PCR實驗室程序性文件

1、XX 市第二人民醫(yī)院基因擴增實驗室質(zhì)量體系文件 WEY-JYK-PCR-CXWJ 程 序 文 件 編制： 審核： 批準： 受控狀態(tài)： 在控 編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 頒布日期：2020.07.28 實施日期：2020.07.28 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 修訂 序號 修訂的章節(jié) 條款 修訂頁 簡要修訂內(nèi)容 批準人 批準日期 目錄 基因擴增實驗室設(shè)置與管理程序 . 1 實驗室醫(yī)療廢棄物物管理程序 . 3 實驗室記錄管理程序 . 5 實驗室生物防護程序 . 7 儀器設(shè)備管理程序 . 10 儀器設(shè)備校準程序 . 13 實驗室防污染程序 . 15 試劑耗材管理程序 . 19 標本的管

2、理程序 . 22 實驗室檢測結(jié)果報告程序 . 24 實驗室質(zhì)量控制管理程序 . 26 實驗室檢測結(jié)果報告程序 . 28 抱怨處理程序 . 30 檢驗過程中發(fā)生故障時的應(yīng)急處理程序 . 31 實驗室清潔消毒程序 . 33 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 基因擴增實驗室設(shè)置與管理程序 1. 目的：規(guī)范 PCR 實驗室管理制度。 2. 適用范圍：PCR 實驗室布局設(shè)置、儀器設(shè)備、日常操作。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 基因擴增實驗室分試劑準備、

3、標本制備、基因擴增分析三 個區(qū)，各區(qū)實驗物品應(yīng)有明顯的標示，嚴禁混用。 3.2. 實驗室審核人員須有衛(wèi)生部臨檢中心或其授權(quán)機構(gòu)頒發(fā)的 培訓(xùn)上崗證方能進行基因擴增檢測工作。 3.3. 實驗室工作人員必須嚴格按照核酸擴增實驗操作程序進 行。 3.4. 實驗開始前必須先做好實驗室內(nèi)和工作臺的清潔消毒，以 及離心管、吸頭等一次性用品的高壓滅菌處理。 3.5. 工作人員應(yīng)遵循單項走動的原則：試劑準備區(qū)標本制備 區(qū) 擴增分析區(qū)。 3.6. 嚴格遵守室內(nèi)質(zhì)控，每批標本進行檢測時都必須附上陰、 陽性對照，必要時繪制質(zhì)控圖。實驗結(jié)束后若對照品結(jié)果出現(xiàn) 異常時應(yīng)立即暫扣本次結(jié)果，及時尋找原因并加以糾正后，才 能發(fā)

4、出報告。 3.7. 非本室工作人員未經(jīng)允許不得進入基因擴增實驗室，工作 人員在工作時也不能隨意進出，以免造成不應(yīng)有的污染。 1 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 3.8. 實驗結(jié)束后應(yīng)用 2000mg/L 含氯消毒液消毒實驗臺面，并 以紫外線照射實驗室。試驗中使用過的吸頭、離心管等應(yīng)置于 2000mg/L 含氯消毒液中浸泡消毒后集中焚毀。 3.9. 每天工作必須填寫好日常工作核查表，下班前處理好廢棄 物品， 關(guān)好水、電和門窗。 3.10.

5、實驗室工作人員必須嚴格遵守本室一切制度。 2 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 實驗室醫(yī)療廢棄物物管理程序 1. 目的：為防止實驗室廢棄物對環(huán)境造成污染。 2. 適用范圍：主要適用于實驗室擴增前、擴增后的廢棄物處理。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 收集 實驗室工作人員對試驗過程中產(chǎn)生的醫(yī)療廢棄物應(yīng)采取安 全、有效、經(jīng)濟的隔離和處理方法，集中保存，統(tǒng)一處理。 3.2. 標識 廢棄物應(yīng)裝入黃色垃圾袋，所有收集傳染性廢物的容器都應(yīng) 有“生物危害”標

6、志。裝有銳利物品的容器在任何時候都應(yīng)有“生 物危害”標志。所有運輸未經(jīng)處理的廢棄物的容器上都應(yīng)有“生 物危害”標志。 3.3. 包裝 所有的廢棄物都必須進行包裝，并應(yīng)依據(jù)廢物的性質(zhì)及數(shù)量 選用適合的包裝材料。應(yīng)使用黃色聚乙烯或聚丙烯包裝袋，并應(yīng) 標記有傳染性物品。有液體的傳染性廢料時，應(yīng)確保容器無泄漏。 3.4. 處置 傳染性廢物的處置即減少或限制其潛在致病性的過程，滅菌 和焚燒是最常用的處置方法。處置的主要目的是去除污染，使病 源體數(shù)量減少到致病水平以下。產(chǎn)生的廢液用化學(xué)消毒滅菌 3 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實

