兩種醫(yī)院制劑微生物限度檢查法的建立

1、兩種醫(yī)院制劑微生物限度檢查法的建立Objective:To establish oropharyngeal mixture,dryness aperient mixture of two kinds of hospital preparations microbial limits detection methods.Methods:Using conventional method for determination of various varieties of five provisions ， and the recovery test strains of bacteria by c

2、ontrolling the inspection shall be verified.Results:Oropharyngeal mixture have little bacteriostasis,dryness aperient mixture without bacteriostasis.Conclusion:Centrifugal sedimentation oropharyngeal mixture can set bacteria culture medium diluted method and the method of examination,coupled method

3、combined with conventional aperient dryness check microbial limits.根據(jù)中國藥典 2005 版規(guī)定 1 ，藥品在進(jìn)行微生物限度檢查前必須對(duì)其檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證， 以確定供試品所采用的檢驗(yàn)方法無抑菌作用， 能夠真實(shí)的反應(yīng)供試品受污染程度。 本文中對(duì)口咽合劑及潤燥通便合劑建立了相應(yīng)的微生物限度檢查方法，根據(jù)制劑中成分的抑菌作用， 采用常規(guī)法和離心集菌法和培養(yǎng)基稀釋法聯(lián)用進(jìn)行檢查； 經(jīng)方法驗(yàn)證試驗(yàn)證實(shí)能夠真實(shí)反映供試品的衛(wèi)生學(xué)情況。資料與方法儀器：YXQ-LS-50SII立式壓力蒸汽滅菌器（博迅實(shí)業(yè) XX公司藥療設(shè)備廠），HH S21.

4、CR4恒溫水浴鍋（汕頭廣播儀器廠），TL04A均漿儀（大恒建?？瀑Q(mào)公司），LRH-150B生化培養(yǎng)箱（廣東省藥療器件廠），JKOP-420 電熱恒溫培養(yǎng)箱（廈門醫(yī)療電子儀器廠），BP211D電子天平（上海精密儀器 XX公司），KA-100型臺(tái)式離心機(jī)（安亭科學(xué)儀器廠）。試藥和培養(yǎng)基：氯化鈉為分析純（批號(hào)：090519），營養(yǎng)脂培養(yǎng)基 （批號(hào)：080708），玫瑰紅鈉脂培養(yǎng)基 （批號(hào)： 080610） ，膽鹽乳糖培養(yǎng)基（批號(hào)： 080321），營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號(hào)：080527），pH 7.0 氯化鈉 -蛋白胨緩沖液（批號(hào)：080621），改良馬丁培養(yǎng)基（批號(hào)： 080316），以上培養(yǎng)基均由中

5、國藥品生物制品檢定所提供。試驗(yàn)菌種：大腸埃希菌CMC（C B） 44102，金黃色葡萄球菌CMC（C B） 26003，枯草芽孢桿菌CMC（C B） 63501，白色念珠球菌 CMC（C F） 98001，黑曲霉菌CMC（C F） 98003，均來自國家菌種保藏中心。樣品： 口咽合劑、 潤燥通便合劑均由四川攀枝花中醫(yī)院制劑室提供 （批號(hào)：090219， 090424， 090526， 090309， 090429， 090522） 。結(jié)果供試液的制備：取3批供試品各10ml,分別加pH7.0的無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液至100ml ，置電動(dòng)均漿儀中均漿1 分鐘，制成 1:10 的供試液。試驗(yàn)

6、組A:細(xì)菌記數(shù)采用常規(guī)法，取 1:10的供試液1ml 置平皿，每個(gè)平皿加試驗(yàn)菌液 1ml,加入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15 20ml;每個(gè)試驗(yàn)菌平行制備 2個(gè)平皿，放冷倒置平皿，在 30 35培養(yǎng)48 小時(shí)， 觀測結(jié)果。 霉菌和酵母菌記數(shù)采用常規(guī)方法。取1:10的供試液1ml,置平皿中，每個(gè)平皿加試驗(yàn)菌液1ml,加玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基1520ml,每種試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿， 放冷倒置，于25c培養(yǎng)72小時(shí)，測定菌落數(shù)。離心沉淀集菌 法和培養(yǎng)基稀釋法聯(lián)用取“ 2.1 ”制備的供試液40ml ，分別分在4 支離心管中， 用 r/ 分離心 5 分鐘， 取各管上層液， 再用 3000r/分， 20 分鐘，棄去上

