儀器分析實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目樣本

1、實(shí)驗(yàn)一苯及其衍生物的紫外吸收光譜的測(cè)繪及溶劑對(duì)紫外吸收光譜的影響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)苯以及苯的一取代物的紫外吸收光譜的測(cè)繪。了解不同助色團(tuán)對(duì)苯的紫外吸收光譜的影響。觀察溶劑極性對(duì)丁酮、異亞丙基丙酮的吸收光譜以及pH對(duì)苯酚吸收光譜 的影響。學(xué)習(xí)并掌握756MC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理具有不飽和結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，特別是芳香族化合物，在近紫外區(qū)(200 400nm)有特征吸收，為鑒定有機(jī)化合物提供了有用的信息。方法是比較未知物與 純的已知化合物在相同條件(溶劑、濃度、pH值、溫度等)下繪制的吸收光譜， 或?qū)⒗L制的未知物的吸收光譜與標(biāo)準(zhǔn)譜圖(如sadtler紫外光譜圖)相比較，如 果兩

2、者一致，說(shuō)明至少它們的生色團(tuán)和分子母核是相同的。苯在230270 nm之間出現(xiàn)的有精細(xì)結(jié)構(gòu)的B帶是其特征吸收峰，中心在 254 nm附近，其最大吸收峰常隨苯環(huán)上取代基不同而發(fā)生位移。三、儀器與試劑儀器756MC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)；帶蓋石英吸收池 (1cm)。10mL具塞比色管3支；5 mL具塞比色管10支；1mL吸量管6支；0.1mL 吸量管2支。試劑苯；乙醇；環(huán)己烷；氯仿；丁酮；異亞丙基丙酮；正己烷。0. 1mol. L-1HC1, 0. 1 mol. L-1 NaOH。苯的環(huán)己烷溶液(1+250);甲苯的環(huán)己烷溶液(1+250);苯酚的環(huán)己烷溶 液(0.3 mg.m

3、L-1);苯甲酸的環(huán)己烷溶液(0. 8 mg.mL-1);苯胺的環(huán)己烷溶液 (1+3000);苯酚的水溶液(0. 4 mg.mL-1)。異亞丙基丙酮，分別用水、氯仿、正己烷配成濃度為0. 4 mg.mL-1的溶 液。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容苯及其一取代物的吸收光譜的測(cè)繪在石英吸收池中，加入兩滴苯，加蓋，用手心溫?zé)嵛粘叵路狡蹋?在紫外分光光度計(jì)上，相對(duì)石英吸收池，從220300nm進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，得到吸 收光譜。在5支5mL具塞比色管中，分別加入苯、甲苯、苯酚、苯甲酸、苯 胺的環(huán)己烷溶液0. 50 mL,用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。在帶蓋的石英吸收池 中，相對(duì)環(huán)己烷，從220320 nm進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，得到吸

4、收光譜。觀察各吸收光譜的圖形，找出其入* 并算出各取代基使苯的入max紅移了 多少。溶劑性質(zhì)對(duì)紫外吸收光譜的影響溶劑極性對(duì)n-n躍遷的影響：在3支5 mL具塞比色管中，各加入 0.02 mL 丁酮，分別用水、乙醇、氯仿稀釋至刻度，搖勻。用石英吸收池，相 對(duì)各自的溶劑，從220350 nm進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，得到吸收光譜。比較它們的入max 的變化，并解釋之。溶劑極性對(duì)n-n*躍遷的影響：在3支10 mL具塞比色管中，依次加 入0.20mL分別用水、氯仿、正己烷配制的異亞丙基丙酮溶液，并分別用水、 氯仿、正己烷稀釋至刻度，搖勻。用石英吸收池，相對(duì)各自的溶劑，從200 300 nm進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，得到吸收