7、驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 （0.55%含氯消毒劑處理），壓力蒸氣滅菌處理過程應(yīng)保證在121 進行（被處理物中心溫度不低于115），時間 6090 分鐘（不 少于 20 分鐘）。至少每月應(yīng)使用一次生物指示劑監(jiān)測處理效果。 3.5. 轉(zhuǎn)運 試驗過程中產(chǎn)生的醫(yī)療廢棄物必須在高壓滅菌后才能離開實驗 室，運輸工具應(yīng)有明顯的標記和防泄漏設(shè)備。在處理、運輸、裝 卸過程中應(yīng)確保傳染性廢物的包裝完好，一般不得使用機械進行 裝卸。長途運輸應(yīng)請專業(yè)人員進行操作。 4 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/

8、0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 實驗室記錄管理程序 1. 目的：實驗室記錄是實驗室質(zhì)量證明資料及質(zhì)量體系運作的重要 組成部分，記錄必須真實完整地反映進行狀態(tài)，并進行有效的規(guī) 范化管理。 2. 適用范圍：記錄范圍涉及實驗室活動的各個環(huán)節(jié)， 與質(zhì)量體系運 行直接相關(guān)。 主要包括樣本信息、試劑采購和配制記錄、實驗操 作記錄、儀器使用和儀器維修保養(yǎng)記錄、各區(qū)溫度和濕度、各區(qū) 人員流動記錄、冰箱溫度、室內(nèi)清潔、抱怨處理、加樣器校準、 溫度計校準、儀器校準、室內(nèi)質(zhì)控等紀錄。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 病人和標本信息：接收標本后，在標本登記表

9、中登記病人和標 本信息，包括：病人姓名、性別、年齡、檢測、標本類型、標 本狀態(tài)、送檢日期、標本接收人等，對不符合檢測要求的標本 在“拒收標本登記表”上記錄，并及時通知送檢單位。 3.2. 檢測過程中的實驗記錄：在專用實驗記錄簿上記載，不同實驗 區(qū)的記錄簿不得混用。試劑準備和貯存區(qū)應(yīng)記錄檢測所用的試 劑盒情況（名稱、批號、數(shù)量）；標本制備區(qū)記錄檢測標本數(shù) 及在本區(qū)內(nèi)進行的操作過程；在擴增及產(chǎn)物分析區(qū)記錄質(zhì)控結(jié) 果和分析。 3.3. PCR 儀運行結(jié)束，運行和結(jié)果文件應(yīng)保存在專門的數(shù)據(jù)文件 5 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR

10、 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 夾中。文件名應(yīng)保持唯一性。 3.4. 當(dāng)日試驗結(jié)束后，認真填寫涉及試驗前、中、后的各項記錄， 記錄要與實際相符。 3.5. 實驗記錄要真實，不得隨意涂改，如確需更改，應(yīng)在所需更改 內(nèi)容上劃雙紅線，填上新內(nèi)容，說明更改原因并簽名。 6 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 實驗室生物防護程序 1. 目的：確保檢測工作不影響工作人員的身心健康，廢棄標本不造 成環(huán)境

11、污染。 2. 適用范圍：臨床基因擴增檢驗實驗室全體人員。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 嚴格執(zhí)行生物防護和安全制度，監(jiān)控各種危險因素，采取有效 控制措施，注意個人生物安全防護，實驗中嚴格按照各種標準 操作程序操作。 3.2. 每天更換廢液缸的 5500mg/L有效氯含量消毒液，并保證 5500mg/L 有效氯含量消毒液用量為廢液缸內(nèi)總液量的 1/5 左 右。正確配置使用消毒液。 3.3. 實驗臺面日常清潔時使用 75的酒精擦拭。每區(qū)每天實驗前 后紫外燈照射3060 min，如有需要可延長照射時間，對工作 臺面實驗前后也要用紫外燈照射3060 min，并作好記錄。 3.4. 標本采集、運送過程中，

12、應(yīng)保持容器完好，無泄漏。工作桌面 或地面一旦有標本污染時，應(yīng)及時用含氯消毒液清潔，再用 75%的酒精清潔桌面。 3.5. 實驗廢棄物、患者樣本均可能具有傳染性，應(yīng)按照生物傳染性 質(zhì)對待，應(yīng)嚴格按照實驗室廢棄物處理制度處理。 3.6. 有下列情況之一者，還需另外消毒：手接觸有傳染性的微生物； 7 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 水龍頭、水池肥皂、工作服可能同時被大量細菌污染者。消毒 劑可用2000mg/L 有效氯含量消毒液。 3.7. 在基

