病原微生物評估報(bào)告

1、病原微生物評估報(bào)告病原微生物風(fēng)險(xiǎn)評估報(bào)告模板1、生物風(fēng)險(xiǎn)評估依據(jù)1）病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例2）實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求3）人間傳染的病原微生物名錄4）WHO實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊2、生物風(fēng)險(xiǎn)評估要素1）病原微生物特征；2）病原微生物相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動；3）實(shí)驗(yàn)活動人員；4）實(shí)驗(yàn)活動的設(shè)施、設(shè)備和環(huán)境；5）風(fēng)險(xiǎn)認(rèn)定和評估結(jié)論。3生物風(fēng)險(xiǎn)評估實(shí)施3.1病原微生物特征的評估1）一般生物學(xué)特性：病原微生物起源、基因組及編碼、產(chǎn)物形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、細(xì)菌或病毒屬別和型別內(nèi)容或技術(shù)鑒定。2）致病性：臨床癥狀、潛伏期、病程、感染劑量、入侵部位、宿主類型、否產(chǎn)生毒素等。3）感染途徑：呼吸道、消化道、血液、媒介、

2、皮膚感染等。4）環(huán)境中的穩(wěn)定性：是指其抵抗外界環(huán)境的存活能力，不同的微生物的穩(wěn)定性不同，對病原微生物的穩(wěn)定性評估除考慮其在自然界中的穩(wěn)定性外，還應(yīng)考慮其對物理因素與化學(xué)消毒劑的敏感性。5）致病性和感染劑量：不同病原的致病性不同，即使同類病原不同菌（毒）株也有不同強(qiáng)度的致病力；另微生物的致病性與被感染者的免疫狀態(tài)、易感性有關(guān)；暴露后果取決于病原微生物的致病性和機(jī)體的抵抗力；不同屬、種、亞種、型的病原微生物，甚至不同株的病原微生物，其致病性各異；還取決于所感染病原微生物的劑量，當(dāng)大量病原微生物侵襲人體時(shí)，潛伏期一般較短，而病情則較為嚴(yán)重；不同個(gè)體被傳染后，可產(chǎn)生各種不同的結(jié)局。6）傳播途徑：傳播方

3、式包括呼吸道傳播、通過水和食物等消化道傳播、接觸傳播、血液傳播、母嬰垂直傳播、媒介傳播等；傳播結(jié)果包括一種病原可有多種傳播途徑和多種病原可以引起相同的癥狀。7）實(shí)驗(yàn)動物研究、實(shí)驗(yàn)室感染。8）有效的預(yù)防和治療措施：有效的藥物、有效疫苗、疾病監(jiān)測手段、有效的預(yù)防控制措施手段。3.2病原微生物實(shí)驗(yàn)活動的評估1）實(shí)驗(yàn)活動：是指實(shí)驗(yàn)室從事與人病原微生物的菌（毒）種、樣本有關(guān)的研究、教學(xué)培訓(xùn)、檢測等活動。2）實(shí)驗(yàn)活動的類型包括：標(biāo)本或樣品處理、離心、勻漿、超聲、移液操作、銳器的使用、生物安全柜使用、醫(yī)療廢物消毒或高壓滅菌處理等。3）實(shí)驗(yàn)活動風(fēng)險(xiǎn)影響因素：3a.氣溶膠產(chǎn)生：離心、旋轉(zhuǎn)、勻漿、接種環(huán)等。b.潛

4、在傷害：注射器等銳器、酒精燈、玻璃器皿等。c.標(biāo)本的濃縮：來自臨床、現(xiàn)場、培養(yǎng)、濃縮等。d.毒株和細(xì)胞：野毒、減毒、疫苗株、毒素產(chǎn)生等。e.操作指導(dǎo)書。4)病原微生物動物實(shí)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)因素a.標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理程序。b.化學(xué)消毒劑選擇、配置和使用。c.物理消毒設(shè)備的使用和維護(hù)。d.各種實(shí)驗(yàn)材料、器具，尤其是銳器處理。e.動物實(shí)驗(yàn)動物及其排泄物處理。5)廢棄物處理風(fēng)險(xiǎn)影響因素:a.標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理程序。b.化學(xué)消毒劑選擇、配置和使用。c.物理消毒設(shè)備的使用和維護(hù)。d.各種實(shí)驗(yàn)材料、器具，尤其是銳器處理。e.動物實(shí)驗(yàn)動物及其排泄物處理。3.3實(shí)驗(yàn)活動人員要求評估1）健康狀況和健康歷史、耐藥和過

5、敏。2）人員資質(zhì)和心里素質(zhì)。3）生物安全知識。4）微生物學(xué)專業(yè)知識。5）操作設(shè)施設(shè)備技能。6）免疫狀況。7）培訓(xùn)狀況。8）應(yīng)急事件處理能力。3.4設(shè)施、環(huán)境和設(shè)備因素要求評估1）生物安全實(shí)驗(yàn)室相應(yīng)等級的設(shè)施。2）實(shí)驗(yàn)室生物安全的設(shè)備。3）實(shí)驗(yàn)室檢測相關(guān)設(shè)備。4）應(yīng)急設(shè)施。5）設(shè)施設(shè)備管理、維護(hù)、校準(zhǔn)和檢驗(yàn)。3.5風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)論（降低風(fēng)險(xiǎn)的措施）：1）病原微生物風(fēng)險(xiǎn)分類2）實(shí)驗(yàn)活動與相應(yīng)的設(shè)施設(shè)備要求3）個(gè)人防護(hù)裝備要求4）人員生物安全和專業(yè)技術(shù)資質(zhì)要求5）人員健康和素質(zhì)要求6）預(yù)防和治療措施要求7）菌（毒）種和實(shí)驗(yàn)活動等風(fēng)險(xiǎn)管理要求8）應(yīng)急預(yù)案和措施要求4、生物安全委員會負(fù)責(zé)審核病原微生物風(fēng)險(xiǎn)評

6、估報(bào)告的適宜性與科學(xué)性，并做出評估結(jié)論。生物因子生物危害評估報(bào)告模板*菌危害評估報(bào)告一、危害程度分類(一)分類等級(二)不同實(shí)驗(yàn)操作生物安全實(shí)驗(yàn)室級別要求二、背景資料(一)一般生物學(xué)特性1形態(tài)染色2培養(yǎng)特性(二)在外界環(huán)境的穩(wěn)定性1在自然環(huán)境中的穩(wěn)定性與對溫度的敏感性2對日光與紫外線的敏感性3對化學(xué)因子的敏感性(三)致病性和感染數(shù)量(四)傳播途徑及暴露的后果1傳播途徑2暴露后后果(五)*菌的宿主范圍(六)*菌的預(yù)防、診斷和治療1預(yù)防2診斷3治療三、實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動及其危險(xiǎn)性與預(yù)防措施(一)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動背景資料1實(shí)驗(yàn)活動內(nèi)容2實(shí)驗(yàn)涉及的*菌菌毒種背景資料3實(shí)驗(yàn)室*菌感染動物與培養(yǎng)物最高存量(二)

