感染性疾病免疫學(xué)檢測(cè)

1、關(guān)于感染性疾病免疫學(xué)檢測(cè)第一張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20222什么是感染性疾病?感染性疾病不一定會(huì)傳染，而傳染病一定是感染性疾病一部分疾病可以通過(guò)各種方式，如接觸、消化道、呼吸道、昆蟲叮咬等在正常人體間傳播，具有較強(qiáng)的傳染性，對(duì)社會(huì)危害極大，這一類疾病被歸于傳染病范疇。感染性疾病傳染病非傳染病是由各種病原體，如病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體、螺旋體、寄生蟲等引起的疾病。第二張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20223感染免疫 感染 致病 病原體對(duì)機(jī)體的感染 非特異性免疫 特異性免疫 機(jī)體的抗感染免疫作用 ？第三張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年

2、6月25.08.20224特異性免疫抗體感染免疫第四張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20225人體內(nèi)的5種抗體H鏈： , , , , . (Alpha) (Gamma) (Mu) (Delte) (Epsilon) Ig 種類 IgA, IgG, IgM, IgD, IgE第五張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20226免疫球蛋白的水解片段第六張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20227免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)基本原理基于抗體抗原的結(jié)合具有特異性和專一性的特點(diǎn)利用已知 Ag 未知 Ab利用已知 Ab未知 Ag檢測(cè)檢測(cè)Ag+AbAg-Ab第七張

3、，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20228免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的類型熒光標(biāo)記技術(shù)放射免疫標(biāo)記技術(shù)酶免疫技術(shù)膠體金免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析免疫標(biāo)記技術(shù)經(jīng)典血清學(xué)技術(shù)凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中和反應(yīng)第八張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20229 要保證檢驗(yàn)結(jié)果的正確性和可靠性，必須對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)原理及整個(gè)過(guò)程中各個(gè)環(huán)節(jié)的干擾因素，有比較清楚的掌握和了解。 了解這些干擾因素，對(duì)于我們?cè)谂R床工作中如何注意和解決這些干擾，以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋具有重要意義。第九張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202210常用檢測(cè)項(xiàng)目乙肝兩對(duì)半檢測(cè)

4、梅毒螺旋體抗體檢測(cè)HCV抗體檢測(cè)HIV抗體檢測(cè)第十張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202211一、乙肝兩對(duì)半檢測(cè)項(xiàng)目HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb檢測(cè)技術(shù) ELISA化學(xué)發(fā)光時(shí)間分辨熒光免疫層析檢測(cè)方法 夾心法競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)結(jié)果 定性定量第十一張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202212雙抗體夾心法模式：固相載體AbAg標(biāo)記Ab(一)、HBsAg雙抗體夾心法：兩步法，一步法第十二張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202213HBsAg抗原表位1、共同決定簇： a（aa124-147）；2、型特異決定簇：（1） d/

5、y（ aa122，賴氨酸/精氨酸）；（2） w/r（ aa160，賴氨酸/精氨酸）； 四種亞型：adr、adw、ayr、ayw。 (一)、HBsAg第十三張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202214檢測(cè)中常見(jiàn)的問(wèn)題1、一步法測(cè)定中的鉤狀效應(yīng)（Hook effect）：一步法檢測(cè)時(shí)，受檢抗原的含量很高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及標(biāo)記抗體結(jié)合，而不能形成 “固相抗體抗原標(biāo)記抗體”夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量，這種現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。(一)、HBsAg第十四張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202215雙抗體夾心一步法

6、的鉤狀效應(yīng)固相載體固相AbAg標(biāo)記Ab(一)、HBsAg第十五張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202216鉤狀效應(yīng)是HBsAg一步法檢測(cè)時(shí)不可避免的現(xiàn)象；由于鉤狀效應(yīng)的存在，一步法檢測(cè)HBsAg所得到的檢測(cè)信號(hào)無(wú)法確定其真實(shí)性；解決鉤狀效應(yīng)的根本方法為固相抗體與抗原反應(yīng)后分離游離抗原，再加標(biāo)記抗體的兩步法檢測(cè)：第一步：包被抗體捕獲抗原成為固相，然后分離游離抗原；第二步：固相抗原與標(biāo)記抗體結(jié)合，分離液相標(biāo)記抗體后記錄檢測(cè)信號(hào)。(一)、HBsAg第十六張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202217兩步法檢測(cè)能消除鉤狀效應(yīng)：固相載體AbAg標(biāo)記Ab(一)、H