13、因擴增檢驗實驗室門上需貼上生物危害標志，非工作需 要，其他人員不得入內(nèi)。與實驗無關(guān)的任何私人物品嚴禁入內(nèi)。 3.8. 實驗室工作人員應(yīng)接受生物安全相關(guān)培訓(xùn)，了解病原體感染的 途徑和預(yù)防方法。 3.9. 接觸感染性物質(zhì)的實驗室人員必須作好個人防護，戴好手套、 口罩和帽子，禁止裸手接觸任何物質(zhì)，不要戴著手套觸摸皮膚。 3.10. 實驗人員進入PCR實驗工作區(qū)，應(yīng)換上各區(qū)的專用工作服， 離開時脫下該區(qū)的工作服，并掛在指定的地方。工作結(jié)束后， 立即洗手才可離開。 3.11. 實驗結(jié)束后必須立即對工作區(qū)進行清潔消毒。桌面在工作 結(jié)束后，必須立即用消毒液（2000mg/L 有效氯含量消毒液或 75%酒精等

14、）擦拭，并將可移動紫外燈調(diào)至距實驗臺60-90cm 內(nèi)照射消毒30-60min。 3.12. 保證實驗室所用的實驗消耗品均經(jīng)過高壓滅菌處理。 3.13. 制定防火、防盜措施：及時檢查電線是否老化，發(fā)現(xiàn)隱 患應(yīng)及時排除；防盜措施：設(shè)內(nèi)保安全機制，由 PCR 室工 作人員為安全員，負責(zé)工作完畢后檢查門窗。 3.14. 要嚴格執(zhí)行以上各項措施，并定期由室負責(zé)人對以上措施 的落實情況予以調(diào)查。如調(diào)查不合格，對相應(yīng)責(zé)任人進行處罰， 8 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2

15、020.07.28 并限期整改。 3.15. 工作人員在實驗過程中懷疑被感染、發(fā)生重大生物污染時， 應(yīng)立即停止試驗并報告上級，并暫時關(guān)閉實驗室，進行嚴格的 消毒，并根據(jù)實際情況，采取相應(yīng)有效措施避免感染的發(fā)生或 蔓延。如遇實驗中手指被劃破，應(yīng)立即用水沖洗、消毒包扎傷 口，樣品或檢測試劑濺入眼睛內(nèi)立即用大量清水沖洗；濺入嘴 內(nèi)，先吐出殘留的液體后用水反復(fù)漱口，并立即上報實驗室負 責(zé)人，并有實驗室負責(zé)人上報醫(yī)院感染科，同時抽血做相應(yīng)病 原體檢測。后續(xù)傷者應(yīng)在接觸后6 周、3 個月、6 個月及12 個 月各采血檢查一次。 3.16. 實驗中若發(fā)生標本破裂或外泄時，應(yīng)立即停止工作，將破 裂標本放入生物

16、垃圾桶，用5500mg/L 次氯酸鈉溶液消毒污染 處，再用75%乙醇擦拭干凈，用紫外燈照射1 小時后開始工作。 9 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 儀器設(shè)備管理程序 1. 目的：確保實驗室儀器設(shè)備得到妥善的管理。確保檢測質(zhì)量，保 障儀器設(shè)備的使用壽命。 2. 適用范圍：本程序適用于基因擴增檢驗診斷室所有的儀器設(shè)備的 購置、驗收、使用、校正和維護管理。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 儀器購買原則：根據(jù)醫(yī)院有關(guān)規(guī)定本著“質(zhì)優(yōu)價廉”進行，所 購儀

17、器必須三證齊全（生產(chǎn)許可證、產(chǎn)品注冊證、經(jīng)營執(zhí)照）， 并能與基因診斷實驗室的工作條件相符 3.2. 儀器的購買程序 3.2.1. 儀器廠家的確定：先由實驗操作人員提出初步意見，提 供2 家或2 家以上（特殊情況1 家亦可）廠家的有關(guān)儀 器信息，提交醫(yī)院招標審核討論。 3.2.2. 儀器的購買：由藥械科負責(zé)與供貨商聯(lián)系供貨。 3.2.3. 儀器的驗收：供貨商送來儀器后由藥械科人員和實驗操 作人員共同驗收，在廠家的供貨清單上簽字。 3.2.4. 儀器的放置：根據(jù)儀器本身的要求及基因診斷實驗室各 區(qū)的要求安放儀器。 3.2.5. 基因診斷實驗室的主要儀器設(shè)備均需建立檔案，檔案內(nèi) 容包括：設(shè)備的名稱及

18、型號、制造商名稱、設(shè)備編號、 10 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 啟用日期、目前放置地點、設(shè)備責(zé)任人，并應(yīng)有儀器的 標準操作SOP 或其它技術(shù)資料復(fù)印件。 3.3. 常規(guī)儀器設(shè)備的操作使用程序 3.3.1. 儀器設(shè)備的使用授權(quán) HYPERLINK . 僅有本實驗室工作人員有權(quán)使用實驗室的儀器設(shè) 備。 HYPERLINK 儀. 器設(shè)備的使用者在使用前首先必須熟悉儀器設(shè)備 的操作使用程序并經(jīng)實驗室負責(zé)人考核認可。 HYPERLINK . P

