第三組培養(yǎng)基的制備

1、培養(yǎng)基的制備組員：王雯雯 許帥 劉騰 張凱華1一、目的要求了解并掌握培養(yǎng)基的配制、分裝方法。學習微生物實驗的一些準備方法（滅菌培養(yǎng)皿的準備、滅菌吸管的準備、無菌水的準備、培養(yǎng)基平板和斜面的準備等），為后續(xù)實驗做準備。2二、培養(yǎng)基的類型 按培養(yǎng)基成分來源分類：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基按培養(yǎng)基的用途分類：實驗室用培養(yǎng)基、生產用培養(yǎng)基、根據(jù)所培養(yǎng)微生物的類群與營養(yǎng)類型區(qū)分3實驗室常用的培養(yǎng)基： 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）、馬鈴薯蔗糖瓊脂（PSA）培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（NA）、伊紅美蘭培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基、高氏I號培養(yǎng)

2、基、察式合成培養(yǎng)基4三、實驗原理培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質的要求也各不相同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養(yǎng)基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。 任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應及時徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。5四、實驗器材試劑：蛋白胨、牛肉膏、NaCl、瓊脂、乳糖、K2HPO4、豬膽鹽、2伊紅Y溶液，0.65美蘭溶液，0.04溴甲酚紫水溶液、15%NaOH溶液、5%H

3、Cl溶液。 6器皿及材料：天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙（7.2-7.4）、量筒（500ml、1000ml）、刻度搪瓷杯、試管、三角瓶（500ml）、漏斗、分裝架、移液管（2ml）、平皿、玻璃棒、燒杯、試管架、剪刀、酒精燈、棉花、線繩、牛皮紙或報紙、紗布、乳膠管、電爐、滅菌鍋、干燥箱，杜氏小管等。7五、操作方法1、培養(yǎng)基的制備a、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（1）配方：牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 瓊脂 1520g蒸餾水 1000ml pH 7.27.4（2）制法：將稱好的牛肉膏、蛋白胨及NaCl放入搪瓷缸中，加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，再加入15氫氧化鈉2ml，校正pH7.27.

4、4，在石棉網(wǎng)上加熱溶解。將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補足所失的水分。（3）分裝：取玻璃漏斗一個，放在鐵架臺上，將培養(yǎng)基分裝進試管（18180），其裝量不超過管高的1/5，分裝三角瓶的量不超過三角燒瓶容積的一半為宜。8（4）加塞：培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以防止外界微生物進入培養(yǎng)基內而造成污染，并保證有良好的通氣性能。（5）包扎：加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，

5、用麻繩以活結形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。（6）滅菌：一般培養(yǎng)基是在1.05/121.3，15-30分鐘高壓蒸汽滅菌。（7）擱置斜面：將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。9b、伊紅美藍培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）（1）配方：蛋白胨 10g 乳糖10g K2HPO4 2g 瓊脂17g 2%伊紅水溶液 20ml0.65美藍水溶液 10ml 蒸餾水 1000ml pH 7.1（2）制法：將稱好的蛋白胨、乳糖及K2HPO4放入搪瓷缸中，加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，再加入15氫氧化鈉校正pH7.1。（3）分

6、裝：取玻璃漏斗一個，放在鐵架臺上，將培養(yǎng)基分裝進分裝進三角瓶，量不超過三角燒瓶容積的一半為宜。（4）包扎，同上（5）滅菌，同上10C、乳糖膽鹽發(fā)酵管（1）配方：蛋白胨 20g 豬膽鹽 5g 乳糖 10g 0.04溴甲酚紫水溶液 25ml 蒸餾水 1000ml pH 7.4（2）制法：將稱好的蛋白胨、乳糖及豬膽鹽放入搪瓷缸中，加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，再加入15氫氧化鈉校正pH7.1，再加入指示劑。（3）過濾和分裝：取玻璃漏斗一個，在玻璃漏斗中放一層濾紙，放在鐵架臺上，將培養(yǎng)基分裝進試管，每管10ml，并放入小倒管。（4）包扎，同上（5）滅菌，同上112、無菌檢查將滅菌的培養(yǎng)基放入37的溫室中培養(yǎng)2448小時，以檢查