7、BsAg第十七張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022182、人抗鼠抗體效應(yīng) (Human anti-mouse effect, HAMA效應(yīng)) 對(duì)檢測(cè)的干擾產(chǎn)生HAMA的原因：經(jīng)常接觸老鼠；腫瘤病人進(jìn)行鼠單克隆抗體的治療。 用鼠源McAb檢測(cè)HBsAg時(shí)，如樣品中有HAMA，就會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性。非鼠源的PcAb可消除HAMA效應(yīng)。(一)、HBsAg第十八張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202219 HAMA效應(yīng)的假陽(yáng)性模式：標(biāo)本中的人抗鼠抗體分別與固相HBsAb和標(biāo)記HBsAb McAb結(jié)合，形成固相HBsAbHAMAHBsAb復(fù)合物。固相載體

8、固相McAb標(biāo)記McAb人抗鼠抗體(一)、HBsAg第十九張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022203、S基因突變引起的HBsAg漏檢： 基因突變引起“a”決定簇內(nèi)部一個(gè)或多個(gè)氨基酸置換、缺失或插入，HBsAg 蛋白質(zhì)氨基酸組成發(fā)生改變，導(dǎo)致其抗原性產(chǎn)生變化。 變異率高 ，自然變異和免疫逃避，變異無(wú)地域性。 HBsAg抗原性發(fā)生改變，不能被野生型HBsAb所識(shí)別。 不一定HBsAg抗原性發(fā)生改變后就一定漏檢。很多時(shí)候野生型與突變型是混合存在的，這種情況雖然有突變，同樣可以檢出 。(一)、HBsAg第二十張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202221固

9、相載體HBsAg McAb （“a”）HBsAg McAb （“a”）標(biāo)記McAb（抗“d”）標(biāo)記PcAb（抗“r”）4、PcAb檢測(cè)HBsAg（adr）的靈敏度高于McAb標(biāo)記PcAb（抗“d”）HBsAg標(biāo)記McAb（抗“d”）(一)、HBsAg第二十一張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022225、標(biāo)本自身及前處理引起的干擾因素(一)、HBsAg類風(fēng)濕因子嗜異性抗體自身抗體補(bǔ)體纖維蛋白溶血或黃疸交叉反應(yīng)性物質(zhì)外源性物質(zhì)(污染、抗生素和生物制劑等）第二十二張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022236、操作不當(dāng)或人為等外在因素(一)、HBsAg標(biāo)

10、本編號(hào)、加樣或加試劑差錯(cuò)孵育洗板結(jié)果判讀和報(bào)告失誤等第二十三張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202224ELISA檢測(cè)模式：一步法。原材料：McAb；檢測(cè)結(jié)果：定性。缺點(diǎn)：鉤狀效應(yīng)，靈敏度較差，HAMA干擾、RF干擾，不能定量?；瘜W(xué)發(fā)光（某些公司）檢測(cè)模式：一步法。原材料：McAb；檢測(cè)結(jié)果：定量。靈敏度好于ELISA，無(wú)RF干擾。缺點(diǎn)：鉤狀效應(yīng)， HAMA干擾，定量結(jié)果不能溯源到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。(一)、HBsAg常見(jiàn)HBsAg檢測(cè)情況：第二十四張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202225Abbott公司檢測(cè)模式：兩步法。原材料：McAb(固相），PcAb

