最新2022年湖南省部分規(guī)模化豬場藍耳病免疫抗體檢測及防控措施

1、最新2022年湖南省部分規(guī)?；i場藍耳病免疫抗體檢測及防控措施2022年湖南省局部規(guī)?；i場藍耳病免疫抗體檢測流行病學調查及防控措施周望平 王慧 邱美珍 楊俊湖南省生豬產業(yè)技術體系、湖南省畜牧獸醫(yī)研究所 長沙 410131摘要：于2022年1月-12月，對湖南局部地區(qū)的9個規(guī)模豬場進行了血清流行流行病學調查，采用ELISA和PCR對豬藍耳進行抗體檢測和病源檢測。結果顯示：經產母豬群的豬藍耳抗體陽性率在89%以上，平均陽性率為94%，S/P值2.5的比例占17%；后備母豬群的豬藍耳抗體陽性率在63%以上，平均陽性率為92%，S/P值2.5的比例占18%；公豬群的豬藍耳抗體陽性率在88%以上，平均

2、陽性率為93%，S/P值2.5的比例占17%；仔豬群的豬藍耳抗體陽性率在67%以上，平均陽性率為76%，S/P值2.5的比例占15%；保育豬30-70日齡豬瘟抗體陽性率在38%以上，平均陽性率為70%，S/P值2.5的比例占15%。另外，在高致病性藍耳病抗原檢測中，共檢出16份陽性樣品，檢出率為26%。數(shù)據(jù)說明：我省規(guī)模豬場的豬藍耳抗體水平陽性率較高，但S/P值2.5的的豬只所占比例大，抗原檢出率高，病野毒感染普遍存在。應做好藍耳防控措施。關鍵詞：豬藍耳病， 抗體，水平 ELISA，抗原，PCR, 流行病血清學調查藍耳病全稱豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征(Porcine reproductive an

3、d respiratory syndrome, PRRS,),是由豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征病毒引起的急性高致死性傳染病，主要引起妊娠母豬的繁殖障礙和仔豬的呼吸道病癥1-2。1987年首次在美國報道該病3，1990 年冬傳入歐洲并迅速在歐洲各國爆發(fā)和流行，目前PRRS已在全世界范圍內流行4。我國于1996年首次別離到豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征病毒5，而后在我國局部省市出現(xiàn)了爆發(fā)流行。2022年夏季, 我國南方地區(qū)發(fā)生以體溫升高、皮膚發(fā)紅和呼吸急促為主要臨床特征的“豬高熱綜合征,很快涉及全國大局部養(yǎng)豬地區(qū)6-7。2022年4月,Tian K等8初步確定此次疫病主要病原為高致病性PRRSV變異株。 近年來

4、，雖然沒有藍耳病的大爆發(fā)流行，但仍是豬病防控的一大難題，已被政府列為強制免疫的疾病之一。本文通過調查湖南省局部地區(qū)規(guī)模豬場PRRS的血清抗體水平和病原情況，以期了解PRRS的流行病學情況野毒感染情況和免疫抗體水平，。為規(guī)?；i場豬PRRS防控提供數(shù)據(jù)參考。材料1.1樣品采集時間2022年1月-2022年12月。1.2血清、和組織樣品的采集地點和樣本數(shù)從湖南岳陽、郴州、益陽、常德等地區(qū)的9個規(guī)模豬場共采集2361份血清樣品，其中經產母豬血樣1048份，后備母豬429份，公豬294份，仔豬288份，保育豬302份。組織樣品62份。具體情況見表1。表1 血清樣品采集登記表豬場編號采樣數(shù)經產母豬后備母

5、豬公豬仔豬保育豬1213562921352836322775136748118-204149691418185924213-68548288374710833153340810130201332915040354332合計10484292942883021.3血清樣品采集和處理血清樣品利用真空采血管于豬耳靜脈大豬和前腔靜脈小豬無菌采血1-2mL，于4下過夜，次日以4000轉/分鐘，離心15分鐘，收集上清于1.5mL管中，-20保存?zhèn)溆?。組織樣品剖檢豬后采集心肝脾肺腎淋巴結，組織勻漿后用于病毒RNA提取。1.4試劑與儀器 豬藍耳抗體檢測試劑盒(PRRSV-X3)購自IDEXX公司；德國Eppen