19、CR 實驗室現(xiàn)有工作人員均經(jīng)工程師操作培訓(xùn)，共 同完成實驗室檢測系統(tǒng)的建立，管理文件的撰寫工 作。 3.3.2. 儀器設(shè)備的使用 HYPERLINK . 儀器設(shè)備的使用嚴格遵守分區(qū)使用管理。 HYPERLINK . 儀器設(shè)備的使用必須嚴格遵循儀器設(shè)備的標準操作 規(guī)程。 3.3.3. 儀器設(shè)備的維護保養(yǎng) HYPERLINK . 儀器設(shè)備應(yīng)定期校準，具體參照“儀器設(shè)備校準程 序”。 HYPERLINK . 儀器出現(xiàn)故障應(yīng)作記錄和處理意見，如不能正常使 用，應(yīng)聯(lián)系廠家設(shè)備維修人員或相關(guān)專門維修單位 進行處理，并填寫維修記錄。 11 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CX

20、WJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 HYPERLINK . 儀器應(yīng)有工作狀態(tài)標識，正常運行的各區(qū)儀器應(yīng)貼 有相應(yīng)的標簽（綠色）以表明其狀態(tài)。待維護的儀 器用黃色標簽。有故障待修暫停儀器用紅色標簽。 需定期作校準或檢定的儀器應(yīng)有校準或檢定日期及 下次校準或檢定日期的記錄。 HYPERLINK . 本實驗室所有儀器、設(shè)備均為專用不外借。 12 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 20

21、20.07.28 儀器設(shè)備校準程序 1. 目的：確保實驗室儀器設(shè)備得到妥善的管理，確保檢測質(zhì)量。 2. 適用范圍：本程序適用于適用于實驗室所有的儀器設(shè)備。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 校準方法： 3.1.1. 定量擴增儀、生物安全柜、冷凍高速離心機功能性儀器 由各生產(chǎn)廠家每年進行一次維修檢測，并將此作為校準 依據(jù)。 3.1.2. 移液器校準外送專業(yè)機構(gòu)專業(yè)人員進行校準。 3.1.3. 干式恒溫器使用經(jīng)質(zhì)量檢定的溫度計進行自行校準。 3.1.4. 移動紫外線消毒車由實驗室工作人員季度對紫外燈管的 紫外線進行測試。新燈管要求紫外線強度大于或等于 90UW/cm2, 舊燈管紫外線強度大于或等于70

22、UW/cm2。 并將此作為校準依據(jù)。 3.2. 校準計劃 3.2.1. 啟用校準：設(shè)備在投入使用時實施啟用校準。 3.2.2. 周期校準：設(shè)備在投入使用后，每年實施一次校準。 3.2.3. 維修后校準：設(shè)備在維修后須經(jīng)校準方可重新投入使用。 3.2.4. 校準計劃外的校準：如在檢測及EQA，IQC 活動中發(fā)現(xiàn) 存在結(jié)果漂移或偏差及其它可疑情況時，通過分析對可 13 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 疑設(shè)備及時實施校準。 3.2.5. 移液器

23、的校準順序：按照單一流向規(guī)定，對移液器的校 準首先校準試劑準備區(qū)，然后依次為樣本處理區(qū)和 PCR 擴增區(qū)。每校準完一個區(qū)的移液器，將其放回原處后， 再取下一個區(qū)的移液器進行校準。 3.2.6. 校準安排在不進行樣本檢測的日期完成。 3.2.7. 校準的有效標識：經(jīng)校準的設(shè)備上應(yīng)標明本次校準日期。 14 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 實驗室防污染程序 1. 目的：預(yù)防臨床基因擴增實驗室擴增過程中污染的發(fā)生,避免假陽 性結(jié)果的干擾，保證檢測

24、質(zhì)量。 2. 適用范圍：適用于臨床基因擴增檢驗實驗室的檢測報告體系中污 染的控制。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 污染的定義：PCR 污染來源主要包括標本間交叉污染，PCR 試劑污染，PCR 擴增產(chǎn)物的污染，實驗中克隆質(zhì)粒的污染。 預(yù)防污染即從樣本采集到樣本檢測各階段及實驗室環(huán)境各方 面進行控制以防止污染的發(fā)生。 3.2. 污染的預(yù)防 3.2.1. 實驗室的基本設(shè)置 臨床基因擴增檢驗實驗室分三個區(qū)，（1）試劑準備區(qū)， （2）標本處理區(qū)，（3）擴增分析區(qū)。各區(qū)相應(yīng)隔離，有獨立 緩沖間，并遵循從123 區(qū)的單方向工作。各區(qū)有完善的清 潔及消毒措施，并定期清潔和消毒。各區(qū)物品嚴格分開，不能 串用。 微

