儀器分析實驗項目樣本

1、實驗一苯及其衍生物的紫外吸收光譜的測繪及溶劑對紫外吸收光譜的影響一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)苯以及苯的一取代物的紫外吸收光譜的測繪。了解不同助色團對苯的紫外吸收光譜的影響。觀察溶劑極性對丁酮、異亞丙基丙酮的吸收光譜以及pH對苯酚吸收光譜 的影響。學(xué)習(xí)并掌握756MC型紫外可見分光光度計的使用方法。二、實驗原理具有不飽和結(jié)構(gòu)的有機化合物，特別是芳香族化合物，在近紫外區(qū)(200 400nm)有特征吸收，為鑒定有機化合物提供了有用的信息。方法是比較未知物與 純的已知化合物在相同條件(溶劑、濃度、pH值、溫度等)下繪制的吸收光譜， 或?qū)⒗L制的未知物的吸收光譜與標(biāo)準(zhǔn)譜圖(如sadtler紫外光譜圖)相比較，如 果兩

2、者一致，說明至少它們的生色團和分子母核是相同的。苯在230270 nm之間出現(xiàn)的有精細(xì)結(jié)構(gòu)的B帶是其特征吸收峰，中心在 254 nm附近，其最大吸收峰常隨苯環(huán)上取代基不同而發(fā)生位移。三、儀器與試劑儀器756MC型紫外可見分光光度計(上海第三分析儀器廠)；帶蓋石英吸收池 (1cm)。10mL具塞比色管3支；5 mL具塞比色管10支；1mL吸量管6支；0.1mL 吸量管2支。試劑苯；乙醇；環(huán)己烷；氯仿；丁酮；異亞丙基丙酮；正己烷。0. 1mol. L-1HC1, 0. 1 mol. L-1 NaOH。苯的環(huán)己烷溶液(1+250);甲苯的環(huán)己烷溶液(1+250);苯酚的環(huán)己烷溶 液(0.3 mg.m

3、L-1);苯甲酸的環(huán)己烷溶液(0. 8 mg.mL-1);苯胺的環(huán)己烷溶液 (1+3000);苯酚的水溶液(0. 4 mg.mL-1)。異亞丙基丙酮，分別用水、氯仿、正己烷配成濃度為0. 4 mg.mL-1的溶 液。四、實驗內(nèi)容苯及其一取代物的吸收光譜的測繪在石英吸收池中，加入兩滴苯，加蓋，用手心溫?zé)嵛粘叵路狡蹋?在紫外分光光度計上，相對石英吸收池，從220300nm進行波長掃描，得到吸 收光譜。在5支5mL具塞比色管中，分別加入苯、甲苯、苯酚、苯甲酸、苯 胺的環(huán)己烷溶液0. 50 mL,用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。在帶蓋的石英吸收池 中，相對環(huán)己烷，從220320 nm進行波長掃描，得到吸

4、收光譜。觀察各吸收光譜的圖形，找出其入* 并算出各取代基使苯的入max紅移了 多少。溶劑性質(zhì)對紫外吸收光譜的影響溶劑極性對n-n躍遷的影響：在3支5 mL具塞比色管中，各加入 0.02 mL 丁酮，分別用水、乙醇、氯仿稀釋至刻度，搖勻。用石英吸收池，相 對各自的溶劑，從220350 nm進行波長掃描，得到吸收光譜。比較它們的入max 的變化，并解釋之。溶劑極性對n-n*躍遷的影響：在3支10 mL具塞比色管中，依次加 入0.20mL分別用水、氯仿、正己烷配制的異亞丙基丙酮溶液，并分別用水、 氯仿、正己烷稀釋至刻度，搖勻。用石英吸收池，相對各自的溶劑，從200 300 nm進行波長掃描，得到吸收

5、光譜。比較吸收光譜入呻的變化，并解釋之。溶液的酸堿性對苯酚吸收光譜的影響：在2支5 mL具塞比色管中，各 加入苯酚的水溶液0. 50 mL，分別用0. 1 mo1.L-1 HC1， 0. 1 mo1.L-1 NaOH溶 液稀釋至刻度，搖勻。用石英吸收池，相對水，從220-350 nm進行波長掃描，得 到吸收光譜。比較吸收光譜的入吟的變化，并解釋之。五、思考題分子中哪類電子的躍遷將會產(chǎn)生紫外吸收光譜？為什么溶劑極性增大，n-n*躍遷產(chǎn)生的吸收帶發(fā)生紫移，而n-n*躍遷 產(chǎn)生的吸收帶則發(fā)生紅移？實驗二 熒光分光光度法測定維生素B2一、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)熒光分析法的基本原理2、了解熒光分光光度計的構(gòu)造

6、，掌握其使用方法。二、實驗原理在一定波長紫外光的照射下，維生素B2會發(fā)出熒光。在PH6-7的溶液中 熒光最強，在PH11時熒光消失。在低濃度時，溶液的熒光強度與溶液中熒光物 質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系。因此，選擇熒光峰值波長為測量波長，測量維生素B2溶 液的熒光強度，可對維生素B2進行定量分析。本實驗采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法來測定維 生素B2的含量。三、儀器與試劑儀器 960型熒光分光光度計、比色皿1個、50ml容量瓶6個、5.0ml 吸量管1支試劑 維生素鳥標(biāo)準(zhǔn)溶液、1%醋酸溶液、維生素B2樣品溶液四、實驗內(nèi)容1、配置標(biāo)準(zhǔn)溶液(實驗室準(zhǔn)備)維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液：取維生素B#T 10mg,精密稱定，置1000ml