7、可能造成不良后果的因素與預(yù)防措施1實(shí)驗(yàn)樣品的接收與開啟擬采取防護(hù)措施：2實(shí)驗(yàn)樣品涂片擬采取防護(hù)措施：3*菌接種培養(yǎng)擬采取防護(hù)措施：4*菌培養(yǎng)物與動物器官細(xì)菌再分離樣品制備擬采取防護(hù)措施：5實(shí)驗(yàn)樣品的研磨6*菌的攻擊擬采取防護(hù)措施：7感染動物的飼養(yǎng)8感染動物的解剖9動物血清標(biāo)本與未經(jīng)滅活組織標(biāo)本采集10病理觀察用組織標(biāo)本的采集11實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備12實(shí)驗(yàn)動物的病原微生物潛伏感染13培養(yǎng)物與實(shí)驗(yàn)廢棄物銷毀14室內(nèi)空氣、實(shí)驗(yàn)用品以及操作臺面污染15菌種以及培養(yǎng)物保藏(三)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動危害評估四、工作人員素質(zhì)五、評估結(jié)論附表*菌實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動風(fēng)險(xiǎn)評估*實(shí)驗(yàn)室工作人員個(gè)人素質(zhì)評價(jià)表金黃色葡萄球菌的生物危害

8、評估報(bào)告一、金黃色葡萄球菌的傳播與致病金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，在空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的機(jī)會很多。金黃色葡萄球菌腸毒素是個(gè)世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個(gè)細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)一般有如下特點(diǎn)：季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報(bào)道；上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：

9、食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴(yán)，運(yùn)輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳腺炎或禽畜局部化膿時(shí)，對肉體其他部位的污染。而腸毒素形成條件包括：存放溫度，在37內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時(shí)間越短；存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時(shí)含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。葡萄球菌性菌血癥可發(fā)生于任何與血管內(nèi)導(dǎo)管或其他異物有關(guān)的局限性葡萄球菌膿

10、腫或感染,它是嚴(yán)重?zé)齻∪怂劳龅某Ｒ娫?。持續(xù)性發(fā)熱常見,而且可伴有休克。葡萄球菌性心內(nèi)膜炎特別好發(fā)于靜脈注射給藥者和裝有人工心臟瓣膜的病人。突然出現(xiàn)心臟雜音,膿毒性栓子和其他經(jīng)典體征便可作出可疑診斷,確診需依據(jù)超聲心動圖和血培養(yǎng)。葡萄球菌性骨髓炎主要見于兒童,可引起寒戰(zhàn),發(fā)熱和受累骨疼痛,繼之出現(xiàn)紅腫。關(guān)節(jié)周圍感染常引起關(guān)節(jié)積液,提示為化膿性關(guān)節(jié)炎而不是骨髓炎。白細(xì)胞計(jì)數(shù)常15000/l并且血培養(yǎng)常陽性。X線變化在1014日內(nèi)不明顯,骨質(zhì)疏松和骨皮質(zhì)反應(yīng)甚至更長時(shí)間仍不能測出,而放射性核素骨掃描則常能較早出現(xiàn)異?！，F(xiàn)在葡萄球菌性小腸結(jié)腸炎很罕見,但若住院病人出現(xiàn)發(fā)熱,腸梗阻,腹痛和腹脹,低血

11、壓或腹瀉,特別是新近作過腹部手術(shù)或接受過抗生素者,可提示本病。若糞便鏡檢發(fā)現(xiàn)大片的嗜中性白細(xì)胞和革蘭氏陽性球菌,則可能作出診斷,但必須排除產(chǎn)毒性艱難梭狀芽胞桿菌感染,這是抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎最常見的原因。金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血毒素：外毒素，分、四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)；d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能

12、耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E及F五種血清型。腸毒素可耐受100C煮沸30分鐘而不被破壞。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。二、金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8m左右，顯微鏡下呈單個(gè)、成雙以及排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬，無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性衰老、死亡和被白細(xì)胞吞噬后的菌體革蘭染色呈陰性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，

13、最適生長溫度3537、最適生長pH7.47.6。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10-15%NaCl肉湯中生長?？煞纸馄咸烟?、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。三、金黃色葡萄球菌的檢測與診斷1.標(biāo)本采集采自不同感染部位的各種標(biāo)本，包括血液、腦脊液、穿刺液；痰液、膿液、創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。2.直接涂片鏡檢直接涂片檢查在正常情況下呈無菌狀態(tài)的體液標(biāo)本如血液、腦脊液、穿刺液等，若有檢出革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列、

14、無芽胞、莢膜，直徑0.5-1m的球菌。即具有重要的臨床價(jià)值。3.分離培養(yǎng)可以選用普通營養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基。該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長；若接種于瓊脂平板上35培養(yǎng)，每隔半小時(shí)觀察一次，連續(xù)觀察6小時(shí)，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時(shí)，內(nèi)容物不流動，判為陽性。（2）耐熱核酸酶試驗(yàn)：將24小時(shí)肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板，35培養(yǎng)24小時(shí)，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗(yàn)金黃色葡萄球菌為陽性。（3）甘露醇發(fā)酵實(shí)驗(yàn)金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇。（4）Staphaurex膠乳凝集實(shí)驗(yàn)是鑒定金黃色葡萄球菌的

15、一種快速、簡便的商品化直接凝集試驗(yàn)。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然后用接種環(huán)挑取待鑒定菌株的新鮮培養(yǎng)物加入混勻，若出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象即為陽性。5.生化鑒定如上述，注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點(diǎn)：PYR（吡咯烷酮-萘基酰胺試驗(yàn)陰性；VP試驗(yàn)陽性；鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)陰性。6.免疫學(xué)方法用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體。7.分子生物學(xué)方法包括PFGE脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。四、金黃色葡萄球菌的防治及生物安全防護(hù)一、細(xì)菌的防治金黃色葡萄球菌的控制主要包括：1）防止金黃色葡萄球菌污染食品，防止帶菌人群對各種食物的污染：定期

16、對生產(chǎn)加工人員進(jìn)行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時(shí)停止其工作或調(diào)換崗位。防止金黃色葡萄球菌對奶及其制品的污染：如牛奶廠要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至-10以下，以防毒素生成、細(xì)菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶為原料，注意低溫保存。對肉制品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其他適當(dāng)方式處理后進(jìn)行加工生產(chǎn)。2）防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成應(yīng)在低溫和通風(fēng)良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風(fēng)陰涼地方也不應(yīng)超過6小時(shí)，并且食用前要