25、量移液器應(yīng)定區(qū)使用，定期校準，定時滅菌（半年滅菌 一次，或浸泡或高壓，周期與校準相吻合）。 3.2.2. 標本的采集和保存 15 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 由專人收集標本，標本保存方法依據(jù)檢測項目而定。接收 標本在 PCR 三個工作區(qū)以外，根據(jù)不同的實驗項目要求采集 標本。分裝標本時嚴格禁止將分裝的標本又回倒入原始容器。 標本根據(jù)相應(yīng)要求進行保存。 3.2.3. 試劑選擇 優(yōu)先選用使用 UNG/dUTP 防污染體系的試 劑。 3.2

26、.4. 技術(shù)人員 技術(shù)人員進行崗前培訓(xùn)及定期考核，以確保 熟練掌握PCR 技術(shù)。嚴格遵循標準操作程序進行檢測， 操作避免氣溶膠的污染。 3.2.5. 質(zhì)量保證 HYPERLINK . 實驗方法的建立：采用商業(yè)試劑盒或文獻報道的實 驗方法，如為實驗室自己建立的方法，必須防止污 染的發(fā)生。 HYPERLINK . 設(shè)立陽性和陰性質(zhì)量控制：陽性質(zhì)量控制包括弱陽 性質(zhì)量控制；陰性質(zhì)量控制包括陰性對照和試劑對 照。 HYPERLINK . 由實驗室主任定期檢查質(zhì)量控制曲線，以保證檢測 結(jié)果的精確。 HYPERLINK . 實驗完畢依次以2000mg/L 次氯酸鈉、酒精、水徹底 消毒清潔工作臺，長時間紫外

27、照射消毒實驗室空氣 及工作臺面和其他實驗設(shè)備。 16 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 3.2.6. 污染源的查找 HYPERLINK . 試劑污染:設(shè)立陰陽性對照,有利于監(jiān)測反應(yīng)體系各 成分的污染情況。選擇陽性對照時，應(yīng)選擇擴增弱， 且重復(fù)性好的樣品，因強陽性對照可產(chǎn)生大量不必 要的擴增序列，反而可能成為潛在的污染源。每次 擴增陰性對照除包括一般陰性對照（陰性血清）外， 均應(yīng)包括 PCR 體系中各試劑的試劑對照，即包括 PCR 反應(yīng)所需的

28、全部成分，而不加模板DNA，這對 監(jiān)測試劑中 PCR 產(chǎn)物殘留污染是非常有益的。如果 擴增結(jié)果中試劑對照為陽性結(jié)果，就是某一種或數(shù) 種試劑被污染了。此時，要全部更換一批新的試劑 進行擴增，擴增時設(shè)立不同的反應(yīng)管，每一管含有 一種被檢測試劑，在檢出污染試劑后，應(yīng)馬上處理。 HYPERLINK . 環(huán)境污染：在排除試劑污染的可能性外，更換試劑 后，若不久又發(fā)現(xiàn)試劑被污染了，如果預(yù)防措施比 較嚴密，則考慮可能為環(huán)境污染。 環(huán)境污染中常見的污染源主要有：模板提取時 真空抽干裝置；離心機；冰箱門把手，冷凍架，門 把手或?qū)嶒炁_面等。 可用擦拭實驗來查找可疑污染源。用無菌水浸 泡過的滅菌棉簽擦拭可疑污染源；

29、0.1ml 去離子水浸 17 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 泡；取5ml 做PCR 實驗。 HYPERLINK . 氣溶膠污染:如果經(jīng)過上述追蹤實驗，仍不能查找到 確切污染源，則污染可能是由空氣中PCR 產(chǎn)物的氣 溶膠造成的，此時就應(yīng)該更換實驗場所，若條件不 允許，則重新設(shè)計新的引物（與原引物無相關(guān)性）。 3.2.7. 污染的處理 可使用稀酸處理法：對可疑器具用 1mol/L 鹽酸擦拭或浸泡，使殘余DNA 脫嘌呤；也可使用紫外照 射（U

30、V）法：紫外波長（nm）一般選擇254/300nm，照 射1 小時即可。反應(yīng)液污染:丟棄已污染的反應(yīng)液。 18 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 試劑耗材管理程序 1. 目的：規(guī)定試劑購買原則、驗收的程序和試劑的正確貯存。 2. 適用范圍：本程序適用于實驗室所購的診斷試劑盒、實驗耗材。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 試劑的購買和管理 3.1.1. 試劑購買原則：PCR 檢測試劑選用原則“質(zhì)優(yōu)價廉”并 與實驗室所使用儀器配套，所購試劑必須三證齊

