注射液無菌檢查的方法學(xué)驗證方案

1、注射液無菌檢查方法（中國藥典2022版）驗證方案驗證方案編號：2022MEF04105004起草單位(Composed by)： 質(zhì)檢部(QC Department)日期（Date）：日期（Date）：審核人(Reviewed by QC)：日期（Date）：審核人(Reviewed by QA)：日期（Date）：批準人(Approved by)：日期（Date）：起草人（Composer）：.驗證目的.驗證人員.驗證依據(jù)及參考文件.儀器與設(shè)施.驗證過程培育基及稀釋液菌液的培育與制備方法驗證試驗.驗證總結(jié)L驗證目的：本試驗是注射液的抑細菌、抑真菌活性及所用的無菌檢查方法的牢靠性進行 驗證，以

2、確認該產(chǎn)品在該檢驗量、該檢驗條件下無抑菌活性或其抑菌活性已被充 分消退至可以忽視。即：保證所用的無菌檢驗方法能對該產(chǎn)品進行精 確、牢靠的檢驗。.驗證人員：驗證小組組長：劉長宏驗證小組副組長：宋芳良驗證小組成員：曲曉燕、常西勝.驗證依據(jù)及參考文件：驗證依據(jù)：中華人民共和國藥典2022版二部參考文件：2022年版中國藥典無菌檢查方法、驗證操作學(xué)習(xí)班講稿匯編（中國 藥品檢驗所）.儀器與設(shè)施型機動門脈沖真空滅菌器細菌培育箱霉菌培育箱凈化工作臺.驗證過程：培育基及稀釋液培育基及稀釋液的配制按“中國藥典2022版二部附錄XI H無菌檢查法”中，有關(guān)規(guī)定配制本驗證 所需培育基：名稱來源生產(chǎn)批號配制批號硫乙醇

3、酸鹽流體培育基改良馬丁培育基養(yǎng)分肉湯培育基養(yǎng)分瓊脂培育基0.1%蛋白陳溶液0.9%無菌NaCl溶液改良馬丁瓊脂培育基培育基的適用性檢驗.1培育基無菌性檢查從以上培育基及稀釋液中，每批隨機取5支（瓶），培育14天，應(yīng)無菌生長。結(jié)果紀錄:名稱1#2#3#4#5#結(jié)果硫乙醇酸鹽流體培育基改良馬丁培育基養(yǎng)分肉湯培育基養(yǎng)分瓊脂培育基0.1%蛋白陳溶液0.9%無菌NaCl溶液改良馬丁瓊脂培育基注：無菌生長記為“一”；有菌生長記為“+”結(jié)論:.2培育基靈敏度檢查取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培育基9支，分別接種小于lOOcfu的 金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌、生抱梭菌各2支，另1支不接

4、種作為空白比照，培育3天，逐日觀看結(jié)果。取每支裝量為9ml的改良馬丁培育基5支,分別接種小于lOOcfu的白色念 珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白比照，培育5天，逐日觀看結(jié)果。空白比照管應(yīng)無菌生長，假設(shè)加菌的培育基管均生長良好，那么可判該培育基的 靈敏度檢查符合規(guī)定。硫乙醇酸鹽流體培育基批號：菌液名稱第一其次天第三天金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌生抱梭菌空白比照注：無菌生長記為“一”；有菌生長且生長良好記為“ 十 ”；有菌生長但生長 較差記為“差二改良馬丁培育基批號:菌液名稱第1天第2天第3天第4天第5天白色念珠菌黑曲霉空白比照注：無菌生長記為“一”；有菌生長且生長良好記為“

5、+ ”；有菌生長但生長較差 記為“差二結(jié)論:菌液的培育與制備 菌種菌種名稱編號批號代數(shù)金黃色葡萄球菌CMCC (B) 26003銅綠假單胞菌CMCC (B) 10104枯草芽抱桿菌CMCC (B) 63501生抱梭菌CMCC (B) 64941白色念珠菌CMCC (F) 98001黑曲霉CMCC (F) 98003菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的新奇培育物至養(yǎng)分肉 湯培育基中,3035培育1824小時。用0.9%無菌NaCl溶液制成每1ml含 菌數(shù)小于lOOcfu的菌懸液。取肉湯培育物lml+9ml0.9%無菌NaCl溶液，十倍 稀釋至IO-1()-7稀釋級可得約為50

6、io0cfu/ml的菌懸液。用養(yǎng)分瓊脂培育基 做活菌計數(shù)備用。接種生抱梭菌的新奇培育物至硫乙醇酸鹽流體培育基中，3035培育 1824小時。用0.9%無菌NaCl溶液稀釋至10=10-7稀釋級制成每 含菌 數(shù)小于lOOcfu的菌懸液。接種白色念珠菌的新奇培育物至改良馬丁培育基中，2328C培育2448小 時。用0.9%無菌NaCl溶液制成每1ml含菌數(shù)小于lOOcfu的菌懸液。取改良馬 丁培育物lml + 9ml0.9%無菌NaCl溶液，十倍稀釋至10一5需刀稀釋級可得約 為50100cfu/ml的菌懸液。用改良馬丁瓊脂培育基做活菌計數(shù)備用。接種黑曲霉的新奇培育物至改良馬丁瓊脂培育基斜面培育基