17、徹底加熱。3）無菌措施(如檢查病人前后徹底洗手和消毒合用的器械)至關(guān)重要。已被感染的病人應(yīng)與其他易感病人隔離,患有活動性葡萄球菌感染,即使是局部性的感染(如癤)的醫(yī)護(hù)人員,在其感染治愈前不得接觸病人或器械。無癥狀的鼻腔帶菌者,除非所帶菌株十分危險(xiǎn)或被懷疑為暴發(fā)流行的傳染源,一般不必隔離。治療包括膿腫引流,抗生素(重癥病人需腸外給藥)和全身支持療法。培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)在開始治療前或更換抗生素之前獲取?？股氐倪x擇和劑量取決于感染的部位,疾病的嚴(yán)重程度和細(xì)菌對藥物的敏感性。醫(yī)院獲得的葡萄球菌和大多數(shù)社區(qū)獲得的菌株,通常對青霉素G,氨芐青霉素和抗假單胞菌青霉素有耐藥性。大多數(shù)菌株對耐青霉素酶青霉素(甲氧苯青

18、霉素,苯甲異噁唑青霉素,乙氧萘青霉素,鄰氯青霉素,雙氯青霉素),頭孢菌素(頭孢菌素,頭孢唑啉,頭孢菌素,頭孢拉定,頭孢羥唑,頭孢西丁和第三代頭孢菌素),卡巴培南類(亞胺培南,美羅匹寧),慶大霉素,萬古霉素,替考拉寧,林可霉素和氯林可霉素,是敏感的。雖然頭孢菌素和萬古霉素都有效,但通常首選一種耐青霉素酶的青霉素。很多葡萄球菌菌株對紅霉素,四環(huán)素類藥物,氨基糖苷類,桿菌肽和氯霉素也敏感,但因有更好更安全的藥可用,故很少使用氯霉素和桿菌肽。目前耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株日益增多，這種細(xì)菌雖可從社區(qū)獲得感染的病人中分離得到,但多數(shù)是從感染的靜脈吸毒者和重癥監(jiān)護(hù)室的病人中分離獲得。MR

19、SA菌株通常對耐-內(nèi)酰胺酶青霉素,頭孢菌素和卡巴培南類有耐藥性。這些細(xì)菌對氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)酯類(紅霉素,克拉霉素,阿齊霉素,林可霉素和氯林可霉素)的耐藥性也很普遍。雖然亞胺培南-西拉司丁或喹諾酮類對某些MRSA感染是有效的,但靜脈注射萬古霉素為首選。腎功能正常成人的通用劑量是每6小時(shí)靜脈注射500mg或每12小時(shí)靜滴注1000mg,至少在1小時(shí)內(nèi)滴完。腎功能受損時(shí),劑量應(yīng)根據(jù)血清中藥物的濃度加以調(diào)整,療程視感染部位及病人的反應(yīng)而定,但一般為24周。某些嚴(yán)重的或有并發(fā)癥的感染,可能需要靜脈給藥治療68周,然后再口服治療1個(gè)月或更長時(shí)間?？捎糜谔娲f古霉素治療MRSA感染的藥物有：TMP-SMZ

20、,成人劑量為TMP1015mg/(kg.d)加SMZ5075mg/(kg.d),分劑口服或腸外給藥,每次間隔8小時(shí)或12小時(shí),連續(xù)24周；利福平(600mg/d)口服或腸外給藥；腸外給亞胺培南-西拉司丁(500mg每6小時(shí)1次)或美羅匹寧(0.51.0g每8小時(shí)1次。但利福平不要單獨(dú)應(yīng)用,因?yàn)榧?xì)菌很易產(chǎn)生抗藥性。在治療異物相關(guān)性MRSA感染或漿膜腔MRSA感染時(shí),利福平和氨基糖苷類是有用的輔助藥物。鄰氯青霉素,雙氯青霉素,TMP-SMZ,環(huán)丙沙星及局部用莫匹羅星(mupirocin)可用于治療MRSA帶菌狀態(tài),但MRSA對這些藥物可產(chǎn)生抗藥性?？谷f古霉素的腸球菌(VRE)菌株的流行日益增加,這

21、種菌株在實(shí)驗(yàn)室中可將引起抗萬古霉素的基因轉(zhuǎn)為凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌菌株,而在感染的病人中則轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂戈幮云咸亚蚓蛛x株?？墒沁@些葡萄球菌很容易對治療這類感染的其他藥物產(chǎn)生抗藥性。桿菌肽,若有的話,可試用于治療抗萬古霉素的葡萄球菌感染。對這些病人應(yīng)嚴(yán)格隔離,以防他們的細(xì)菌傳播。二、細(xì)菌的生物安全防護(hù)根據(jù)病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）金黃色葡萄球菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：（1）操作要求1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱

22、中。3、所有的操作過程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。4、對于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5、注射和吸取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。6、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。7、所有的

23、培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評估、觀察、治療，保留書面記錄。9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其他傳染源污染后，?shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安

24、全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域時(shí)，防護(hù)服必須留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理，也可以

25、在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時(shí)，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實(shí)驗(yàn)室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。淋病奈瑟菌的生物危害評估報(bào)告一、淋病奈瑟菌的傳播與致病淋病奈瑟菌又稱淋球菌，是淋病的病原菌，人類是本菌的唯一天然宿主和傳染源。淋病是淋菌性尿道炎的簡稱，是由淋球菌引起的泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎性疾病，它是人類很古老的，也是當(dāng)前世界范圍內(nèi)流行非常廣泛的一種性傳播疾病。淋病患者是主要傳染源，有癥狀或無癥狀的患者均可通過性接觸傳播，其中輕癥或無癥狀的淋病患者是重要的傳染源

26、。其傳播途徑主要包括性交傳染，還可通過非性接觸傳播，如通過接觸患者分泌物污染的用品（衣褲、床上用品、毛巾、浴盆、馬桶等）間接感染；孕婦淋病患者當(dāng)羊膜破裂，可繼發(fā)羊膜腔內(nèi)及胎兒感染；新生兒經(jīng)過患淋病的母體產(chǎn)道時(shí)常可引起淋菌性眼炎；另外尚可通過醫(yī)護(hù)人員的手和器具引起醫(yī)源性感染。本病最初多侵犯尿道、宮頸內(nèi)膜，繼而可波及前列腺、精囊、副睪、子宮內(nèi)膜及輸卵管。有時(shí)肛門、直腸、咽粘膜、眼結(jié)膜也可受染。尚可經(jīng)血行播散引起菌血癥、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及腦膜炎，可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狹窄等后果。由于本病潛伏期短、傳染性強(qiáng)、后果嚴(yán)重，因此它是我國當(dāng)前重點(diǎn)防治的性病之一。二、淋病奈瑟菌的生物學(xué)特性淋病奈瑟菌