31、全。 3.1.2. 試劑購買程序 HYPERLINK . 試劑廠家的確定：先由具體檢測人員提供 2 家或 2 家以上（特殊情況 1 家亦可）試劑生產(chǎn)廠家的相關(guān) 試劑信息，將申請?zhí)峤凰幮悼?，藥械科與經(jīng)銷商議 價。 HYPERLINK . 試劑的購買：實驗室人員提前 1 月以上上報采購申 請單，交由藥械科與供貨商聯(lián)系供貨。 3.1.3. 試劑生產(chǎn)廠商的變更：為保證試劑使用的穩(wěn)定性，原則 上一年內(nèi)不變更試劑生產(chǎn)廠商，如在使用過程中發(fā)現(xiàn)質(zhì) 量問題，操作人員及時向?qū)嶒炇邑撠?zé)人匯報，必要時提 出更換試劑生產(chǎn)廠家的要求，交試劑審核組討論決定。 3.1.4. 試劑驗收： HYPERLINK . 藥械科工作人員

32、與實驗室工作人員負責(zé)核對試劑品 19 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 名、數(shù)量和價格，并在供貨清單上簽字。 HYPERLINK . 實驗室操作人員負責(zé)試劑質(zhì)量驗收（內(nèi)外包裝驗 收）： HYPERLINK 外. 包裝要求：包裝完整無損、標識清楚齊全（品名、 廠家、批準文號、生產(chǎn)日期、效期）、所購試劑需 保證至少仍有三個月以上效期； HYPERLINK . 內(nèi)包裝要求：內(nèi)包裝完好無損、無泄漏，試劑各部 分、說明書齊全。供貨清單由試劑管理人員保

33、管， 試劑驗收后登記存儲。 3.1.5. 試劑儲存：試劑盒保存按照說明書規(guī)定進行。PCR 檢測 試劑分區(qū)保存：擴增反應(yīng)體系試劑保存于試劑儲存區(qū)； 對照品、定量校準品、核酸提取試劑儲存于樣品處理區(qū)。 3.1.6. 試劑出現(xiàn)質(zhì)量問題，立即書面通知實驗室負責(zé)人員，在 其知情同意下，聯(lián)系經(jīng)銷商辦理退換貨手續(xù)。 3.2. 實驗耗材的購買和管理 3.2.1. 購買：由實驗室工作人員填寫申請，按需提出所購耗材 的品名、規(guī)格、數(shù)量，由實驗室負責(zé)人簽字同意后藥械 科購買。 3.2.2. 驗收：消耗品購進后由實驗室工作人員核對數(shù)量、規(guī)格， 查驗外包裝是否破損，如發(fā)生破損或其它質(zhì)量問題，給 予退回。由實驗室工作人員

34、負責(zé)進行質(zhì)量驗收。 20 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 3.2.3. 實驗操作人員對庫存試劑定期每月檢查，并填寫試劑使 用記錄表，不使用過期試劑，并杜絕浪費現(xiàn)象。 21 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 標本的管理程序 1. 目的：加強標本采集、運送、貯存、廢棄的管理，保證檢驗結(jié)果

35、準確性與有效性。 2. 適用范圍：本程序適用于各類臨床標本的管理。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 標本的唯一性標識：標識構(gòu)成-病人姓名、標本采集日期、 檢測、該檢測批次的標本序號，無間隔符號。標本的唯一性標 識須字跡清晰明了，不得隨意作任何涂改；必須時，在舊標識 上劃雙線更改，更改后應(yīng)保持舊標識可辨識。 3.2. 標本的采集、驗收、拒收：檢測標本為血清時，要求用真空采 血管采集血液標本；檢測標本為鼻咽試子時，要求用專用的采 集試子采集標本，接收標本時應(yīng)核對標本與檢驗申請單的一致 性。標本接受人須檢查標本狀態(tài)：標本合乎要求，須在標本記 錄上注明合格，作進一步處理；標本不合格，工作人員有權(quán)拒 受標本

36、，其它后續(xù)處理過程中發(fā)現(xiàn)的不合格，應(yīng)記錄其狀態(tài)并 通知相關(guān)科室重新送檢。 3.3. 標本的安全處理：實驗室所有的廢棄標本、使用過的耗材等均 應(yīng)永濃度為2000mg/L 的有效氯消毒液噴灑消毒，然后再作相 應(yīng)的處理。所有標本均可能具有傳染性，須嚴格遵守檢驗中心 有關(guān)院內(nèi)感染及醫(yī)用垃圾的管理和處理規(guī)定，工作人員須注意 22 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 保持并隨時檢查容器的完整和無標本外泄發(fā)生。 23 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號：