6、dorf移液器；美國寶特公司ExL800酶標儀。反轉錄試劑盒RevertAidTM first Strand cDNA Synthesis Kit購自Fermentas公司。1.5 免疫情況各規(guī)模豬場豬瘟疫苗和免疫程序都相同。疫苗用的是高致病性藍耳JiangXi-1R株弱毒苗，免疫種豬群按每年3，6，9，12各普疫一次，仔豬在出生后15-21天首免。1.65 引物根據(jù)高致病性藍耳病病毒編碼Nsp2蛋白的基因序列，設計一對引物，引物的擴增片段包括其基因整個缺失區(qū)。擴增片段的理論長度在480 bp左右。2 方法：2.1 豬藍耳病抗體檢測及判定標準S/P=(樣品OD值-標準陰性對照OD值)/(標準陽

7、性對照OD值-標準陰性對照OD值)藍耳抗體ELISA試驗成立條件：標準陽性OD值0.4，標準陰性OD值0.2。判斷標準：陽性值為S/P0.4；陰性值為S/P0.4。2.2 豬藍耳病抗原檢測按常規(guī)法進行病毒RNA的提取，用Fermentas公司的RevertAidTMfirst Strand cDNA Synthesis Kit進行反轉錄合成cDNA。產物作為模板進行PCR，條件為：95，5分鐘；95，30秒，65，30秒，72，30秒；72，7分鐘，35個循環(huán)。PCR產物在1.5%的凝膠上進行電泳分析。23 試驗結果23.1各豬場種豬群藍耳抗體檢測結果表-2 9個規(guī)模豬場種豬群藍耳抗體水平豬場

8、編號階段經產母豬后備母豬公豬檢測數(shù)陽性數(shù)陽性率檢測數(shù)陽性數(shù)陽性率檢測數(shù)陽性數(shù)陽性率S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.512132075597%26%56551398%23%29293100%10%283783394%40%636324100%38%22227100%32%367641196%16%4830263%4%1181041588%13%41491433096%20%69672697%38%14147100%50%59282289%2%4236686%14%13133100%23%

9、68581995%11%4842188%2%2826093%0%7108100393%3%33334100%12%15150100%0%8101962595%25%3028093%0%2018490%20%9150139693%4%4039398%8%35331294%34%合計104899017494%17%4293937992%18%2942745193%17%通過表-12可以看出，9個規(guī)模豬場經產母豬群藍耳S/P值0.4的比陽性率均在89%以上，平均比率為94%，但S/P值2.5的豬只也占一定比重，平均為17%，沒有到達理想水平，其中5場和7場抗體陽性率高，S/P值2.5的豬只所占比率在

10、3%以下，且陽性率也高，豬場生產情況穩(wěn)定免疫效果很理想；1、2、8場S/P值2.5的比例在25%以上，可能存在病毒血癥或野毒感染。3場的后備母豬除3場的抗體陽性率低外，沒有到達合格水平，；其他場的陽性率都在86%以上，但1、2、4場S/P值2.5的比例比擬高，需結合生產實際觀察是否存在野毒感染；6、8場后備母豬抗體陽性率高，S/P值2.5的豬只比率較低，臨床觀察豬群狀態(tài)較好水平非常理想。9個場公豬抗體陽性率都非常較高，都在88%以上，但除了6、7場以外的各場均存在S/P值2.5的豬只，這局部公豬，建議結合臨床需進行隔離觀察。23.2 各豬場商品豬藍耳抗體檢測結果表-3 9個規(guī)模豬場商品豬藍耳抗

11、體水平豬場編號階段仔豬保育豬檢測數(shù)陽性數(shù)陽性率檢測數(shù)陽性數(shù)陽性率S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.5S/P0.4S/P2.512118986%43%3531987%26%277571574%20%5123545%10%3-2018690%30%41817694%33%18185100%28%5-68360672%7%7444960%12%73322267%6%4039898%20%81312492%31%3227484%13%94334079%0%3212038%0%合計2882204276%15%3022124670%15%注：“表示未采樣通過表-3發(fā)現(xiàn)，