27、屬奈瑟菌屬，鏡下呈腎形，常成雙排列，鄰近面扁平或稍凹，像兩瓣黃豆對在一起，大小0.6m0.8m。革蘭氏染色陰性，呈粉紅色，美藍(lán)染色呈藍(lán)色。急性炎癥期細(xì)菌多在患者分泌物的少部分中性粒細(xì)胞的胞漿中，慢性期則多在細(xì)胞外，且有些可呈單個(gè)球形或四聯(lián)狀。人工培養(yǎng)后形態(tài)亦常呈球形、單個(gè)、成雙或四聯(lián)排列。淋球菌適于潮濕（相對溫度8085）、溫暖（35.536.5）、中性偏堿（pH7.27.6）、含510二氧化碳的條件下生長。最怕干燥，在完全干燥環(huán)境下只能存活12小時(shí)，對溫度變化敏感，超過38或低于30則不能生長，在培養(yǎng)基上室溫放置12天即可死亡，在39存活13小時(shí)，42存活15分鐘，50存活5分鐘。如在不完全

28、干燥的衣褲、被褥、毛巾、玩具上則可存活1824小時(shí)。一般消毒劑容易將它殺滅，在1:4000硝酸銀溶液中7分鐘死亡，1石炭酸溶液中3分鐘內(nèi)死亡。淋球菌較為嬌嫩，酶系統(tǒng)不完整，初代培養(yǎng)普通培養(yǎng)基不易成功，需在含有動物蛋白的培養(yǎng)基上，且含有二氧化碳的條件下才能生長。淋球菌在血瓊脂培養(yǎng)基孵育24小時(shí)后，可形成直徑0.51mm的圓形稍隆起，濕潤光滑，半透明，邊緣呈花瓣?duì)?，有粘性的露滴狀菌。淋球菌的生化反?yīng)不發(fā)達(dá)，只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解麥芽糖及蔗糖。藉助上述生化特性亦可與腦膜炎球菌及其他奈瑟菌相鑒別。淋球菌能產(chǎn)生氧化酶和過氧化氫酶，在診斷上有一定意義。三、淋病奈瑟菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其診斷細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)

29、室檢查及其它檢查（1）涂片檢查：取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物，作革蘭氏染色，在多形核白細(xì)胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽性率在90%左右，可以初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽性率僅為50-60%，且有假陽性，因此世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少，陽性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高檢出率。咽部涂片發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病，因?yàn)槠渌紊鷮僭谘什渴钦５木骸Ａ硗鈱ΠY狀不典型的涂片陽性應(yīng)作進(jìn)一步檢查。（2）培養(yǎng)檢查：淋球菌培養(yǎng)是診斷的重要佐證，培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀的男性、女性病

30、人都是較敏感的方法，只要培養(yǎng)陽性就可確診，在基因診斷問世以前，培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。目前國外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的Thayer-Martin（TM）培養(yǎng)基和NewYorkCity（NYC）培養(yǎng)基。國內(nèi)采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基，均含有抗生素，可選擇地抑制許多其他細(xì)菌生長。在36，70%濕度，含5%-10%CO2（燭缸）環(huán)境中培養(yǎng)，24-48小時(shí)觀察結(jié)果。培養(yǎng)后還需進(jìn)行菌落形態(tài)，革蘭氏染色，氧化酶試驗(yàn)和糖發(fā)酵試驗(yàn)等鑒定。培養(yǎng)陽性率男性80%-95%，女性80-90%。培養(yǎng)后需根據(jù)菌落形態(tài)、革蘭染色、氧化酶試驗(yàn)和糖發(fā)酵試驗(yàn)做出鑒定。培養(yǎng)陽性率男性為8095，女性為8090。

31、（3）抗原檢測1固相酶免疫試驗(yàn)（EIA）：可用來檢測臨床標(biāo)本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地區(qū)而又不能作培養(yǎng)或標(biāo)本需長時(shí)間遠(yuǎn)送時(shí)使用，可以在婦女人群中用來診斷淋球菌感染。2直接免疫熒光試驗(yàn)：通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗(yàn)。但目前在男女二性標(biāo)本的敏感不高，特異性差，加之實(shí)驗(yàn)人員的判斷水平，故該實(shí)驗(yàn)尚不能推薦用來診斷淋球菌感染。（4）基因診斷1淋球菌的基因探針診斷:淋球菌的基因探針診斷，所用的探針有：質(zhì)粒DNA探針，染色體基因探針和rRNA基因探針。2、淋球菌的基因擴(kuò)增檢測PCR技術(shù)和連接酶鏈反應(yīng)的出現(xiàn)進(jìn)一步提高了檢測淋球菌的靈敏性，它具有快速、靈敏、特異、簡便的優(yōu)點(diǎn)，可以

32、直接檢測臨床標(biāo)本中極微量的病原體。（5）藥敏試驗(yàn)對培養(yǎng)陽性者可進(jìn)一步用紙片擴(kuò)散法做藥敏試驗(yàn)，或用瓊脂平皿稀釋法測定藥物最小抑菌濃度（MIC），以及用紙片酸度定量法檢測內(nèi)酰胺酶（使用WhatmanI號濾紙PP-NG菌株能使其顏色由藍(lán)變黃，陽性為PPNG，陰性為N-PPNG），以確定淋球菌對抗生素的敏感性，合理選擇用藥。四、淋病的預(yù)防淋病奈瑟菌的預(yù)防要點(diǎn)如下：1.避免婚外性行為。2.在性生活中提倡使用避孕套等理化屏障，以防止淋球菌感染。3.預(yù)防性使用抗生素可減少感染的危險(xiǎn)，可應(yīng)用于已知與淋病患者有性接觸者。4.按淋病治療方案對病人進(jìn)行合理治療，徹底消滅傳染源。5.對性伴侶應(yīng)進(jìn)行檢查和治療。6.患者

33、宜注意個(gè)人衛(wèi)生與隔離，不與家人、小孩（尤其女孩）同床、共浴。7.執(zhí)行對新生兒硝酸銀溶液或紅霉素溶液預(yù)防滴眼的規(guī)定，防止新生兒淋病性眼炎發(fā)生。8.病人需經(jīng)徹底治愈后，方可結(jié)婚、生育和安排工作。五、淋病奈瑟菌的生物安全防護(hù)根據(jù)病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）霍亂弧菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：（1）操作要求1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。3、對于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。4、注射和吸

34、取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。5、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。6、所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí)

35、驗(yàn)室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。7、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評估、觀察、治療，保留書面記錄。8、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其他傳染源污染后，?shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性濺出物的實(shí)驗(yàn)過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混