37、 WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 實驗室檢測結(jié)果報告程序 1. 目的：檢測報告是過程的最終輸出，為使報告的生成、發(fā)放、管 理受控，特制訂本程序。 2. 適用范圍：本程序適用于本基因擴增檢驗實驗室所有臨床檢測的 結(jié)果報告，只有經(jīng)PCR 培訓(xùn)并獲得上崗證的工作人員才有權(quán)審核 和簽發(fā)報告單。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 檢測結(jié)果的報告應(yīng)準確、清晰、明確、客觀和及時，杜絕虛假 報告。 3.2. 實時熒光 PCR 測定時，其檢測數(shù)據(jù)要經(jīng)過分析，避免因非特 異性熒光而造成假陽性結(jié)果。根據(jù)質(zhì)

38、控品判斷 PCR 擴增的有 效性，只有當(dāng)質(zhì)控品的實驗數(shù)據(jù)在控時，才可發(fā)出報告，否則 應(yīng)重新測定。 3.3. 定性結(jié)果報告以陽性/陰性報告，根據(jù)擴增曲線判讀試驗結(jié)果。 3.4. 病人檔案及測定結(jié)果及病人檔案一并登記到實驗結(jié)果記錄表 中，由室負責(zé)人管理所有病人資料。每份報告均應(yīng)由我實驗室 出具；報告內(nèi)容至少應(yīng)包括：病人姓名、性別、年齡、樣本號、 標本特性、標本狀態(tài)、標本接收日期及測定、測定方法、結(jié)果、 參考范圍以及操作者和審核者的簽名和檢測日期等內(nèi)容。否則 視為無效或虛假報告單。以上記錄實行完整保存，至少保存2 24 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/

39、修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 年以上。 3.5. 報告單應(yīng)及時發(fā)出。 3.6. 打印當(dāng)日檢測報告匯總表，存檔，妥善保存2 年以上 3.7. 當(dāng)臨床科室醫(yī)生要求電話報告結(jié)果時，應(yīng)先確認對方身份，核 對其所查詢的病人姓名、病區(qū)床號等情況，方可報告，并明確 告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準。 25 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 實驗室質(zhì)量控制管理程序 1.

40、 目的：監(jiān)控本實驗室常規(guī)工作的可靠性和有效性，確定檢測結(jié)果 能否報告。 2. 適用范圍：本程序適用于實驗室臨床檢測實驗全過程，實驗室工 作人員均須熟知并遵守本程序，并逐步完善室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評 工作。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 室內(nèi)質(zhì)控 3.1.1. 由于核酸擴增的高敏感性，為避免假陽性和假陰性，必 須對DNA 和RNA 分析的各步進行質(zhì)量控制，以保證測 定結(jié)果的準確性和重復(fù)性。室內(nèi)質(zhì)控包括標本制備、逆 轉(zhuǎn)錄、擴增和產(chǎn)物分析中的每一步。 3.1.2. 逆轉(zhuǎn)錄和擴增：包括陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。對逆轉(zhuǎn)錄和 核酸擴增的質(zhì)控可使用內(nèi)標質(zhì)控方法也可采用外標質(zhì)控 方法。 3.1.3. 在測定血清/血漿病原

41、體時，應(yīng)使用質(zhì)控品作為質(zhì)控樣本， 與待測臨床標本等同處理提取核酸及擴增，以判斷逆轉(zhuǎn) 錄及擴增檢測的效果。 3.1.4. 質(zhì)控樣本在擴增時必須使用與患者的標本相同的主反應(yīng) 混合液。 26 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 3.1.5. 每一個 PCR 反應(yīng)都必須設(shè)外加陰性質(zhì)控（污染監(jiān)測質(zhì) 控）。 3.1.6. 測定結(jié)果的評價： HYPERLINK . 采用實時熒光定量PCR 檢測方法，在判斷結(jié)果時， 應(yīng)先對擴增的熒光信號作出定性判斷，然后再進

42、行 定量分析，避免一些非特異性熒光信號對結(jié)果分析 的干擾。 HYPERLINK . 當(dāng)質(zhì)控標本實驗數(shù)據(jù)在控時，方可發(fā)出臨床標本的 檢測報告。 HYPERLINK . 每次實驗的質(zhì)控數(shù)據(jù)均要作記錄，如有失控現(xiàn)象應(yīng) 及時分析失控原因并采取措施，并做記錄。 3.2. 室間質(zhì)評 3.2.1. 參加甘肅省或衛(wèi)生部臨檢中心相關(guān)檢測的室間質(zhì)量評 價。 3.2.2. 室間質(zhì)控樣本的接收和驗收參見室間質(zhì)量標準操作規(guī) 程。 3.2.3. 質(zhì)控標本的檢測按常規(guī)臨床標本對待，檢測結(jié)果須在截 止日期前上報。 3.2.4. 對室間質(zhì)評的反饋結(jié)果進行分析，確定工作中須修正的 環(huán)節(jié)。 27 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編