7、容 量瓶中，用1%醋酸溶解并稀釋至刻度。再精密量取此溶液1.0、2.0、3.0、 4.0、5.0ml分別置50ml容量瓶中，以1%醋酸稀釋至刻度，待測。維生素鳥樣品溶液：取維生素B2片20片，精密稱定，計算平均片重。 研細(xì)混勻后，精密稱取2片量的維生素B2片樣品粉未，置1000ml容量瓶中，用1%醋酸 溶解并稀釋至刻度。過濾。精密取續(xù)濾液2ml,置50ml容量瓶中，以1%醋酸稀釋至刻度。 待測。(2)維生素鳥樣品溶液：取維生素B2片20片，精密稱定，計算平均片重。 研細(xì)混勻后，精密稱取2片量的維生素B2片樣品粉未，置1000ml容量瓶中，用 1%醋酸溶解并稀釋至刻度。過濾。精密取續(xù)濾液2ml,

8、置50ml容量瓶中，以1%醋酸稀釋至刻度。待測。2、測定掃描圖譜：選擇EM=200700nm,入騷=365皿(固定波長)對空白和維生 素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液進行掃描，找出熒光峰值處對應(yīng)的入ex呻。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制(F-C):在XExmM下分別測定上述五種維生素B2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強度(INT),然后以濃度(ug/100ml)為橫坐標(biāo)，熒光強度 (INT)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。維生素B樣品溶液中維生素B的含量測定：將配置好的維生素B樣品222溶液置1cm比色皿中，以1%醋酸為空白，在上述波長下測定熒光強度值，從工作曲線上 求出維生素鳥樣品溶液中維生素鳥的濃度。五、數(shù)據(jù)處理及計算(1)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的

9、繪制編號12345維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 (ug/100ml)熒光強度(INT)(2)根據(jù)樣品液的F值，從工作曲線上求出維生素B2樣品溶液中維生素B2的濃度。根據(jù)測得結(jié)果，求算維生素B2片中維生素鳥的含量(mg/片)六、思考題1、熒光法有何優(yōu)缺點？它的適用范圍是什么？實驗三苯系物的氣相色譜分析(TCD)一、實驗?zāi)康牧私馍V分析基本原理和苯系物的氣相色譜分析方法。學(xué)習(xí)應(yīng)用峰面積歸一化法計算各組分的含量。二、實驗原理苯系物系指苯、甲苯、乙苯、二甲苯(包括對位、間位和鄰位異構(gòu)體) 乃至異丙苯、三甲苯等。在工業(yè)生產(chǎn)中，二甲苯中常存在這些組分，各組分在 固定相上的吸附受各自的吸附平衡常數(shù)控制。當(dāng)流動相

10、流過色譜柱時，各組分經(jīng) 固定相和流動相的作用而產(chǎn)生多次平衡，并不斷放大，最后完全分離。被分離的 組分隨載氣流經(jīng)熱導(dǎo)池檢測器，產(chǎn)生相應(yīng)的電流響應(yīng)，記錄為色譜圖。在試樣中 全部組分都能出峰的情況下，一般使用歸一化法計算各組分的含量比較方便， 其計算式為：C =Mi- X1001n二mii=1m = f AAi = hiy 1；式中C =i物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；A=i物質(zhì)的峰面積；m=i物質(zhì)的質(zhì)量；f =i物質(zhì)iiii的質(zhì)量校正因子；hi物質(zhì)的色譜峰高；y1/2=半峰寬歸一化法的優(yōu)點是計算簡便，定量結(jié)果與進樣量無關(guān)，且操作條件不需嚴(yán) 格控制，是常見的一種色譜定量方法。三、儀器1.氣相色譜儀GC-4000A

11、,熱導(dǎo)池檢測器(TCD) ; 2. A5000色譜工作站；3. 不銹鋼色譜柱，長2m,內(nèi)徑3mm,載體:101(60-80目)，固定液:5%SE-30； 4. 氮氣高壓鋼瓶；5. 5uL注射器；6.皂膜流量計。四、苯系物分析操作條件及試劑(1)柱溫：90C； (2)汽化溫度：150C； (3)檢測器溫度：120C； (4)載 氣流速：25-40 mL.min-1； (5)衰減：89； ( 6)橋溫110C； ( 7)進樣量 0.5-1UL； (8)試樣：苯系物混合液(苯、甲苯、乙苯等)。利用保留時間定性在選擇出來的最佳柱溫和流速下，注入1口1苯系物混合液，同時按一下 A5000色譜工作站的采樣”啟動”(柱箱進樣口旁)，即開始同步啟動信號采集, 自動貯存譜蜂的基本信息，包括：保留時間、蜂面積、蜂高、半峰寬。在完全相同的條件下，分別注入1口1苯，乙苯標(biāo)準(zhǔn)溶液各2次，記下每一 標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時間，求出各自的平均值。與苯系物樣品色譜圖上各組分的保留 值進行對照定性。用歸一化法定量應(yīng)用A5000色譜工作站，按面積歸一化法計算各組分的百分含量。注意事項儀器必須良好接地。儀器應(yīng)