36、勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域時(shí)，防護(hù)服必須留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時(shí)，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵

37、盤、電話等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實(shí)驗(yàn)室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。結(jié)核桿菌的生物危害評估報(bào)告一、結(jié)核桿菌的傳播與致病結(jié)核桿菌通常指結(jié)核分枝桿菌和牛分枝桿菌，其中結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）是引起人類結(jié)核病的主要病原體。結(jié)核分枝桿菌的主要傳染途徑是經(jīng)呼吸道傳播，由排菌的肺結(jié)核病人在咳嗽、噴嚏或大聲說話時(shí)隨呼吸道分泌物排出到空氣中，或排菌的肺結(jié)核病人隨地吐痰通過再生氣溶膠(塵埃)，攜帶結(jié)核桿菌，飛揚(yáng)在空氣中，被健康的人吸入后發(fā)生感染和發(fā)病，因此排菌的肺結(jié)核患者(尤其是痰涂片陽性未經(jīng)治療者)是結(jié)核病的主要傳染源。一般結(jié)核病患者痰中結(jié)核桿菌越多，

38、傳播的危險(xiǎn)性越大?；颊吲懦龅娘w沫在1-10微米者，在空氣中漂浮時(shí)間長，傳染性越大?；颊卟∽兒桶Y狀越嚴(yán)重，傳染性也越大。周圍人群與患者接觸越密切者，受感染的機(jī)會越多。與患者同處于空氣不流通的室內(nèi)的密切接觸者，受感染的可能性增大。未受結(jié)核感染的人是結(jié)核病易感人群，由于結(jié)核病是人畜共患病，哺乳類動物如牛、鹿、猴、豬、貓、狗等也都可以患結(jié)核病。感染結(jié)核桿菌后，終身都有可能發(fā)病，發(fā)病時(shí)間因人而異，一般2個(gè)月20年才發(fā)病。典型肺結(jié)核起病緩慢，病程較長，有低熱、倦怠、食欲不振、咳嗽及少量咯血。但多數(shù)患者病灶輕微，無顯著癥狀。（1）癥狀全身癥狀表現(xiàn)為午后低熱、乏力、食欲不振、消瘦、盜汗等。呼吸系統(tǒng)癥狀通常為干

39、咳或帶少量黏液痰；繼發(fā)感染時(shí)，痰呈粘液膿性。約1/3患者有不同程度咯血，咯血后常有低熱。大咯血時(shí)可發(fā)生失血性休克，偶因血塊阻塞大氣道引起窒息。病灶炎癥累及壁層胸膜時(shí)，相應(yīng)胸壁有刺痛，一般多不劇烈，隨呼吸及咳嗽而加重。若并發(fā)氣胸或大量胸腔積液，呼吸困難癥狀尤為嚴(yán)重。（2）體征早期病灶小或位于肺組織深部，多無異常體征。若病變范圍較大，患側(cè)肺部呼吸運(yùn)動減弱，叩診呈濁音，聽診時(shí)呼吸音減低，或?yàn)橹夤芊闻莺粑?。因肺結(jié)核好發(fā)于肺上葉尖后段及下葉背段，故鎖骨上下、肩胛區(qū)叩診略濁，咳嗽后偶可聞及濕啰音，對診斷有參考意義。肺部病變發(fā)生廣泛纖維化或胸膜粘連增厚時(shí)，患側(cè)胸廓常呈下陷、肋間隙變窄、氣管移位與叩濁，對

40、側(cè)可有代償性肺氣腫征。二、結(jié)核桿菌的生物學(xué)特性從分類學(xué)上看結(jié)核桿菌屬于裂殖菌綱、放線菌目、分枝桿菌科、分枝桿菌屬。結(jié)核分枝桿菌正常典型的形態(tài)是直或稍彎曲、兩端鈍圓的桿菌，菌體長1-4納米，寬0.3-0.6納米，無芽胞、無莢膜、無鞭毛，生長發(fā)育期間有分枝生長傾向。鏡下常呈單個(gè)散在或呈“人、V、T、Y”形排列，菌體多時(shí)細(xì)菌扭集一起呈繩索狀、束狀或叢狀。此外結(jié)核桿菌菌體還具有多形態(tài)特征，受不良生長條件的影響可分別表現(xiàn)為桿菌型(基本形態(tài))、濾過型、顆粒型和球菌型(L型)4種不同的類型。分枝桿菌生長緩慢，在人工培養(yǎng)基內(nèi)繁殖一代約需15-20小時(shí)，一般需2-4周或更長時(shí)間始見菌落生長，甚至有極少數(shù)生長極為

41、緩慢者需8周以上才開始有菌落生長。它為專性需氧菌，生長的溫度范圍是35-40，pH5.5-7.2。培養(yǎng)營養(yǎng)要求較高且特殊，培養(yǎng)基需含雞蛋、血清、氨基酸、甘油等營養(yǎng)豐富的復(fù)雜有機(jī)物及少量無機(jī)鹽類。而且結(jié)核桿菌隨著環(huán)境的改變易發(fā)生菌落形態(tài)、毒力、L型及藥物耐藥性變異，如在人工培養(yǎng)基上反復(fù)連續(xù)傳代，可產(chǎn)生變異而致毒力降低，三、結(jié)核桿菌的檢測與診斷（1）細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查結(jié)核菌檢查是確診肺結(jié)核最特異性的方法，痰中找到結(jié)核菌為確診肺結(jié)核的主要依據(jù)。涂片抗酸染色鏡檢快速簡便。在我國非典型分枝桿菌尚屬少見，故抗酸桿菌陽性，肺結(jié)核診斷基本即可成立。痰菌陽性表明其病灶是開放性的，具有傳染性。培養(yǎng)法更為精

42、確，尚可作藥物敏感試驗(yàn)與菌型鑒定。但結(jié)核菌生長緩慢，培養(yǎng)較為費(fèi)時(shí)，但精確可靠，特異性高。若涂片陰性或診斷有疑問時(shí)，培養(yǎng)尤其重要；而且，培養(yǎng)后可做藥物敏感性測定，指導(dǎo)臨床用藥。PCR技術(shù)檢測結(jié)核菌DNA快速、簡便，并可鑒定菌型，不足之處是可能出現(xiàn)假陽性或假陰性。影像學(xué)檢查胸部X線檢查可以發(fā)現(xiàn)肺內(nèi)病變的部位、范圍、有無空洞或空洞大小、洞壁厚薄等。X線對各類結(jié)核病的透過度不同，通過X線檢查能大致估計(jì)結(jié)核病灶的病理性質(zhì)，并能早期發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核，以及判斷病情發(fā)展及治療效果，有助于決定治療方案。肺結(jié)核的常見X線表現(xiàn)包括：纖維鈣化的硬結(jié)病灶、浸潤性病灶以及干酪樣病灶等。胸部CT檢查對于發(fā)現(xiàn)微小或隱蔽性病變，了解

