實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、器皿及用具

1、第二章 實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、器皿及器具白鳳麟2021.9.12.一、實(shí)驗(yàn)室設(shè)置二、實(shí)驗(yàn)室儀器三、實(shí)驗(yàn)室器皿及器具四、洗滌技術(shù)五、滅菌技術(shù)六、無菌操作技術(shù) . 組織培育實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃的總體要求 便于隔離 便于操作 便于滅菌 便于察看一、實(shí)驗(yàn)室設(shè)置根本規(guī)劃規(guī)律根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作程序陳列實(shí)驗(yàn)室；接種室和培育室設(shè)在與外界環(huán)境隔離性好的區(qū)域；滅菌室與接種室相鄰；其他實(shí)驗(yàn)室的規(guī)劃可根據(jù)條件，以方便運(yùn)用為宜。.根本實(shí)驗(yàn)室輔助實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室組成預(yù)備室緩沖室無菌操作室培育室細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室溫 室生化分析實(shí)驗(yàn)室.根本實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃平面圖實(shí)驗(yàn)臺(tái)擱架培育架培育架培育架培育架藥品及儀器柜無菌臺(tái)無菌臺(tái)擱架拉窗冰箱擱 架水槽電爐門4.5m3.

2、0m3.5m4.0m預(yù)備室緩沖室無菌室培育室.植物組織培育實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃表示圖培 養(yǎng) 室準(zhǔn) 備 室滅菌室貯藏室接種室緩沖室.組織培育預(yù)備實(shí)驗(yàn)室.1.預(yù)備室1.1 洗滌間 根據(jù)任務(wù)量的大小決議其大小，普通面積控制在30-50m2。在實(shí)驗(yàn)室的一側(cè)設(shè)置公用的洗滌水槽，用來清洗玻璃器皿。中央實(shí)驗(yàn)臺(tái)還應(yīng)配置2個(gè)水槽，用于清洗小型玻璃器皿。假設(shè)任務(wù)量大，可以購置一臺(tái)洗瓶機(jī)。預(yù)備1-2個(gè)洗液缸，專門用于洗滌對(duì)干凈度要求很高的玻璃器皿。此外還應(yīng)配置落水架、枯燥箱、柜子、超聲波清洗器等。地面應(yīng)耐濕并排水良好。.超聲波清洗器. 面積60平方米左右，配備的主要儀器設(shè)備有 ：冰箱、天平、微波爐、pH計(jì)、培育基分裝器、藥品

3、柜、器械柜、抽氣泵、電爐、各種規(guī)格的培育瓶、培育皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶、貯藏瓶等。冰箱以體積180-200L為宜，用于儲(chǔ)存培育基母液、激素維生素等貴重藥品、彩色膠卷、及保管植物資料。天平應(yīng)有不同感量。1.2培育基配制間1.預(yù)備室. 配備實(shí)驗(yàn)臺(tái)、高壓滅菌鍋、排風(fēng)滅火設(shè)備、細(xì)菌過濾設(shè)備、干熱消毒柜、電爐等。滅菌鍋的選擇應(yīng)根據(jù)不同的要求選擇不同型號(hào)的滅菌鍋。普通實(shí)驗(yàn)室可選用小型的醫(yī)用手提式高壓滅菌鍋，較大的實(shí)驗(yàn)室可選用立式自動(dòng)控制壓力和溫度的滅菌鍋。 消費(fèi)性的實(shí)驗(yàn)室可選用大型的臥式滅菌鍋。 假設(shè)沒有條件的話，可以將上述任務(wù)間合并成一個(gè)預(yù)備間，要求是設(shè)備的安裝和陳列要合理、房間要寬闊、亮堂、透

4、風(fēng)，地面要便于清潔、防滑。1.3 消毒間1.預(yù)備室.2.緩沖室. 無菌操作室主要用于實(shí)驗(yàn)資料的接種操作，所以又叫接種室。通常由里外兩間組成，外間是緩沖間，用于預(yù)備任務(wù)，還有防止污染的作用。緩沖間的門應(yīng)該與接種室的門錯(cuò)開，兩個(gè)門也不要同時(shí)開啟，以保證無菌室不因開門和人的進(jìn)出帶進(jìn)雜菌。緩沖間內(nèi)應(yīng)該設(shè)有水槽、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、鞋帽架、和柜子、紫外燈。無菌操作室的內(nèi)壁該當(dāng)用塑鋼板或瓷磚裝修，任務(wù)人員進(jìn)入操作間前要穿上消過毒的任務(wù)服和拖鞋。 室內(nèi)應(yīng)配有超凈任務(wù)臺(tái)，紫外燈、解剖鏡、各種接種器械等。 3. 無菌操作室.無菌室.無菌室. 為了控制培育室的溫度和光照時(shí)間及其強(qiáng)度，培育室的房間不要窗戶，但該當(dāng)留一個(gè)通氣窗，

