以3000-3500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，小心吸取澄清的上清進(jìn)行檢測。若仍有渾 濁可反復(fù)離心。（2）紅細(xì)胞的測定：抗凝全血以1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，棄上清，取下層紅細(xì)胞加雙蒸水按1： 49的比例制成溶血待測，配好的溶血 液最好當(dāng)天做檢測，4C存放時間不超過8小時。（3）組織的測定：組織稱重按重量/體積比加9倍的生理鹽水制成10%的勻漿，200

3、0轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘取上清待測。操作表：蒸餾水mla*b*試劑一 ml11試劑二ml0.050.05試劑三ml0.20.2試劑四ml0.020.02混勻，37C水浴20分鐘試劑五ml1.01.0混勻，530nm，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度值。注：a*為蒸餾水量。B*為取樣量，a與b在數(shù)值上相等。五、參考取樣量血清：100ml； 1： 49溶血液50ml； 10%肝組織勻漿25ul-100ul六、計算公式：血清XOD活力（U/L）=（測定管OD值-空白管OD值）/呈色物摩爾消光系數(shù)x （反應(yīng)液總體積/取樣量）x （1/光徑x反應(yīng)時間）溶血液XOD活力（U/gHb）=（測定OD值-空白

4、管OD值）/呈色物摩爾消光系數(shù)x （反應(yīng)液總體積/取樣量）x （1/光徑x反應(yīng)時間）：血紅 蛋白含量（gHb/L）3. 組織XOD活力（U/gprot）=（測定OD值-空白管OD值）/呈色物摩爾消光系數(shù)x （反應(yīng)液總體積/取樣量）x （1/光徑x反應(yīng)時間）：勻漿蛋 白含量（gprot/L） 七、注意點(diǎn)：試劑一、試劑四放-20C保存，盡量避免反復(fù)凍融。組織塊要用生理鹽水漂洗后，濾紙吸干，稱重后0C以下可保存3個月以上。血漿中XOD的檢測：血漿在檢測過程中容易引起混濁，需在測試前以3000-3500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，小心吸取澄清的上清，棄去上層的脂 肪與下層沉淀，若仍有混濁可反復(fù)離心。產(chǎn)品簡介

5、:產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱產(chǎn)品包裝產(chǎn)品價格S0056谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒100次319.00 元谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒（Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit是一種簡單易行的通 過紫外比色來檢測細(xì)胞、組織或其它樣品中谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase）活性的試劑盒。 絕大部分細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽過氧化物酶都是含硒的，且硒為該酶的活性中性組成部分。細(xì)胞內(nèi)也有很少量 的不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶存在。本試劑盒檢測的是最常見的含硒的谷胱甘肽過氧化物酶。本試劑盒如果和總谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒（S0058）配合使用，可以定

6、量檢測出樣品中不含硒的 谷胱甘肽過氧化物酶。谷胱甘肽過氧化物酶可以清除活細(xì)胞內(nèi)過氧化物，在保護(hù)細(xì)胞免受自由基損傷過程中起著關(guān)鍵作用。 細(xì)胞內(nèi)的脂類容易和自由基發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生脂類過氧化物。谷胱甘肽過氧化物酶可以利用還原型谷胱甘肽 （GSH）還原脂類過氧化物，從而消除自由基的毒害作用。谷胱甘肽過氧化物酶幾乎在所有組織中都有分布。在一些病理狀況下谷胱甘肽過氧化物酶的活力會發(fā) 生明顯上調(diào)或下調(diào)。谷胱甘肽過氧化物酶可以利用還原型谷胱甘肽（GSH ）催化過氧化氫以及許多有機(jī)過氧化物，產(chǎn)生水或有 機(jī)醇。如果以過氧化氫為底物進(jìn)行檢測，則同樣可以分解過氧化氫的過氧化氫酶（Catalase）的酶活性會干 擾谷胱甘

7、肽過氧化物酶的測定。本試劑盒利用了一種間接測定的方法。谷胱甘肽過氧化物酶可以催化GSH 產(chǎn)生GSSG，而谷胱甘肽還原酶可以利用NADPH催化GSSG產(chǎn)生GSH，通過檢測NADPH的減少量就可以計算出 谷胱甘肽過氧化物酶的活力水平。在上述反應(yīng)中，谷胱甘肽過氧化物酶是整個反應(yīng)體系的限速步驟，因此 NADPH的減少量和谷胱甘肽過氧化物酶的活力線性相關(guān)。本試劑盒利用了如下的反應(yīng)原理，GPx為谷胱甘肽過氧化物酶，GR為谷胱甘肽還原酶，R-OOH為過氧 化物。2GSH + R-OOH-GSSG + R-OH + HONADPH + H4 + GSSG-*NADP+ + 2GSH本試劑盒提供的有機(jī)過氧化物試

8、劑(t-Bu-OOH)在沒有谷胱甘肽過氧化物酶存在的情況下不會和GSH產(chǎn) 生反應(yīng)，也不會被細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫酶催化而分解。因而可以較為特異地檢測出谷胱甘肽過氧化物酶的活 力。由于t-Bu-OOH不能被不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶所催化，所以本試劑盒可以比較特異地定量檢測最 常見的含硒的谷胱甘肽過氧化物酶?？蓹z測組織勻漿產(chǎn)物、細(xì)胞裂解產(chǎn)物等樣品中谷胱甘肽過氧化物酶的活性。一個試劑盒可進(jìn)行100次 檢測。包裝清單：產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱包裝S0056-1樣品勻漿液100mlS0056-2谷胱甘肽過氧化物酶檢測緩沖液50mlS0056-3谷胱甘肽還原酶40日lS0056-4NADPH5mgS0056-5還原型

9、谷胱甘肽(GSH)14mgS0056-6過氧化物試劑(t-Bu-OOH)200p l說明書1份保存條件：谷胱甘肽還原酶4C保存，其余-20r保存，半年有效NADPH溶解后宜-70C保存，4C可以保存一天， -20C保存一周后NADPH會減少10%以上。GSH在配制成溶液后，適當(dāng)分裝，-20C保存。注意事項(xiàng)：本試劑盒檢測時牽涉到氧化還原反應(yīng)，所有氧化劑或還原劑都會干擾本試劑盒的測定。如果在樣品中 的還原劑無法避免，例如DTT、巰基乙醇等，則這些還原劑的總濃度至少低于0.1mM。0.15mM的DTT可以 抑制40%的酶活力。常用的Triton X-100. Tween 20等去垢劑都含有較高水平的過氧化物，會影響本試劑盒的測定。如果 必須使用這些去垢劑，最好使用純度較高并注明含較低過氧化物的去垢劑。為消除樣品中可能含有的可以消耗NADPH的酶的干擾，可以檢測不加過氧化物試劑的樣品作為對照。樣品可以立即測定，也可以-70C凍存待以后測定。一定要嚴(yán)格控制反應(yīng)時的溫度，否則會引起較多誤差。NADPH不太穩(wěn)定，要嚴(yán)格按照后續(xù)說明操作，謹(jǐn)防失活。谷胱甘肽還原酶配制在接近飽和的硫酸銨溶液中，存放一段時間后容易出現(xiàn)硫酸銨結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象。 室溫孵