43、病變范圍及病變鑒別等方面均有幫助。結(jié)核菌素試驗(yàn)是診斷結(jié)核感染的參考指標(biāo)。使用的變應(yīng)原有舊結(jié)核菌素（oldtuberculin,OT）和結(jié)核菌素的純化蛋白衍化物（purifiedproteinderivative,PPD），現(xiàn)臨床多用PPD。皮內(nèi)注射0.1ml（5IU），硬結(jié)平均直徑5mm為陽性反應(yīng)。結(jié)核菌素試驗(yàn)有助于判斷有無結(jié)核菌感染。若呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，常表示為活動性結(jié)核病。結(jié)核菌素試驗(yàn)陽性反應(yīng)僅表示曾有結(jié)核感染，并不一定現(xiàn)在患病。結(jié)核菌素試驗(yàn)陰性反應(yīng)除表示沒有結(jié)核菌感染外，尚需考慮以下情況：結(jié)核菌在感染48周后才建立充分變態(tài)反應(yīng)，在這之前，結(jié)核菌素試驗(yàn)可呈陰性；應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑，或營

44、養(yǎng)不良、麻疹、百日咳等患者，結(jié)核菌素反應(yīng)亦可暫時(shí)消失。其它檢查結(jié)核病患者血像通常無改變，嚴(yán)重病例常有繼發(fā)性貧血，急性粟粒型肺結(jié)核時(shí)白細(xì)胞總數(shù)減低或出現(xiàn)類白血病反應(yīng)。血沉增快常見于活動性肺結(jié)核。用ELISA法檢測患者血清中特異性抗體，可對無痰或痰菌陰性者和肺外結(jié)核的診斷提供參考。纖支鏡檢查對于發(fā)現(xiàn)氣管內(nèi)膜結(jié)核、了解有無腫瘤、吸取分泌物、解除阻塞或作病原菌及脫落細(xì)胞檢查，以及取活組織作病理檢查等，均有重要診斷價(jià)值。淺表淋巴結(jié)活檢，有助于結(jié)核的鑒別診斷。（2）診斷和鑒別診斷痰結(jié)核菌檢查不僅是診斷肺結(jié)核的主要依據(jù)，亦是考核療效、隨訪病情的重要指標(biāo)。X線檢查是診斷肺結(jié)核的必要手段，對早期診斷、確定病變部

45、位、范圍、性質(zhì)、了解其演變及選擇治療等均具有重要價(jià)值。在臨床診斷中，我國現(xiàn)用的分類法包括四部分，即肺結(jié)核類型、病變范圍及空洞部位、痰菌檢查、活動性及轉(zhuǎn)歸。肺結(jié)核分為五型：型為原發(fā)型肺結(jié)核；型為血行播散型肺結(jié)核；型為浸潤型肺結(jié)核；型為慢性纖維空洞型肺結(jié)核；型為結(jié)核性胸膜炎。還應(yīng)注意將結(jié)核病與肺癌、肺炎、支氣管擴(kuò)張、慢性支氣管哮喘和其它發(fā)熱性疾病如傷寒、敗血癥、白血病、縱隔淋巴瘤及結(jié)節(jié)病等進(jìn)行鑒別。四、結(jié)核桿菌的防治及生物安全防護(hù)細(xì)菌的防治根據(jù)中華人民共和國傳染病防治法和實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求中的有關(guān)規(guī)定，結(jié)核病屬于乙類傳染病，按照乙類傳染病進(jìn)行預(yù)防控制。在結(jié)核病的預(yù)防方面要針對傳染源、傳播途徑、

46、易感人群三個(gè)環(huán)節(jié)，采取以管理和控制傳染源為主的綜合性防治措施，努力做到“早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早治療”，以利于控制和管理傳染源。臨床上肺結(jié)核化學(xué)治療的原則是早期、規(guī)律、全程、適量、聯(lián)合。整個(gè)治療方案分強(qiáng)化和鞏固兩個(gè)階段。我國結(jié)核病防治規(guī)劃指南規(guī)定采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)治療方案。表1國家防癆規(guī)劃的結(jié)核病化療方案療程化療方案6個(gè)月2RHZ/4RH2ERHZ/4RH或4R2H22SRHZ/4RH或4R2H28個(gè)月2SRHZ/6TH或6EH2SRHZ/6S2H2Z2R代表利福平，H代表異煙肼，Z代表吡嗪酰胺，E代表乙胺丁醇，S代表鏈霉素，T代表丙硫異煙胺。下標(biāo)數(shù)字表示每日用藥次數(shù)；其余數(shù)字表示用藥月數(shù)，斜線前數(shù)

47、字表示前2個(gè)月，斜線后字表示后幾個(gè)月。對復(fù)治病例，一般可用以下幾種方案：2S(E)RHZ/4RH(E)，督促化療，保證規(guī)律用藥。初治規(guī)則治療失敗的患者，可用2S3H3Z3E3/6H3R3E3；慢性排菌者可用敏感的一線藥與二線藥聯(lián)用，應(yīng)嚴(yán)密觀察藥物不良反應(yīng)，療程以612個(gè)月為宜。對毒性癥狀嚴(yán)重者，可加用糖皮質(zhì)激素，以減輕炎癥及過敏反應(yīng)，促進(jìn)滲液吸收，減少纖維組織形成及胸膜粘連。對咯血患者，應(yīng)對癥治療，包括休息、止咳、鎮(zhèn)靜以及應(yīng)用止血藥如安絡(luò)血等。五、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)根據(jù)病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）結(jié)核桿菌屬于二類，BSL-3。WHO將結(jié)核桿

48、菌生物危害等級定為級。所有參與結(jié)核桿菌防治和研究的實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)室人員都必須遵守結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例和結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程。（1）安全防護(hù)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室獲得性結(jié)核病是由于處理感染者標(biāo)本引起可從痰、尿、組織、大便和其它體液標(biāo)本中分離到結(jié)核桿菌。處理標(biāo)本或培養(yǎng)物時(shí)產(chǎn)生氣溶膠是實(shí)驗(yàn)室獲得性結(jié)核病的最重要危險(xiǎn)因素，也可通過損傷的皮膚接觸感染。因此首先應(yīng)樹立全程防護(hù)的觀念，全面加強(qiáng)從事結(jié)核桿菌科研、檢測、試劑和疫苗生產(chǎn)機(jī)構(gòu)的生物安全管理。嚴(yán)格限定有資質(zhì)開展研究的實(shí)驗(yàn)室和研究者。建立健全傳染病病原管理組織；制訂和完善傳染病實(shí)驗(yàn)室生物安全的技術(shù)操作規(guī)范；加強(qiáng)可能暴露于結(jié)核桿菌或潛在感染性材料的相關(guān)業(yè)