5、并安上排氣扇。室內(nèi)溫度由空調(diào)控制，光照由日光燈控制。天花板和內(nèi)墻最好用塑料鋼板裝修，地面用水磨石或瓷磚鋪設(shè)，普通要分兩間，一為光照培育室，一為暗培育。培育室外應(yīng)有一預(yù)備間或走廊。 培育室應(yīng)配有培育架、轉(zhuǎn)床、搖床、光照培育箱、生化培育箱、自動(dòng)控時(shí)器等。日光燈普通用40W，固定在培育架的側(cè)面或擱板的下面，每層有兩支日光燈，間隔在20cm，光照強(qiáng)度為2000-3000lx。4. 培育室.設(shè)計(jì)組培實(shí)驗(yàn)室時(shí)的本卷須知為了減少污染，實(shí)驗(yàn)室最好設(shè)一走廊且走廊上方最好安裝紫外燈；培育室最好設(shè)在南面，設(shè)大玻璃窗，以雙層玻璃窗為最好。假設(shè)培育室是設(shè)在房屋的邊側(cè)，其東邊或西邊的墻上也可設(shè)置大玻璃窗；培育室房間及門要

6、小，而且密閉性要好，最好裝移門；無菌操作室要小，要設(shè)緩沖間，也最好裝移門，且門要稍大一些。.二、儀器與設(shè)備1、根本設(shè)備 冰箱、電爐、酸度計(jì)、純水器、天平、培育基分裝器、攪拌器等。.酸度計(jì)電熱套.天平.培育基分裝器攪拌器.2、滅菌設(shè)備 蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌安裝、噴霧消毒器、紫外燈。.蒸汽壓力滅菌鍋.干熱消毒柜 利用高溫干熱對(duì)微生物有氧化、蛋白量變性、電介質(zhì)濃縮引起中毒等作用。其中主要是經(jīng)過氧化作用破壞細(xì)胞原生質(zhì)，使微生物死亡，所以在一定的加熱時(shí)間內(nèi)可殺死一切微生物。.無菌瓶頂過濾安裝噴霧消毒器參考圖參考圖.接種器具消毒器.3、無菌操作設(shè)備 超凈任務(wù)臺(tái).無菌接種箱.4、細(xì)胞培育設(shè)備

7、 搖 床.培育架.恒溫振蕩培育箱光照培育箱 .5、細(xì)胞學(xué)鑒定設(shè)備 光學(xué)研討顯微鏡、實(shí)體顯微鏡、倒置顯微鏡倒置顯微鏡光學(xué)顯微鏡.1、玻璃器皿三、培育器皿及實(shí)驗(yàn)器具培育皿三角瓶培育瓶.2、金屬材質(zhì)器具鑷子解剖刀接種針.1、玻璃器皿洗滌新購置玻璃器皿1%稀HCl浸漬12h洗衣粉洗滌清水沖洗晾干備用已用過的玻璃器皿四、洗滌技術(shù).清洗后器皿內(nèi)外不可掛有水珠，否那么重洗，假設(shè)重洗后仍掛有水珠，那么需用洗液浸泡數(shù)小時(shí)后或用去污粉擦洗，重新清洗。.2、塑料用品洗滌新的塑料器皿翻開即用已用過的塑料器皿2%NaOH浸泡12h清水沖洗2%5%鹽酸浸泡30min清水沖洗蒸餾水沖洗晾干備用. 金屬用品普通不宜用各種洗滌

8、液洗滌新的可以用熱洗衣粉水洗凈，需求清洗時(shí)，普通用酒精擦洗，然后火焰枯燥。 3、金屬用品洗滌.一、滅菌任務(wù)是極其重要的。 首先應(yīng)建立有菌和無菌的概念有菌的范疇：有菌：凡是暴露在空氣中的物體，至少其外表都是有菌的。如植物的外表、超凈任務(wù)臺(tái)的臺(tái)面，未處置的工具和手等。 無菌：高壓高溫處置工具、器皿、培育基等 物理或化學(xué)處置； 火烤后的物體； 安康的動(dòng)植物不與內(nèi)外部外表接觸的組織 內(nèi)部能夠是無菌的有時(shí)也有內(nèi)生菌，但 不會(huì)影響培育，也不會(huì)污染五. 滅菌技術(shù).1、物理方法：干熱、濕熱、過濾0.25微米紫外燈、超聲波等。 2、化學(xué)方法：運(yùn)用滅菌劑或抗菌素，如酒精、次氯酸鈉、升汞、漂白粉、高錳酸鉀、雙氧水、