11、（ Fab，標(biāo)記抗體） ；檢測(cè)結(jié)果：定量。優(yōu)點(diǎn)：1）無(wú)鉤狀效應(yīng)；2）無(wú)HAMA、無(wú)RF干擾；3）靈敏度高；4）加用了針對(duì)不同突變株病毒抗原的檢測(cè)抗體，可以進(jìn)行HBsAg突變株的檢測(cè)；5）定量結(jié)果可溯源到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。(一)、HBsAg第二十五張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202226時(shí)間分辨熒光檢測(cè)模式：兩步法。原材料：McAb(固相），PcAb（ 標(biāo)記抗體） ；檢測(cè)結(jié)果：定量。特點(diǎn)：無(wú)鉤狀效應(yīng)；靈敏度高；無(wú)HAMA干擾。不能進(jìn)行HBsAg突變株的檢測(cè), 可能有RF干擾，定量結(jié)果不能溯源到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。(一)、HBsAg第二十六張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.0

12、8.202227目前國(guó)際上常用的HBsAg標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：德國(guó)蘭根埃爾利希研究所（Paul Ehrlich Institute） 參考物: PEI/ml;法國(guó)參考物： ng/ml;雅培參考物： ng/ml（Axsym), IU/ml (i2000)；NIBSC參考物（WHO)：IU/ml.（英國(guó)國(guó)家生物標(biāo)準(zhǔn)與檢定所，National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC) 1 IU/ml=0.58 PEI/ml=1.93 “法國(guó)”ng/ml=5.59 雅培ng/ml(一)、HBsAg第二十七張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6

13、月25.08.202228原材料：HBsAg1、天然HBsAg ：血源的純HBsAg，即S蛋白（小球形顆粒）；HBsAg小球型顆粒（2022nm）Dane顆粒（40 42nm)管型顆粒(二)、HBsAb第二十八張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202229rHBsAg球型顆粒2830 nm2、基因工程重組抗原（rHBsAg)(二)、HBsAb第二十九張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202230 HBsAb為分別針對(duì)HBsAg五種表位（a、 d/y 、w/r）的不同抗體，其中90%的HBsAb為針對(duì)“a”的抗體，為最重要的保護(hù)性體，對(duì)不同亞型感染均有保護(hù)

14、作用（但交叉免疫不完全），也是HBsAb各種抗體中最重要的血清標(biāo)志物。 用于檢測(cè)HBsAb的抗原，無(wú)論天然抗原或重組抗原，必須具有“a”表位，一般為ad、ay亞性聯(lián)合應(yīng)用。 目前HBsAb試劑原材料質(zhì)量?jī)?yōu)良，檢測(cè)方法為雙抗原夾心法，定量定性檢測(cè)的結(jié)果較準(zhǔn)確可靠。(二)、HBsAb第三十張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202231HBsAg陽(yáng)性+HBsAb陽(yáng)性模式討論在HBV感染及機(jī)體免疫過(guò)程中，可能有HBsAg和HBsAb同時(shí)存在的短暫過(guò)程，但很難出現(xiàn)在檢測(cè)過(guò)程中：HBsAg過(guò)剩時(shí)，HBsAb與其結(jié)合，以抗原抗體復(fù)合物形勢(shì)存在，血中測(cè)不到游離抗體。HBsAb過(guò)剩時(shí)，HBs

15、Ag以抗原抗體復(fù)合物形勢(shì)存在，血中測(cè)不到游離抗原。由于抗原抗體反應(yīng)是可逆的，在檢測(cè)靈敏度大幅提高的情況下，上述情況不能絕對(duì)化。(二)、HBsAb第三十一張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202232HBsAg陽(yáng)性+HBsAb陽(yáng)性模式討論部分HBV的S基因突變引起“a”決定簇氨基酸組成發(fā)生改變，導(dǎo)致其抗原性產(chǎn)生變化，野生株抗HBs不能將其清除。不同亞型HBV感染 。兩株不同亞型HBV感染及機(jī)體免疫過(guò)程：1、兩株不同亞型HBV同時(shí)或先后感染同一個(gè)體，合成兩種不同亞型的HBsAg1和HBsAg2；2、前者刺激機(jī)體產(chǎn)生HBsAb1，后者未刺激機(jī)體產(chǎn)生HBsAb2；3、HBsAb1中