5、光譜。比較吸收光譜入呻的變化，并解釋之。溶液的酸堿性對(duì)苯酚吸收光譜的影響：在2支5 mL具塞比色管中，各 加入苯酚的水溶液0. 50 mL，分別用0. 1 mo1.L-1 HC1， 0. 1 mo1.L-1 NaOH溶 液稀釋至刻度，搖勻。用石英吸收池，相對(duì)水，從220-350 nm進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，得 到吸收光譜。比較吸收光譜的入吟的變化，并解釋之。五、思考題分子中哪類電子的躍遷將會(huì)產(chǎn)生紫外吸收光譜？為什么溶劑極性增大，n-n*躍遷產(chǎn)生的吸收帶發(fā)生紫移，而n-n*躍遷 產(chǎn)生的吸收帶則發(fā)生紅移？實(shí)驗(yàn)二 熒光分光光度法測(cè)定維生素B2一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)熒光分析法的基本原理2、了解熒光分光光度計(jì)的構(gòu)造

6、，掌握其使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理在一定波長(zhǎng)紫外光的照射下，維生素B2會(huì)發(fā)出熒光。在PH6-7的溶液中 熒光最強(qiáng)，在PH11時(shí)熒光消失。在低濃度時(shí)，溶液的熒光強(qiáng)度與溶液中熒光物 質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系。因此，選擇熒光峰值波長(zhǎng)為測(cè)量波長(zhǎng)，測(cè)量維生素B2溶 液的熒光強(qiáng)度，可對(duì)維生素B2進(jìn)行定量分析。本實(shí)驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法來(lái)測(cè)定維 生素B2的含量。三、儀器與試劑儀器 960型熒光分光光度計(jì)、比色皿1個(gè)、50ml容量瓶6個(gè)、5.0ml 吸量管1支試劑 維生素鳥(niǎo)標(biāo)準(zhǔn)溶液、1%醋酸溶液、維生素B2樣品溶液四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、配置標(biāo)準(zhǔn)溶液(實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備)維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液：取維生素B#T 10mg,精密稱定，置1000ml

7、容 量瓶中，用1%醋酸溶解并稀釋至刻度。再精密量取此溶液1.0、2.0、3.0、 4.0、5.0ml分別置50ml容量瓶中，以1%醋酸稀釋至刻度，待測(cè)。維生素鳥(niǎo)樣品溶液：取維生素B2片20片，精密稱定，計(jì)算平均片重。 研細(xì)混勻后，精密稱取2片量的維生素B2片樣品粉未，置1000ml容量瓶中，用1%醋酸 溶解并稀釋至刻度。過(guò)濾。精密取續(xù)濾液2ml,置50ml容量瓶中，以1%醋酸稀釋至刻度。 待測(cè)。(2)維生素鳥(niǎo)樣品溶液：取維生素B2片20片，精密稱定，計(jì)算平均片重。 研細(xì)混勻后，精密稱取2片量的維生素B2片樣品粉未，置1000ml容量瓶中，用 1%醋酸溶解并稀釋至刻度。過(guò)濾。精密取續(xù)濾液2ml,

8、置50ml容量瓶中，以1%醋酸稀釋至刻度。待測(cè)。2、測(cè)定掃描圖譜：選擇EM=200700nm,入騷=365皿(固定波長(zhǎng))對(duì)空白和維生 素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行掃描，找出熒光峰值處對(duì)應(yīng)的入ex呻。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制(F-C):在XExmM下分別測(cè)定上述五種維生素B2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度(INT),然后以濃度(ug/100ml)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度 (INT)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。維生素B樣品溶液中維生素B的含量測(cè)定：將配置好的維生素B樣品222溶液置1cm比色皿中，以1%醋酸為空白，在上述波長(zhǎng)下測(cè)定熒光強(qiáng)度值，從工作曲線上 求出維生素鳥(niǎo)樣品溶液中維生素鳥(niǎo)的濃度。五、數(shù)據(jù)處理及計(jì)算(1)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的