9、福爾馬林等。 五. 滅菌技術(shù).干熱滅菌 玻璃器皿、器械 濕熱滅菌 培育基、蒸餾水、器械、棉塞等熏蒸滅菌 接種室、培育室過濾滅菌 液體培育基、蒸餾水藥劑滅菌 培育資料燒灼滅菌 器械、瓶口、棉塞、包頭紙輻射滅菌 接種室、培育間一各種滅菌方法及其運(yùn)用范圍. 適用于玻璃器皿和金屬器械的滅菌。操作方法：150 、40min或120 、120min，假設(shè)發(fā)現(xiàn)芽孢桿菌，160 、90120min1干熱滅菌. 適用于各種器皿、培育基、器皿、蒸餾水、棉塞、紙等。121 維持2030min留意點(diǎn)：加足水、排盡氣、氣壓降到0時(shí)，才干開蓋。2濕熱滅菌. 培育基的滅菌普通用高壓高溫處置，但假設(shè)培育基中某些成分遇到高溫分

10、解如某些生長(zhǎng)調(diào)理劑GA3、玉米素等，就需求過濾滅菌。另外酶、血清等也需求過濾滅菌。 滅菌方法：將生長(zhǎng)調(diào)理劑或酶配成一定濃度，用注射器注入微孔濾膜慮，濾膜孔徑0.220.45微米。制培育基時(shí)，現(xiàn)將培育基高壓滅菌，待降至50左右時(shí)，參與適量的激素，然后分裝。3過濾滅菌. 主要是利用紫外燈進(jìn)展照射，適宜實(shí)驗(yàn)室空氣、操作臺(tái)等，滅菌時(shí)間2030min。留意：關(guān)燈后5min后再進(jìn)入。超凈任務(wù)臺(tái)關(guān)燈后要翻開風(fēng)機(jī)。4射線滅菌. 用火焰灼燒到達(dá)滅菌目的，適用于接種器皿的滅菌。5火焰灼燒滅菌.適用外植體、實(shí)驗(yàn)器皿、操作外表、皮膚等。幾種常用消毒劑的效果比較消 毒 劑使用濃度(%)消毒時(shí)間(min.)效 果殘液去除

11、難易乙醇70-750.1-3好易新潔爾滅1020530好易氯化汞0.11215最好最難過氧化氫1012515較好最易抗菌素450mgl-13060較好較難次氯酸鈣/納9 10530好易6消毒劑. 長(zhǎng)期不用的培育室或接種室要進(jìn)展熏蒸。方法：甲醛、高錳酸鉀熏蒸。 甲醛的用量通常按每立方米空間2-6毫升計(jì)算，高錳酸鉀的用量是甲醛的一半。室內(nèi)預(yù)備妥當(dāng)后，把稱好的高錳酸鉀放在瓷碗或燒杯內(nèi)(最好在碗或杯下面鋪一張報(bào)紙，以利清洗)，然后將甲醛也倒入碗或杯內(nèi)，立刻出屋關(guān)門。幾秒鐘后，甲醛溶液即沸騰揮發(fā)。高錳酸鉀是一種氧化劑，當(dāng)它與一部分甲醛作用時(shí)，由氧化反響產(chǎn)生的熱可使其他的甲醛揮發(fā)為氣體。7熏蒸滅菌. 甲醛

12、熏蒸接種室應(yīng)至少在運(yùn)用前24小時(shí)進(jìn)展，熏蒸后密閉堅(jiān)持4小時(shí)以上再進(jìn)入室內(nèi)任務(wù)。甲醛對(duì)人的眼、鼻有劇烈刺激作用。因此，可在運(yùn)用前用氨進(jìn)展中和。取與甲醛等量的氨水，倒在另一個(gè)燒杯里，迅速放入熏蒸室內(nèi)，使甲醛和氨水發(fā)生中和反響，以消除甲醛味，減少對(duì)人體的刺激作用。運(yùn)用氨水應(yīng)在任務(wù)前2小時(shí)進(jìn)展。 對(duì)有資料的培育室，也可以采用乙二醇加熱熏蒸。.二接種室滅菌空氣消毒滅菌接種室超凈任務(wù)臺(tái)紫外燈照射70%75%的酒精擦洗培育資料的接種紫外燈照射.三外植體滅菌流水沖洗1020min或更長(zhǎng)時(shí)間70%75%酒精中浸泡30s0.1%0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸餾水沖洗45次在10%的次氯酸鈉、飽和漂白粉浸泡

