蛋白質(zhì)重要性質(zhì)

1、第一張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(一)膠體性質(zhì) 蛋白質(zhì)的分子量1萬-100萬之間，其分子直徑1-100nm之間，在膠體顆粒的范圍。蛋白質(zhì)的水溶液是一種比較穩(wěn)定的親水膠體，這是因?yàn)樵诘鞍踪|(zhì)顆粒表面帶有很多極性基團(tuán)，如NH3、COO-、OH-、SH、CONH2等和水有高度親和性，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與水相遇時，就很容易在蛋白質(zhì)顆粒外面形成層水膜。 第二張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 所以蛋白質(zhì)具有膠體性質(zhì)，如布朗運(yùn)動、光散射、電泳、不能透過半透膜及具有吸附能力等。利用蛋白質(zhì)不能透過半透膜的性質(zhì)，可用羊皮紙、火棉膠、玻璃紙等來分離純化蛋白質(zhì)，這個方法稱透析（dial

2、ysis）。 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(一)膠體性質(zhì)第三張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(二)兩性解離及等電點(diǎn) 蛋白質(zhì)同氨基酸一樣也是兩性電解質(zhì)，即能和酸作用，也能和堿作用。蛋白質(zhì)分子中可解離的基團(tuán)除肽鏈末端的-氨基和-羧基外，主要還是多肽鏈中氨基酸殘基上的側(cè)鏈基團(tuán)如-氨基、-羧基、-羧基、咪唑基，胍基、酚基、疏基等。在一定的pH條件下，這些基團(tuán)能解離為帶電基團(tuán)從而使蛋白質(zhì)帶電。 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)第四張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)（pI）：當(dāng)某蛋白質(zhì)在一定的pH的溶液中，所帶的正負(fù)電荷相等，它在電場中既不向陽極也不向陰極移動，此時溶液的pH值叫做該蛋白質(zhì)的

3、等電點(diǎn)。酸性蛋白、堿性蛋白 蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)與溶液的pH有關(guān)。利用蛋白質(zhì)的兩性解離可以通過電泳分離純化蛋白質(zhì)。四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(二)兩性解離及等電點(diǎn)第五張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 蛋白質(zhì)受到某些理化因素的影響，其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學(xué)功能隨之改變或喪失，但未導(dǎo)致蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的改變，這種現(xiàn)象叫變性作用（denaturation）。 1.蛋白質(zhì)變性的概念2.蛋白質(zhì)變性的因素物理因素：加熱、紫外線、超聲波、高壓等；化學(xué)因素：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、脲、鹽酸胍、去垢劑、重金屬鹽等； (三)蛋白質(zhì)的變性四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)第六張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月生物活

4、性喪失（酶）； 溶解度降低，粘度增大，擴(kuò)散系數(shù)變?。ǖ扒澹换鶊F(tuán)位置改變；對蛋白酶敏感性增大。3.蛋白質(zhì)變性后的表現(xiàn)四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(三)蛋白質(zhì)的變性第七張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月4.蛋白的復(fù)性 蛋白質(zhì)的變性作用若不過于劇烈，則是一種可逆過程。高級結(jié)構(gòu)松散了的變性蛋白質(zhì)通常在除去變性因素后，可緩慢地重新自發(fā)折疊形成原來的構(gòu)象，恢復(fù)原有的理化性質(zhì)和生物活性，這種現(xiàn)象稱為復(fù)性(renaturation)。 大多蛋白質(zhì)變性后，很難復(fù)性。四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(三)蛋白質(zhì)的變性第八張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(四)蛋白質(zhì)的沉淀 加入適當(dāng)試劑使蛋白質(zhì)分子處于等電點(diǎn)狀態(tài)或失

5、去水化層，蛋白質(zhì)的膠體溶液就不穩(wěn)定,并將產(chǎn)生沉淀。能使蛋白質(zhì)沉淀的試劑有：1. 高濃度中性鹽 （NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl（中和蛋白質(zhì)的電荷） 這種加入鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出的現(xiàn)象稱為鹽析，用于蛋白質(zhì)分離制備。2. 有機(jī)溶劑 丙酮、乙醇 (破壞蛋白質(zhì)水膜)四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)第九張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3.重金屬鹽 Hg2+、Ag+、Pb+ （與蛋白質(zhì)中帶負(fù)電基團(tuán)形成不易溶解的鹽,或改變蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)） 4.生物堿試劑 苦味酸、目酸、鎢酸等 （與蛋白質(zhì)中帶正電荷的基團(tuán)生成不溶性鹽）四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(四)蛋白質(zhì)的沉淀第十張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月

6、(五)蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)1. 雙縮脲反應(yīng) 雙縮脲是由兩分子尿素縮合而成的化合物。雙縮脲在堿性溶液中能與硫酸銅反應(yīng)產(chǎn)生紅紫色絡(luò)合物，此反應(yīng)稱雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有許多和雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能起雙縮脲反應(yīng)。通?？捎么朔磻?yīng)來定性鑒定蛋白質(zhì)，也可根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)物的顏色深淺在540nm處進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量測定。 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)第十一張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 酚試劑（Folin-酚試劑）反應(yīng) 蛋白質(zhì)分子中一般都含有酪氨酸，而酪氨酸中的酚基能將Folin-酚試劑中的磷鉬酸及磷鎢酸還原成藍(lán)色化合物（即鉬藍(lán)和鎢藍(lán)的混合物）。這一反應(yīng)常用來定量測定蛋白質(zhì)含量?？筛鶕?jù)反應(yīng)產(chǎn)物的顏色