7、中，2328培 育57天，加入35ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌NaCl溶 液，將抱子洗脫。然后，吸出抱子懸液至無菌試管中，用含0.05% (ml/ml)聚 山梨酯80的0.9%無菌NaCl溶液制成每1ml含抱子數(shù)小于1 OOcfu的抱子懸液。 取培育物lml + 9ml0.9%無菌NaCl溶液(含0. 05% (ml/ml)聚山梨酯80)十 倍稀釋至IO-稀釋級可得約為50loocfu/ml的泡子懸液。用改良馬丁瓊脂培育 基做活菌計數(shù)備用。菌液制備后在常溫下放置，并在2小時內(nèi)使用。假設(shè)保存在 2-8,可在24小時使用。菌種名稱試 驗 次 數(shù)培育溫 度培育時 間/小

8、 時活菌計數(shù)結(jié)果 cfu/ml空白對 比平皿 cfu/ml平皿1平皿2金黃色葡萄球菌130-35 48 h23銅綠假單胞菌130-35 48 h23枯草芽抱桿菌130-35 48 h23白色念珠菌123-28 72 h23黑曲霉123-28 72 h23生抱梭菌130-35 48 h23注：生抱梭菌只紀錄生長狀況“正?！薄疤貏e”，不計數(shù)。結(jié)論：方法驗證試驗按中國藥典2022版二部規(guī)定，依據(jù)下表中預(yù)定檢驗方案，將規(guī)定量的注射 液供試品按薄膜過濾法過濾，沖洗，在最終一次的沖洗液中分別加入小于lOOcfu 的試驗菌之一，過濾。取出濾膜接種至相應(yīng)培育基中（金黃色葡萄球菌、銅綠假 單胞菌、枯草芽抱桿菌、

9、生抱梭菌接種于硫乙醇酸鹽流體培育基中；白色念珠菌、 黑曲霉接種于改良馬丁培育基中）。另取一裝有同體積培育基的容器，加入等量 的相應(yīng)試驗菌，作為比照。按規(guī)定溫度培育35天，觀看各試驗管生長狀況。 各試驗菌同法操作。方法稀釋液沖洗量產(chǎn)品名稱膜濾 薄過法0.1 %蛋白 膝溶液0ml苦參素氯化鈉注射液、法莫替丁氯化鈉注射液、 胞磷膽堿鈉氯化鈉注射液、維生素C注射液、 胞磷膽堿鈉注射液、利巴韋林注射液、肌昔注射 液、此拉西坦注射液、曲克蘆丁注射液、復(fù)方氨 林巴比妥注射液、鹽酸奈福泮注射液、酚磺乙胺 注射液、苦參素注射液、氫化可的松注射液、尼 莫地平注射液、維生素B6注射液、葡萄糖酸睇 鈉注射液、鹽酸曲馬

10、多注射液、甲硫胺酸VBi 注射液、乙酰胺注射液、鹽酸曲馬多氯化鈉注射 液、磷酸川與嗪注射液、鹽酸納洛酮注射液、果 糖二磷酸鈉注射液100ml地塞米松注射液800ml克林霉素磷酸酯注射液、硫酸小諾霉素注射液、 硫酸妥布霉素注射液、硫酸阿米卡星注射液、硫 酸慶大霉素注射液、鹽酸林可霉素注射液、硫酸 奈替米星注射液PH7.0氯化 鈉一蛋白陳 緩沖液無直接 接種 法X無與比照管(只加陽性菌)相比擬，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好, 那么該供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽視不計， 可以照此檢查法進行該產(chǎn)品的日常無菌檢查。如含供試品的任一容器中微生物生長微弱、緩慢或不生長，

11、那么該供試品的該 檢驗量在該試驗條件下有抑菌作用，可逐一采納以下方法消退或減小該供試品的 抑菌性并重新進行方法驗證：(1)增加沖洗量(2)增加培育基的用量(3)使用中和劑或滅活劑(4)更換濾膜品種同法每個注射液產(chǎn)品至少平行測定三次。第一次試驗結(jié)果:品名：批號：規(guī)格：接種量：沖洗量：稀釋液：菌種名稱結(jié)果紀錄種類1天2天3天4天5天金黃色葡萄球菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）銅綠假單胞菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）枯草芽狗桿菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）生抱梭菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）白色念珠菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）黑曲霉供試品+陽性菌陽性菌（比照）注：試驗管無菌生長記為“一”；有菌生長且生長良好記為“+”；有菌生長但生長狀況較差記為“差二其次次試驗結(jié)果:品名：批號：規(guī)格:接種量：沖洗量：稀釋液：菌種名稱結(jié)果紀錄種類1天2天3天4天5天金黃色葡萄球菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）銅綠假單胞菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）枯草芽狗桿菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）生狗梭菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）白色念珠菌供試品+陽性菌陽性菌（比照）黑曲霉供試品+陽性菌陽性菌（比照）注：試驗管無菌生長記為“一”；有菌生長且生長良好記為“十”；有菌生長但生長狀況較差記為“差二第三次試驗結(jié)果:品名：批號：規(guī)格：接種量：沖洗量：稀釋液：菌種名