13、30min左右備用.常用消毒劑消毒滅菌比較表消毒劑使用濃度（%）去除難易消毒時(shí)間（min）效果次氯酸鈣次氯酸鈉漂白粉溴水過氧化氫升汞酒精抗生素硝酸銀9102飽和溶液1210120.11707545（mg/L1易易易易最易較難易中較難5305305302105152100.223060530很好很好很好很好好最好好較好好.污染來源人為要素任務(wù)人員本身：任務(wù)服、帽、口罩、酒精擦手。物品要素器皿和器具培育皿：洗熱壓 玻璃器皿：洗干熱干熱箱或晾干 接種器具：用CCL4布擦濕布擦 泡75%95%酒精燒培育基：濕熱培育資料外部細(xì)菌：用水沖洗化學(xué)藥劑處置 內(nèi)部細(xì)菌 莖尖培育 加抗生素：青霉素、利福平操作的空

14、氣：洗刷地板95%酒精擦超凈任務(wù)臺(tái) 用化學(xué)試劑薰蒸六、無菌操作技術(shù).1、實(shí)驗(yàn)器具和資料的預(yù)備2、用75%的酒精擦拭超凈任務(wù)臺(tái)，然后室內(nèi)及超凈任務(wù)臺(tái)用紫外燈殺菌20min-30min。留意：臺(tái)面上的用品不要放置太多或重疊放置，以免降低滅菌效果。3、關(guān)紫外燈、翻開風(fēng)機(jī)，過5-10min進(jìn)入緩沖間，以75%洗手和手臂，改換無菌服、帽子和口罩。進(jìn)入接種室。注：沒有特別情況，盡量不要下任務(wù)臺(tái)六、無菌操作技術(shù).4、用7075的酒精拭擦臺(tái)面并消毒雙手。實(shí)驗(yàn)器具也應(yīng)該用酒精消毒。點(diǎn)燃酒精燈，將金屬器械在其火焰上灼燒，冷卻待用。留意：一切操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過灼燒進(jìn)展。金屬器械不能過度灼燒，以防退火。移液管不能

15、灼燒，培育瓶口、塑料資料、橡膠資料過火焰不能時(shí)間太長(zhǎng)。.5、取流水沖洗至少30min過的外植體，用一定的消毒劑浸泡消毒，用無菌水沖洗34次，放入無菌培育皿中，置于酒精燈火焰下方，用無菌的接種器械進(jìn)展分別、切割或其他處置。6、翻開培育瓶，瓶口在燈焰處旋轉(zhuǎn)灼燒，用鑷子將培育資料置于培育基上，灼燒鑷子放回，灼燒瓶口，蓋上瓶塞。7、用酒精擦洗任務(wù)臺(tái)和手。進(jìn)展下一輪操作。.留意1進(jìn)展培育時(shí)，動(dòng)作要準(zhǔn)確矯捷，但又不用太快，以防空氣流動(dòng)，添加污染時(shí)機(jī)。2不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品改換。 3為拿取方便，任務(wù)臺(tái)面上的用品要有合理的規(guī)劃，原那么上應(yīng)是右手運(yùn)用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。4任務(wù)由始至終要堅(jiān)持一定順序性，組織或細(xì)胞在未做處置之前，勿過早暴露在空氣中。同樣，培育液在未用前，不要過早開瓶；用過之后如不再反復(fù)運(yùn)用，應(yīng)立刻封鎖瓶口直立可添加落菌時(shí)機(jī)。.5汲取營養(yǎng)液、細(xì)胞懸液及其它各種用液時(shí)，均應(yīng)分別運(yùn)用吸管，不能混用，以防擴(kuò)展污染或?qū)е录?xì)胞交叉污染。6任務(wù)中不能面向操作區(qū)講話或咳嗽，以免唾沫把細(xì)菌或支原體帶入任務(wù)臺(tái)面發(fā)生污染。7手或相對(duì)較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時(shí)如吸管尖碰到瓶口，那么應(yīng)將吸管丟掉。.接種時(shí)在近火焰處翻開瓶口，使瓶?jī)A斜，以免空氣中微生物落入瓶中。正 確