9、繪制編號(hào)12345維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 (ug/100ml)熒光強(qiáng)度(INT)(2)根據(jù)樣品液的F值，從工作曲線上求出維生素B2樣品溶液中維生素B2的濃度。根據(jù)測(cè)得結(jié)果，求算維生素B2片中維生素鳥(niǎo)的含量(mg/片)六、思考題1、熒光法有何優(yōu)缺點(diǎn)？它的適用范圍是什么？實(shí)驗(yàn)三苯系物的氣相色譜分析(TCD)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馍V分析基本原理和苯系物的氣相色譜分析方法。學(xué)習(xí)應(yīng)用峰面積歸一化法計(jì)算各組分的含量。二、實(shí)驗(yàn)原理苯系物系指苯、甲苯、乙苯、二甲苯(包括對(duì)位、間位和鄰位異構(gòu)體) 乃至異丙苯、三甲苯等。在工業(yè)生產(chǎn)中，二甲苯中常存在這些組分，各組分在 固定相上的吸附受各自的吸附平衡常數(shù)控制。當(dāng)流動(dòng)相

10、流過(guò)色譜柱時(shí)，各組分經(jīng) 固定相和流動(dòng)相的作用而產(chǎn)生多次平衡，并不斷放大，最后完全分離。被分離的 組分隨載氣流經(jīng)熱導(dǎo)池檢測(cè)器，產(chǎn)生相應(yīng)的電流響應(yīng)，記錄為色譜圖。在試樣中 全部組分都能出峰的情況下，一般使用歸一化法計(jì)算各組分的含量比較方便， 其計(jì)算式為：C =Mi- X1001n二mii=1m = f AAi = hiy 1；式中C =i物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；A=i物質(zhì)的峰面積；m=i物質(zhì)的質(zhì)量；f =i物質(zhì)iiii的質(zhì)量校正因子；hi物質(zhì)的色譜峰高；y1/2=半峰寬歸一化法的優(yōu)點(diǎn)是計(jì)算簡(jiǎn)便，定量結(jié)果與進(jìn)樣量無(wú)關(guān)，且操作條件不需嚴(yán) 格控制，是常見(jiàn)的一種色譜定量方法。三、儀器1.氣相色譜儀GC-4000A

11、,熱導(dǎo)池檢測(cè)器(TCD) ; 2. A5000色譜工作站；3. 不銹鋼色譜柱，長(zhǎng)2m,內(nèi)徑3mm,載體:101(60-80目)，固定液:5%SE-30； 4. 氮?dú)飧邏轰撈浚?. 5uL注射器；6.皂膜流量計(jì)。四、苯系物分析操作條件及試劑(1)柱溫：90C； (2)汽化溫度：150C； (3)檢測(cè)器溫度：120C； (4)載 氣流速：25-40 mL.min-1； (5)衰減：89； ( 6)橋溫110C； ( 7)進(jìn)樣量 0.5-1UL； (8)試樣：苯系物混合液(苯、甲苯、乙苯等)。利用保留時(shí)間定性在選擇出來(lái)的最佳柱溫和流速下，注入1口1苯系物混合液，同時(shí)按一下 A5000色譜工作站的采樣”啟動(dòng)”(柱箱進(jìn)樣口旁)，即開(kāi)始同步啟動(dòng)信號(hào)采集, 自動(dòng)貯存譜蜂的基本信息，包括：保留時(shí)間、蜂面積、蜂高、半峰寬。在完全相同的條件下，分別注入1口1苯，乙苯標(biāo)準(zhǔn)溶液各2次，記下每一 標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間，求出各自的平均值。與苯系物樣品色譜圖上各組分的保留 值進(jìn)行對(duì)照定性。用歸一化法定量應(yīng)用A5000色譜工作站，按面積歸一化法計(jì)算各組分的百分含量。注意事項(xiàng)儀器必須良好接地。儀器應(yīng)