16、和了相應(yīng)的HBsAg1而不能中和HBsAg2, HBsAg2與HBsAb1同時(shí)存在。(二)、HBsAb第三十二張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202233常見(jiàn)HBsAb檢測(cè)情況：ELISA原材料：天然抗原。檢測(cè)模式：一步法。檢測(cè)結(jié)果：定性，半定量。缺點(diǎn)：可能出現(xiàn)假陽(yáng)性，定量結(jié)果干擾因素較多。化學(xué)發(fā)光原材料：天然抗原。檢測(cè)結(jié)果：定量。檢測(cè)模式：一步法。(二)、HBsAb第三十三張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202234Abbott原材料：重組抗原。檢測(cè)模式：兩步法。檢測(cè)結(jié)果：定量。時(shí)間分辨熒光原材料：天然抗原。檢測(cè)模式：兩步法。檢測(cè)結(jié)果：定量。(二)

17、、HBsAb第三十四張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202235檢測(cè)方法和影響因素類似于HBsAg(三)、HBeAg第三十五張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202236方法：競(jìng)爭(zhēng)法。原材料：1 ）McAb HBeAb; 2 ） rHBeAg。 存在問(wèn)題： 原材料：大腸桿菌表達(dá)的基因工程抗原 (rHBeAg/E.coli)： 優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性好，使用安全，價(jià)格低廉 。 缺點(diǎn)：特異性差。 1、HBeAg和HBcAg是基因同源性很高的兩種抗原，但具有完全不同的抗體結(jié)合表位，與HBcAg間存在明顯的交叉抗原性 ； 2、菌體雜質(zhì)干擾檢測(cè)。很多人感染過(guò)大腸桿菌，血清

18、中的抗大腸桿菌抗體能與重組抗原中的成分結(jié)合。(四)、HBeAb第三十六張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202237 由于檢測(cè)抗原特異性差，不能采用雙抗原夾心法、間接法、捕獲法等反應(yīng)模式。固相載體HBeAg/E.coliHBcAb標(biāo)記HBeAg/E.coliAg/E.coli抗E.coli抗體標(biāo)記Ag/E.coli夾心法時(shí)的假陽(yáng)性結(jié)果固相載體HBeAg/E.coliHBcAb 標(biāo)記抗人IgGAg/E.coli抗E.coli抗體 標(biāo)記抗人IgG間接法時(shí)的假陽(yáng)性結(jié)果(四)、HBeAb第三十七張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202238解決辦法：采用HBeA

19、b McAb，用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)HBeAb，避免樣本中HBcAb及抗大腸桿菌抗體的干擾：固相載體rHBeAgHBcAb標(biāo)記HBeAb抗E.coliAg/E.coli陰性結(jié)果第三十八張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202239固相載體rHBeAgHBeAb（標(biāo)本）標(biāo)記HBeAb陽(yáng)性結(jié)果(四)、HBeAb-檢測(cè)模式 11）液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法（一步法）檢測(cè)HBeAb第三十九張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202240固相載體rHBeAg酶標(biāo)HBeAb陰性結(jié)果1）液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法（一步法）檢測(cè)HBeAb(四)、HBeAb-檢測(cè)模式 1第四十張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作

20、于2022年6月25.08.202241液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)HBeAb時(shí)，標(biāo)本中的HBeAg對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾固相載體HBeAg(標(biāo)本）rHBeAg標(biāo)記HBeAb第四十一張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202242固相載體HBeAg(標(biāo)本）rHBeAg標(biāo)記抗體假陽(yáng)性結(jié)果液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)HBeAb時(shí)，標(biāo)本中的HBeAg對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾第四十二張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202243固相載體HBeAbHBeAb（標(biāo)本）標(biāo)記HBeAbrHBeAg中和試劑陽(yáng)性結(jié)果2）固相-液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法 (四)、HBeAb-檢測(cè)模式 2第四十三張，PPT共九十七頁(yè)，