43、號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 實驗室檢測結(jié)果報告程序 1. 目的：檢測報告是過程的最終輸出，為使報告的生成、發(fā)放、管 理受控，特制訂本程序。 2. 適用范圍：本程序適用于本基因擴增檢驗實驗室所有臨床檢測的 結(jié)果報告，只有經(jīng)PCR 培訓(xùn)并獲得上崗證的工作人員才有權(quán)審核 和簽發(fā)報告單。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 檢測結(jié)果的報告應(yīng)準確、清晰、明確、客觀和及時，杜絕虛假 報告。 3.2. 實時熒光 PCR 測定時，其檢測數(shù)據(jù)要經(jīng)過分析，避免因非特 異性熒光而造成假陽性結(jié)果。根

44、據(jù)質(zhì)控品判斷 PCR 擴增的有 效性，只有當(dāng)質(zhì)控品的實驗數(shù)據(jù)在控時，才可發(fā)出報告，否則 應(yīng)重新測定。 3.3. 每份報告均應(yīng)由我實驗室出具；報告內(nèi)容至少應(yīng)包括：醫(yī)院名 稱、病人姓名、性別、年齡、科室、樣本號、標本特性、標本 狀態(tài)、標本接收日期、測定方法、結(jié)果、參考范圍以及操作者 和審核者的簽名和檢測日期等內(nèi)容。否則視為無效或虛假報告 單。以上記錄實行完整保存，至少保存2 年以上。 3.4. 報告單應(yīng)及時發(fā)出，住院病人報告單及時(12h 內(nèi))送至送檢科 室；門診病人（愿檢盡檢人員）報告單應(yīng)告知患者報告時間（24h 28 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版

45、本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 之內(nèi)），并于此時間內(nèi)送至門診報告存放處；發(fā)熱門診病人應(yīng) 當(dāng)在規(guī)定時間內(nèi)（6h）出具報告單。 3.5. 當(dāng)臨床科室醫(yī)生要求電話報告結(jié)果時，應(yīng)先確認對方身份，核 對其所查詢的病人姓名、病區(qū)床號等情況，方可報告，并明確 告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準。 29 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 抱怨處理程序 1. 目的：“抱怨

46、”往往提示實驗室存在著尚未得到認識的漏洞或問 題。為正確處理好“抱怨”，鞏固和完善實驗室質(zhì)量體系，特制 訂本程序。 2. 適用范圍：本程序適用于來自于患者，臨床醫(yī)護人員或?qū)嶒炇夜?作人員針對檢測結(jié)果質(zhì)量、服務(wù)質(zhì)量或?qū)嶒炇夜芾淼葐栴}的投訴。 每個實驗室工作人員均有責(zé)任接待申訴者，實驗室負責(zé)人對抱怨 進行處理，如超出室負責(zé)人職權(quán)范圍，上報醫(yī)院有關(guān)部門處理。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 接到抱怨 3.2. 記錄抱怨 3.3. 提出針對具體抱怨的處理方法 3.3.1. 對患者提出的合理要求及時進行處理。 3.3.2. 調(diào)查事情原委，根據(jù)調(diào)查結(jié)果對相關(guān)責(zé)任人進行處罰。 3.3.3. 向患者或醫(yī)生解釋相關(guān)

47、實驗程序和可能臨床情況，幫助 客戶解除疑慮。 3.4. 征求抱怨方對處理方法的意見 3.5. 執(zhí)行解決方案 3.6. 記錄最后的處理結(jié)果 30 XX 市第二人民醫(yī)院檢驗科 文件編號： WEY-JYK-PCR-CXWJ 版本/修訂號： A/0 PCR 實驗室程序文件 頒布日期： 2020.07.28 實施日期： 2020.07.28 檢驗過程中發(fā)生故障時的應(yīng)急處理程序 1. 目的：為避免因儀器設(shè)備發(fā)生故障和試劑盒發(fā)生質(zhì)量問題而影響 到臨床檢測報告的及時性和準確性，特制定本程序。 2. 適用范圍：本程序適用于可能影響到檢測報告發(fā)出的儀器設(shè)備和 試劑等，對于潛在著一定的可能影響檢測質(zhì)量的不確定因素，一 旦發(fā)生，作為對應(yīng)措施，實驗室應(yīng)有一套相應(yīng)的應(yīng)急處理程序， 室負責(zé)人有責(zé)任組織并直接監(jiān)督本程序的實施。 3. 具體內(nèi)容： 3.1. 科室負責(zé)人接到異常情況報警后，立即現(xiàn)場確認異常情況的性 質(zhì)：觀察有無誤操作、偶發(fā)現(xiàn)象或確屬不能立即排除的故障。 3.2. 用紅牌故障標志標示故障儀器，放置到其它實驗室，以防被錯 誤使用。 3.3. 小型儀器配送廠家維修