體內(nèi)藥物分析中的樣品預(yù)處理技術(shù)

1、體內(nèi)藥物分析中的樣品預(yù)處理技術(shù)體內(nèi)藥物分析是指體內(nèi)樣品（生物體液、器官或組織）中藥物及 其代謝產(chǎn)物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)的定量分析。通常藥物進(jìn)入體內(nèi)后，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與存在狀態(tài)就可能發(fā)生顯著變 化。在體液中，藥物的存在形式多樣化，除游離型的原料藥物或其代 謝物，也有原形藥物或其代謝物與葡萄糖醛酸等內(nèi)源性小分子經(jīng)共價(jià) 結(jié)合的結(jié)合物（或綴合物），還有與蛋白質(zhì)分子經(jīng)氫鍵及其他分子間 力結(jié)合的結(jié)合型藥物；而且藥物及其代謝物的濃度通常很低、干擾物 質(zhì)多。因此，在測(cè)定時(shí)，除少數(shù)情況將體液作簡(jiǎn)單處理后可直接測(cè)定 外，通常在測(cè)定前要對(duì)體內(nèi)樣品進(jìn)行分離凈化與濃集等樣品前處理， 從而為體內(nèi)樣品中藥物的測(cè)定提供良好的環(huán)境

2、和條件。常用的樣品前 處理方法有：去除蛋白質(zhì)、綴合物水解、化學(xué)衍生化、分離濃集及微 波萃取和微透析技術(shù)等。一、體內(nèi)樣品種類：體內(nèi)藥物分析采用的體內(nèi)樣品包括血液、尿液、唾液、頭發(fā)、臟 器組織、乳汁、精液、腦脊液、淚液、膽汁、胃液、胰液、淋巴液、 糞便等樣品。這些大都具有：采樣量少；待測(cè)物濃度低；干擾 物質(zhì)多的特點(diǎn)。二、體內(nèi)樣品預(yù)處理的目的：使待測(cè)藥物游離，以便測(cè)定藥物或代謝物的總濃度；滿足測(cè)量方法的要求，純化濃集樣品；保護(hù)儀器性能、改善分析環(huán)境。三、常用生物樣品預(yù)處理技術(shù):1有機(jī)破壞法：濕法破壞：電熱消化器法、電熱板消化法、烘箱消化法干法破壞：高溫電阻爐灰化法、低溫等離子灰化法氧瓶燃燒法2去蛋白

3、質(zhì)法：溶劑解法（加入與水相混溶的有機(jī)溶劑）、加入中性鹽、加入強(qiáng) 酸、加入含鋅鹽或銅鹽的沉淀劑、超濾法、酶水解法、加熱法分離、純化和濃集法：液-液萃取法、固相萃取法綴水物的水解法：酸水解法、酶水解法化學(xué)衍生化發(fā)：硅烷化、?；⑼榛?、紫外衍生化、熒光衍生化、點(diǎn)化學(xué)衍 生化、生成非對(duì)映異構(gòu)體衍生化發(fā)四、新興生物樣品預(yù)處理技術(shù)：1微波消解2自動(dòng)化固相萃取3固相微萃取4液相微萃取5微透析技術(shù)超臨界流體萃取分子印跡固相萃取這里就固相微萃取技術(shù)和超臨界流體萃取技術(shù)進(jìn)行簡(jiǎn)單說明：固相微萃取固相微萃取(Solid phase micro2-extraction,SPME)是 80 年 代末發(fā)展起來(lái)的樣品預(yù)處理

4、方法，其裝置簡(jiǎn)單，操作方便，已實(shí)現(xiàn) 自動(dòng)控制，適用于現(xiàn)場(chǎng)分析。它用一個(gè)類似于氣相色譜微量進(jìn)樣器的 萃取裝置，從樣品中萃取出待測(cè)物質(zhì)，并直接與氣相色譜(GC)或高 效液相色譜(HPLC)聯(lián)用，在進(jìn)樣口(GC即為氣化室)將萃取的組分 解吸附后進(jìn)行色譜分離檢測(cè)。SPME集萃取、濃縮、進(jìn)樣于一身，極大地提高了分析速度。萃 取模式可分為直接固相微萃取(Direct-SPME)和頂空固相微萃取 (Headspace-SPME,HS-SPME)兩種。Direct-SPME 將涂有高分子固相 液膜的石英纖維直接伸入樣品基質(zhì)中進(jìn)行萃取，經(jīng)過一定時(shí)間達(dá)到 分配平衡，即可取出進(jìn)行色譜分析HS-SPME則將石英纖維放