12、仔豬抗體水平也比擬高，陽性率均在67%以上，但除了9場以外，其他場S/P值2.5豬只占一定的比例也非常高，可能存在隱性感染或野野毒感染風險或隱性感染；保育豬的抗體平均水平與仔豬差異不大，只有2、6、9場陽性率較低，且9場沒有S/P值2.5的豬只。23.3各規(guī)模豬場藍耳病原檢測結果表-4 9個規(guī)模豬場藍耳病病原檢測情況豬場編號組織樣品數(shù)陽性陰性18442642350547525120126606780886339404合計621626%4674% 由表-4可知，藍耳病原的檢出率為26%，其中1、2、4、8場存在野病毒感染，與抗體檢測結果根本一致，但病毒是來自疫苗毒還是野毒，還有待通過測序進一步探

13、討。24 討論從本次的調查研究發(fā)現(xiàn)，自藍耳病要求強制性免疫以及高致病性毒株藍耳苗的應用以來，湖南省局部地區(qū)的豬只藍耳抗體水平普遍有所提升，大多數(shù)種豬和商品豬都到達了合格抗體水平較高，有一定的保護作用，但由檢測結果也可以看出，S/P值2.5的比例比擬高，再結合藍耳病病原檢測，發(fā)現(xiàn)藍耳病野毒攜帶和感染還十分普遍。因此，做好豬場的藍耳病監(jiān)測，進行風險評估預警是保障豬場不受或少受此病感染的有效防控措施之一。藍耳病主要造成母豬繁殖障礙和仔豬呼吸系統(tǒng)疾病，規(guī)?；i場能夠穩(wěn)定生產和持續(xù)開展關鍵在于保持種豬的健康穩(wěn)定，種豬群攜帶藍耳病毒不僅會使機體免疫力受到抑制，還更會通過垂直傳播或排毒的方式傳染給仔豬。，其

14、次控制好仔豬的藍耳病，以免病毒帶入后備豬群和種豬群。本報告中6、8、9場豬群各階段抗體陽性率較高，抗體強陽性率和抗原檢出率較低，結合生產實際看是藍耳病穩(wěn)定場。而藍耳病主要就是造成母豬繁殖障礙和仔豬呼吸系統(tǒng)疾病，因此，不控制好種豬群和仔豬的抗體水平，會直接關系到整個豬群的發(fā)病及健康狀況。35 防控措施3.1 免疫程序各規(guī)模豬場藍耳病的免疫程序大同小異，本次檢測的9個豬場種豬群按每年3，6，9，12各普疫一次，仔豬在出生后15-21天首免。但在實際生產中，需結合抗體檢測水平進行免疫程序制定，不可死板硬套其他豬場的免疫程序。35.21 藍耳疫苗的選擇和免疫程序目前市面上主要有滅活苗和弱毒苗，弱毒苗又

15、分不同毒株，如經典株、高致病性JiangXi-1R株、CH-1R株等，在生產中各種疫苗都得到了一定的應用。由于藍耳病毒基因亞型及血清型很多, 疫苗保護的毒株和豬場的毒株不一定形成交叉保護，在選擇藍耳疫苗時，最好結合當?shù)匾咔楸O(jiān)測的情況和本豬場的實際情況來定，因高致病性豬藍耳病危害非常大，目前應該首先做好高致病性豬藍耳病疫苗的免疫工作。另外對于同一豬場，最好不要選擇兩種以上毒株的藍耳活疫苗進行免疫，并選擇適合本豬場的免疫程序。35.32 做好隔離馴化對于抗體檢測時S/P值2.5的豬只和被野毒感染及發(fā)病的豬只，要做好隔離觀測措施，尤其是種豬。公豬被感染或存在排毒現(xiàn)象時需進行隔離或淘汰，不能再使用其精

16、液。另外，據(jù)調查發(fā)現(xiàn)大多數(shù)豬場新發(fā)藍耳病均由新進豬只帶進豬場而傳染，因此要做好更新繁殖豬引進后的隔離馴化工作。35.43 做好藥物保健由于藍耳病的毒株基因型非常復雜，而且不同基因型毒株之間交叉保護性差，常常在做好免疫后仍有藍耳病的發(fā)生。因此在做好免疫預防的同時，加強藥物保健也是非常必要的，可在飼料中適量添加微生態(tài)、精氨酸和適量抗生素等保健藥物。35.54 重視生物平安措施規(guī)模豬場日常做好消毒、隔離、防鼠、防蚊等工作，特別是運料車和裝豬車要遠離生產區(qū)，同時做好運豬車的生物平安。4 參考文獻1 Keffaber K. Reproductive failure of unknown etiology

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