49、務(wù)人員生物安全知識培訓(xùn)和風(fēng)險(xiǎn)和意識教育；切實(shí)落實(shí)各項(xiàng)管理制度，預(yù)防和控制實(shí)驗(yàn)室等渠道造成結(jié)核桿菌感染和傳播；加強(qiáng)部門間溝通與合作，加強(qiáng)對高暴露實(shí)驗(yàn)室工作人員的監(jiān)測工作，并保證他們能及時(shí)被發(fā)現(xiàn)與治療。當(dāng)進(jìn)行大量活菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，所有操作應(yīng)在BSL-3級實(shí)驗(yàn)室生物安全柜中進(jìn)行。為防止實(shí)驗(yàn)過程產(chǎn)生的氣溶膠導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)室感染，所有操作應(yīng)使用三級生物安全防護(hù)。在具體的操作過程中包括標(biāo)本留取、運(yùn)送、處理以及廢物處置等程序都應(yīng)防止感染性氣溶膠的產(chǎn)生。病人留取標(biāo)本應(yīng)在獨(dú)立的房間，應(yīng)定時(shí)作好房間消毒，保持通風(fēng)。標(biāo)本應(yīng)留取在封閉的器皿內(nèi)送檢。檢驗(yàn)人員應(yīng)穿戴防護(hù)服、口罩、手套等防護(hù)裝備，嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，實(shí)驗(yàn)室空氣、實(shí)

50、驗(yàn)臺面應(yīng)定時(shí)消毒。痰、尿標(biāo)本找抗酸桿菌，應(yīng)先高壓滅菌后，再涂片染色。尤其是痰標(biāo)本進(jìn)行涂片制作時(shí)，在打開標(biāo)本容器、涂片、加熱固定時(shí)容易產(chǎn)生氣溶膠，為防止實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的氣溶膠導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室感染，所有操作應(yīng)在二級生物安全柜中進(jìn)行，并使用二級生物安全防護(hù)。痰標(biāo)本培養(yǎng)時(shí)，在標(biāo)本進(jìn)行前處理高速振蕩混合和離心、培養(yǎng)液或上清液的傾倒、轉(zhuǎn)移和接種等操作過程有產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑的可能，為防止實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的氣溶膠等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室感染，所有操作應(yīng)在二級生物安全柜中進(jìn)行，并使用二級生物安全防護(hù)。藥物敏感性測定時(shí)，在磨菌、滴加菌液、接種培養(yǎng)物、燒灼接種環(huán)等操作過程有產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑的可能，實(shí)驗(yàn)者有可能直接大劑量暴露細(xì)菌

51、。因此該項(xiàng)操作一定在BSL-3級實(shí)驗(yàn)室完成，且最好實(shí)驗(yàn)室內(nèi)要有負(fù)壓。并且操作者著二級生物防護(hù)用品。（2）意外事故的處理結(jié)核桿菌的滅活方式有化學(xué)的和物理的方法。實(shí)驗(yàn)過程中：1)如標(biāo)本或標(biāo)本的前消化處理液被打翻污染操作臺或地面，應(yīng)以吸滿75%已乙醇溶液的衛(wèi)生紙覆蓋污染區(qū)，15分鐘以后衛(wèi)生紙方可移去；2)如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發(fā)生，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)工作進(jìn)行緊急處理：更換被污染的實(shí)驗(yàn)服裝，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒及酒精消毒，眼睛用無菌生理鹽水沖洗；3)如果發(fā)生菌液溢出、帶菌的培養(yǎng)管破碎等，造成中、小面積污染?？捎帽任廴久娣e大25%以上的紗布覆蓋污染區(qū)域，邊緣用脫

52、脂棉圍住，向紗布傾倒5%苯酚溶液或75%的乙醇溶液，浸泡2小時(shí)以上(其間適量添加溶液防止干燥)，再經(jīng)紫外燈近距離(1米內(nèi))照射2小時(shí)以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于75%乙醇溶液中2小時(shí)以上，實(shí)驗(yàn)完成后再進(jìn)行高壓消毒處理；4)如果發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)并關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室，對實(shí)驗(yàn)區(qū)域和實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外燈照射消毒過夜；第二天對污染區(qū)域進(jìn)行24小時(shí)封閉空氣熏蒸消毒(乙醛消毒法：5ml乙醛+2g高錳酸鉀/平方米空間)，直接被污染的區(qū)域可參照第3)條進(jìn)行處理。（3）實(shí)驗(yàn)室人員的防護(hù)從事結(jié)核桿菌檢測、研究的實(shí)驗(yàn)室工作人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作，出現(xiàn)下列情況，不能進(jìn)入

53、：身體出現(xiàn)開放性損傷；患發(fā)熱性疾?。桓忻?、上呼吸道感染、或其他導(dǎo)致抵抗力下降的情況；妊娠、已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室控制區(qū)域內(nèi)連續(xù)工作4h以上，或其他原因造成的疲勞狀態(tài)。從事結(jié)核桿菌檢測工作人員可間隔數(shù)年接種卡介苗一次。若操作者或其所在實(shí)驗(yàn)室的工作人員在此期間出現(xiàn)與被操作病原微生物導(dǎo)致疾病類似的癥狀或者體征時(shí)，例如發(fā)熱、盜汗、咳嗽、咳痰、咯血或痰中帶血等癥狀，則應(yīng)被視為可能發(fā)生實(shí)驗(yàn)室感染。應(yīng)立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，采取早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早治療以控制管理傳染源為主的綜合性防治措施。蠟樣芽胞桿菌的生物危害評估報(bào)告一、細(xì)菌的傳播與致病蠟樣芽胞桿菌在自然界分布廣泛，常存在于土壤、灰塵和污水中，植物和許多生熟食品中常見。

54、已從多種食品中分離出該菌，包括肉、乳制品、蔬菜、魚、土豆、糊、醬油、布丁、炒米飯以及各種甜點(diǎn)等。在美國，炒米飯是引發(fā)蠟樣芽胞桿菌嘔吐型食物中毒的主要原因；在歐洲大都由甜點(diǎn)、肉餅、色拉和奶、肉類食品引起；在我國則主要與受污染的米飯或淀粉類制品有關(guān)。1950年Hauge在對挪威奧斯陸某醫(yī)院職工和病員進(jìn)食甜食后引起的食物中毒研究中，首次明確指出蠟樣芽胞桿菌的致病作用。蠟樣芽胞桿菌作為一種食源性疾病的報(bào)導(dǎo)較多，在各種食品中的檢出率也較高，如1982年犬飼等對日本名古屋所采1641份食品樣品中，有193份檢出了該菌、陽性率為11.8%；1984年我國有關(guān)單位對南京市所采211份食品樣品中，有81份檢出了