7、深淺在540nm處進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量測定. 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(五)蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)第十二張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 茚三酮反應(yīng) 由于蛋白質(zhì)多肽鏈兩端有游離的-NH2和-COOH，所以蛋白質(zhì)也可以和茚三酮發(fā)生反應(yīng)。4. 考馬斯亮蘭 與蛋白質(zhì)反應(yīng)形成藍(lán)色透明物質(zhì)，在595nm下進(jìn)行比色。四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(五)蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)第十三張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定1.蛋白質(zhì)分離、純化的過程和一般原則 （1）前處理（Pretreatment）細(xì)胞破碎，蛋白質(zhì)從原來的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來。（2）粗分級（Rough fract

8、ionation） 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)混合物的提取液獲得后，選用一套適當(dāng)分離純化方法，使目的蛋白與大量的雜蛋白分離開。 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)第十四張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月1.蛋白質(zhì)分離、純化的過程和一般原則 （3）細(xì)分級（Fine fractionation） 是將樣品進(jìn)一步提純的過程。樣品經(jīng)粗分級以后，一般體積較小，雜蛋白已經(jīng)大部分被除去。（4）結(jié)晶（Crystal）由于結(jié)晶中從未發(fā)現(xiàn)過變性蛋白質(zhì)，因此蛋白質(zhì)的結(jié)晶不僅是純度的一個標(biāo)志，也是斷定制品處于天然狀態(tài)的有力指標(biāo)。蛋白質(zhì)純度愈高，溶液愈濃就愈容易結(jié)晶。 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第十五張，PPT共三十

9、四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.蛋白質(zhì)分離純化的一般方法 （1）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同的分離方法透析和超濾 透析（dialysis）和超濾（ultrafiltration）四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第十六張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.蛋白質(zhì)分離純化的一般方法 （1）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同的分離方法b. 密度梯度（區(qū)帶）離心 c. 凝膠過濾（gel filtration） 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第十七張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)葡聚糖凝膠過濾第十八張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.

10、蛋白質(zhì)分離純化的一般方法 （2）根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進(jìn)行分離的方法 等電點(diǎn)沉淀（isoelectric precipitation）蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析 有機(jī)溶劑分級分離 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第十九張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.蛋白質(zhì)分離純化的一般方法 （3）根據(jù)蛋白質(zhì)電荷不同的分離方法 電泳-在電場中，帶電顆粒向著與其帶相反電荷的電極移動，這種現(xiàn)象稱電泳（electrophoresis）。四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第二十張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月影響遷移率的因素：電位梯度 電流密度 導(dǎo)電性 環(huán)境pH （

11、分子電荷） 離子強(qiáng)度 分子的大小、形狀 根據(jù)電泳的原理和影響因素可以設(shè)計(jì)不同的電泳方法以達(dá)到預(yù)期的目的四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)第二十一張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月按分離的原理分：區(qū)帶電泳 移界電泳 等速電泳 等電聚焦按有無支持物分：自由電泳 支持物電泳四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)第二十二張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第一代固體介質(zhì)： 紙，醋酸纖維素薄膜，硅膠等 第二代固體介質(zhì)： 淀粉，聚丙烯酰胺 （多用于蛋白質(zhì)）， 瓊脂糖（多用于核酸分離）四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)第二十三張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月聚丙烯酰胺的結(jié)構(gòu)和特點(diǎn)單體：丙烯酰胺，甲叉雙丙烯酰胺增速劑：TEMED（

12、N,N,N,N-四甲基乙二胺）、3-二甲胺丙腈引發(fā)劑：過硫酸銨、過硫酸鉀、核黃素特性：機(jī)械性能、彈性、透明度、粘著度、孔徑大小第二十四張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月電泳原理：1.最主要的特性是蛋白質(zhì)的帶電行為，產(chǎn)生電荷效應(yīng)2.分子篩效應(yīng)3.分子形狀四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)第二十五張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.蛋白質(zhì)分離純化的一般方法 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第二十六張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月（3）根據(jù)蛋白質(zhì)電荷不同的分離方法 b. 離子交換層析（ion-exchange chromatography） 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六

13、)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第二十七張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.蛋白質(zhì)分離純化的一般方法 （3）根據(jù)蛋白質(zhì)電荷不同的分離方法 親和層析法（affinity chromatography） 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第二十八張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3.蛋白質(zhì)分子量的測定方法 凝膠過濾測定蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量 凝膠過濾層析法（gel filtration chromatography）或稱為分子排阻層析（size exclusion）或分子篩層析（molecular sieve chromatography）能夠測定完整的蛋白質(zhì)分子質(zhì)量四.

14、蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第二十九張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3.蛋白質(zhì)分子量的測定方法 (2) SDS（十二烷基硫酸鈉）測定蛋白質(zhì)分子量 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第三十張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.蛋白質(zhì)分子量的測定方法 (3) 毛細(xì)管電泳測定蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量 毛細(xì)管電泳（CE）則可以在很大程度上克服常規(guī)方法時間長、靈敏芽低不利情況。用毛細(xì)管電泳測定蛋白質(zhì)分子量僅需要納克量蛋白質(zhì)，而且還可以用積分儀或電腦聯(lián)機(jī)精確定量。 四.蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)(六)蛋白質(zhì)的的分離、純化與鑒定第三十一張，PPT共三十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.蛋白質(zhì)分子量的測定方法 (4)質(zhì)譜測定蛋白質(zhì)分子量 質(zhì)譜測定蛋白質(zhì)分子量是近年來發(fā)