7、清液，留下層沉淀2ml 注入一個(gè)平皿中迅速倒入1520ml試液，培養(yǎng)時(shí)間與常規(guī)范相同。菌液組B:分另1J取50100ml, cfu/ml的試驗(yàn)菌液1ml,注 入平皿中，立即倒入培養(yǎng)基，平行制備2個(gè)平皿，置30c35c 培養(yǎng)4872小時(shí)，觀察結(jié)果，測定菌數(shù)。供試品對(duì)照組C:按2005年版中國藥典一部微生物限度菌落計(jì)數(shù)方法測定本品的本底數(shù) （按試驗(yàn)組的方法， 不加菌懸 液測定供試品菌數(shù)）。稀釋劑對(duì)照組D:取pH7.0的無菌氯化鈉-蛋白陳緩沖液1ml, 方法同實(shí)驗(yàn)組（中國藥典規(guī)定凡是使用離心沉淀法，中和法，薄膜過濾法等需要做稀釋劑對(duì)照組）。菌回收率計(jì)算及結(jié)果判斷： 2005 版藥典規(guī)定對(duì)各試驗(yàn)菌株的

8、回收率均不得低于70%。用常規(guī)法測定該兩個(gè)品種對(duì)5 個(gè)試驗(yàn)菌株的回收率， 以確定其抑菌程度。 潤燥通便合劑對(duì)各試驗(yàn)菌株的回收率均高于70%，無明顯抑菌作用；而口咽合劑對(duì)枯草芽胞菌有抑菌作用。見表1?？谘屎蟿┎捎秒x心沉淀集菌法和培養(yǎng)基稀釋法聯(lián)用的方法：采用采用離心沉淀集菌法和培養(yǎng)基稀釋法聯(lián)用的方法可有效的除去該藥對(duì)試驗(yàn)菌株的抑菌作用，使回收率大于70%。見表2。表2采用離心沉淀集菌法和培養(yǎng)基稀釋法（0.2%ml/皿）聯(lián)用測定枯草芽孢菌的回收率（%）控制菌檢驗(yàn)法的驗(yàn)證：大腸埃希菌檢查法的驗(yàn)證：常規(guī)法：試驗(yàn)組：取上述供試品溶液10ml及大腸埃希菌菌液1ml加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，于 3537

9、c培養(yǎng)24小時(shí)。陰性菌 對(duì)照組：取上述供試品溶液10ml及金黃色葡萄球菌菌液1ml （含 菌量10100cfu）加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)。取上述培養(yǎng)物0.2ml ,接種于含5mlMUGf養(yǎng)基的試管中， 培養(yǎng)，于24小時(shí)在365nm紫外線觀察，同時(shí)做本底對(duì)照。觀察 后，沿培養(yǎng)管管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液，觀察，結(jié)果 2 個(gè)品種均 為實(shí)驗(yàn)組檢出，陰性組未檢出。大腸菌群檢查法的驗(yàn)證：常規(guī)法：實(shí)驗(yàn)組：取 10ml的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基1 支，加入 1:10ml 的供試液和大腸埃希菌菌液各1ml （含菌量10100cfu）,于3537c培養(yǎng)24小時(shí)。陰性菌對(duì)照組：取取10ml 的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基1 支，加入1:10ml的供試液和金黃色葡萄球菌菌液各1ml （含菌量10100cfu）,于3537c培養(yǎng)24小時(shí)。結(jié)果顯示，兩個(gè)品種均為試驗(yàn)組檢出，陰性組未檢出。討論潤燥通便合劑： 采用常規(guī)法記數(shù)， 口咽合劑采用離心沉淀集菌法和稀釋劑法聯(lián)用的方法， 各品種霉菌和酵母菌， 控制菌檢查均采用常規(guī)法。試驗(yàn)中應(yīng)注意， 由于口咽合劑是中藥煎煮劑， 有許多的細(xì)小沉淀， 故考慮先用低轉(zhuǎn)速離心除去大部分的藥渣， 以減少抑菌作用，而且細(xì)菌的重量較藥渣輕，