55、該菌，陽性率為38.4%。蠟樣芽胞桿菌食物中毒通常以夏秋季（6-10月）最高。引起中毒的食品常于食前由于保存溫度不當(dāng)，放置時(shí)間較長或食品經(jīng)加熱而殘存的芽胞以生長繁殖的條件，因而導(dǎo)致中毒。中毒的發(fā)病率較高，一般為60-100%。但也有在可疑食品中找不到蠟樣芽胞桿菌而引起食物中毒的情況，一般認(rèn)為是由于蠟桿芽胞桿菌產(chǎn)生的熱穩(wěn)定毒素所致。當(dāng)攝入的食品其蠟樣芽胞桿菌數(shù)量達(dá)106/克時(shí)常可導(dǎo)致食物中毒。蠟樣芽胞桿菌食物中毒在臨床上可分為嘔吐型和腹瀉型兩類。嘔吐型的潛伏期為0.5-6小時(shí)，中毒癥狀以惡心、嘔吐為主，偶而有腹痙攣或腹瀉等癥狀，病程不超過24小時(shí)，這種類型的癥狀類似于由金黃色葡萄球菌引起的食物中

56、毒。腹瀉型的潛伏期為6-15小時(shí)，癥狀以水瀉、腹痙攣、腹痛為主，有時(shí)會有惡心等癥狀，病程約24小時(shí)，這種類型的癥狀類似于產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的食物中毒。嚴(yán)重者還可導(dǎo)致敗血癥。蠟樣芽胞桿菌引起食物中毒是由于該菌可產(chǎn)生腸毒素。它產(chǎn)生兩種性質(zhì)不同的代謝物，引起腹瀉型綜合癥的是一種大分子量蛋白；而引起嘔吐型綜合癥的被認(rèn)為是一種小分子量、熱穩(wěn)定的多肽。致嘔吐型綜合癥的腸毒素至今尚未提純，致腹瀉型綜合癥的腸毒素已提純，其純化的腸毒素分子量為55-6.0103。致腹瀉的腸毒素能使小白鼠致死。二、細(xì)菌的生物學(xué)特性蠟樣芽胞桿菌分類為芽胞桿菌屬的第I群，該群有22個(gè)種。根據(jù)營養(yǎng)型菌細(xì)胞的寬度分為兩類，蠟樣芽胞桿菌、蕈

57、狀芽胞桿菌、蘇云金芽胞桿菌、炭疽芽胞桿菌和巨大芽胞桿菌屬“大細(xì)胞菌種”。蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽性大桿菌，大小為1-1.33-5m，需氧或兼性需氧，生長6h即可形成原形芽胞，芽胞位于菌體的中心或次末端不突出菌體，菌體兩端較平整，多數(shù)呈鏈狀排列，與炭疽桿菌相似。引起食物中毒的菌株多為周鞭毛，有動力無莢膜。它的生長溫度為25-37，最佳溫度30-35。在肉湯中生長混濁有菌膜或壁環(huán)，振搖易乳化。在普通瓊脂上生成的菌落較大，直徑3-10mm，灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴(kuò)展?fàn)罟识妹?。偶有產(chǎn)生黃綠色色素，在血瓊脂平板上呈草綠色溶血。在甘露醇、卵黃多粘菌素（MYP）平板上，呈伊紅粉

58、色菌落。能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素等，VP實(shí)驗(yàn)陽性，可液化明膠，卵磷脂酶陽性，但多次傳代后，其生化特性?？筛淖儭４送庀灄U芽胞桿菌耐熱，其食物中毒菌株中的游離芽胞能耐受10030分鐘，而干熱滅菌需12060分鐘才能殺死。本菌對氯霉素、紅霉素和慶大霉素敏感，對青霉素、磺胺類和呋喃類耐藥。三、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查1.標(biāo)本收集采集可疑食物或收集糞便和嘔吐物進(jìn)行直接涂片染色鏡檢和其他操作。2.活菌計(jì)數(shù)無菌操作稱取樣品50g放入滅菌攪拌缸內(nèi)。加Butterfield磷酸鹽緩沖稀釋液450mL，以高速（18.000-21.000rpm）均質(zhì)2min。用上述1:10稀釋液，連續(xù)稀釋供蠟樣芽胞桿菌

59、計(jì)數(shù)。移取10mL均質(zhì)樣液（1:10稀釋）加到90mL空白液中，從10-2到10-6制備一系列稀釋液，充分混勻，并繼續(xù)稀釋直到10-6為止。取樣品的各個(gè)稀釋液（包括1:10）0.1mL接種2只MYP（甘露醇一卵黃多粘菌素瓊脂）平板，用滅菌玻璃棒在每只平板表面涂布均勻。將平板置30培養(yǎng)24小時(shí)，并檢查菌落周圍有沉淀圈者，表示產(chǎn)生卵磷脂酶。蠟樣芽胞桿菌菌落通常是粉紅色，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長則更明顯。如果上述反應(yīng)不清晰，應(yīng)將平板再培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)數(shù)，從MYP平板上挑取典型菌落5個(gè)或更多，移種到營養(yǎng)瓊脂斜面上供蠟樣芽胞桿菌證實(shí)試驗(yàn)用。3.MPN技術(shù)被推薦用于食品中低于10個(gè)/g蠟樣芽胞桿菌的檢驗(yàn)。某些不

60、適合用平板計(jì)數(shù)法的脫水淀粉類食品也可用此法檢驗(yàn)。在胰酪胨大豆多粘菌素肉湯中接種3管MPN系列，10-1、10-2、10-3的稀釋液各接種1mL于3管。將培養(yǎng)管置30培養(yǎng)482小時(shí)，檢查生長密集、典型的蠟樣芽胞桿菌。將陽性管培養(yǎng)物劃線接種于MYP平板，于30培養(yǎng)24-48小時(shí)。以下步驟同2。4.分離培養(yǎng)將可疑食物置無菌乳缽中，加適量生理鹽水研磨后，劃線接種于普通瓊脂平板或血瓊脂平板，若為嘔吐物可直接劃線接種于上述平板，于37培養(yǎng)，5.若有類似蠟樣芽胞桿菌的菌落出現(xiàn)再進(jìn)一步分離純化以及進(jìn)行生化反應(yīng)。6.蠟樣芽胞桿菌的證實(shí)試驗(yàn)蠟樣芽胞桿菌的分離物應(yīng)符合下述條件：1)革蘭氏陽性產(chǎn)芽胞大桿菌，其芽胞不突