5、在樣品 溶液上方進(jìn)行頂空萃取，避免了基質(zhì)的干擾，提高了分析速度。HS-SPME在體內(nèi)分析中能克服其它物質(zhì)的強(qiáng)烈干擾，對(duì)生物樣 品的分析步驟少于Direct-SPME法，并能延長(zhǎng)石英纖維的使用壽命。 Fustinoni等用HS-SPME法測(cè)定人血液及尿液中的苯和甲苯含量, 方法是：將2 ml血樣與1 g NaCl加入密封瓶中，在40 C下平衡 30分鐘，用涂有聚二甲基硅氧烷的石英纖維進(jìn)行頂空萃取，從GC 進(jìn)樣口直接進(jìn)樣。GC采用內(nèi)填DB1的熔融硅石英柱，載氣為He氣, 用程序升溫法進(jìn)行分析，校正曲線范圍：12 ng/卜5以g/L ,實(shí)驗(yàn) 結(jié)果的RSD為1 %9 %。體液的背景干擾很小。但HS-S

6、PME也有 其局限性，一般只能萃取沸點(diǎn)較低的藥物。目前設(shè)計(jì)出的一種中空纖 維膜，能從復(fù)雜的生物基質(zhì)中萃取出高沸點(diǎn)的待測(cè)物，有望克服應(yīng) 用范圍窄的不足。 超臨界流體萃取技術(shù)超臨界流體(SF)是指溫度與壓力均在其臨界點(diǎn)之上的流體。在 研究過的超臨界流體體系中,CO2因其價(jià)廉無(wú)毒，應(yīng)用最為廣泛。超臨 界流體同時(shí)表現(xiàn)出液體與氣體的優(yōu)點(diǎn)，既有與液體相近的密度，又 有與氣體相近的粘度及高的擴(kuò)散系數(shù)。故具有很高的溶解能力和良好 的流動(dòng)、傳遞性能，可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的有毒、易揮發(fā)、易燃的有機(jī)溶劑。 超臨界流體萃取技術(shù)(Supercritical fluid extraction, SFE)對(duì)熱 敏感物質(zhì)和復(fù)雜樣品中微

7、量組分萃取的有效性已引起人們關(guān)注，日 前已用于體內(nèi)分析。SFE的裝置主要是有一個(gè)在頭部可進(jìn)行冷卻的注射(或往復(fù)) 泵，用泵把液態(tài)SF壓到一個(gè)萃取池中；萃取池為一置于恒溫箱中的 不銹鋼圓筒，恒溫箱溫度需高于SF的臨界溫度；在萃取池后有一個(gè) 限流器。為保證萃取系統(tǒng)中有一定的壓力，限流器常用一支內(nèi)徑為 50 Lm的彈性石英毛細(xì)管。在采用SFE進(jìn)行萃取時(shí)，為增加溶劑的 選擇性，可加入各種1 %10 %的極性改性劑，如甲醇、異丙醇、 乙睛、二氯甲烷、甲酸等。Allen等分別用SFE與固相萃取(SPE)法測(cè)定了全血中的嗎啡 含量，并對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果加以比較。用SFE萃取時(shí)，以超臨界叫為流動(dòng)相，加入30

8、0p L甲醇-三乙胺(13:7)溶液做為改性劑, 流速2 mL/min,然后進(jìn)行衍生化；另一份血樣先加入0.1 mol/L的 磷酸鹽緩沖液1mL和NH4OH溶液50 p L,用先經(jīng)乙烷處理的SCX固 相小柱萃取，再同樣進(jìn)行衍生化。萃取后待測(cè)組分用GC-質(zhì)譜(M S) 法分離檢測(cè)。與SPE法相比，SFE具有萃取效率高、速度快、選擇 性好、萃取過程易于控制，萃取物易與CO2分離的優(yōu)點(diǎn)。Simmons等 采用SFE技術(shù)從血清和水中萃取苯并二氮雜卓類藥及同化類藥物 (anabolic drug),再用HPLC定量分析。與液-液萃取(LLE)和SPE 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，使用SFE時(shí)，其回收率、精密度均有很大提高，且 LLE需使用大量有機(jī)溶劑，而SFE技術(shù)所用超臨界CO2消耗少，無(wú)毒 副作用。應(yīng)用展望：SPME與SFE技術(shù)作為快捷安全、易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的新型樣品 預(yù)