21、創(chuàng)作于2022年6月25.08.202244固相載體HBeAb標(biāo)記HBeAbrHBeAg中和試劑陰性結(jié)果2）固相-液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法 (四)、HBeAb-檢測(cè)模式 2第四十四張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202245固相-液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)HBeAb時(shí)，標(biāo)本中的HBeAg及中和試劑rHBeAg對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾固相載體HBeAb（包被）HBeAg(標(biāo)本）rHBeAg中和試劑標(biāo)記抗體第四十五張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202246固相-液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)HBeAb時(shí)，標(biāo)本中的HBeAg及中和試劑rHBeAg對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾固相載體HBeAb（包被

22、）HBeAg(標(biāo)本） rHBeAg中和試劑標(biāo)記抗體假陽(yáng)性結(jié)果第四十六張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202247固相-液相競(jìng)爭(zhēng)法（兩步法）檢測(cè)HBeAb時(shí)，避免了標(biāo)本中的HBeAg及檢測(cè)抗原對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾固相載體HBeAb（包被）HBeAg(標(biāo)本）rHBeAg中和試劑標(biāo)記抗體陰性結(jié)果第四十七張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202248高濃度HBeAg可能導(dǎo)致（+-+-+） （+-+）高濃度HBeAg在一步法檢測(cè)中會(huì)出現(xiàn)假陰性，也會(huì)導(dǎo)致液相液相競(jìng)爭(zhēng)法及固相液相液相競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)HBeAb時(shí)的假陽(yáng)性，二者是有因果關(guān)系的兩項(xiàng)誤差。由于HBsAg/HBeAg陽(yáng)

23、性與HBsAg/HBeAb陽(yáng)性兩者均是常見(jiàn)的血清學(xué)檢測(cè)模式，上述誤差不易引起重視。兩種模式所提示的臨床意義完全不同。一步法試劑在檢測(cè)高濃度HBeAg標(biāo)本時(shí)，可能提供了虛假的HBeAg血清轉(zhuǎn)換的病情信息，對(duì)臨床醫(yī)生產(chǎn)生了誤導(dǎo)。(四)、HBeAb第四十八張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202249常見(jiàn)HBeAb檢測(cè)情況：ELISA檢測(cè)模式：一步法：1、液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法； 2、固相-液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法。如標(biāo)本中含HBeAg時(shí)，明顯干擾檢測(cè)結(jié)果，濃度高時(shí)易出現(xiàn)假陽(yáng)性。Abbott化學(xué)發(fā)光檢測(cè)模式：固相-液相競(jìng)爭(zhēng)法(兩步法)。避免中和試劑rHBeAg和標(biāo)本中HBeAg對(duì)標(biāo)記抗體HBe

24、Ab的中和作用，也避免了由此引起的假陽(yáng)性結(jié)果。(四)、HBeAb第四十九張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202250方法：競(jìng)爭(zhēng)法(液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法、固相-液相競(jìng)爭(zhēng)法)。由于血清中不存在HBcAg，反應(yīng)模式的選擇對(duì)結(jié)果影響不大；陽(yáng)性檢出率與標(biāo)本的稀釋倍數(shù)關(guān)系密切；HBcAg免疫原性強(qiáng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生HBcAb的時(shí)間早，滴度高，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。有文獻(xiàn)報(bào)到HBV感染者可表現(xiàn)為HBcAb單項(xiàng)陽(yáng)性。但一般認(rèn)為其臨床診斷價(jià)值不如HBsAg 、HBeAg及HBV DNA。(五)、HBcAb第五十張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202251固相載體HBcAgHBcAb（標(biāo)

25、本）標(biāo)記HBcAb陽(yáng)性結(jié)果液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法（一步法）檢測(cè)HBcAb(五)、HBcAb第五十一張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202252固相載體HBcAg酶標(biāo)HBcAb陰性結(jié)果液相-液相競(jìng)爭(zhēng)法（一步法）檢測(cè)HBcAb(五)、HBcAb第五十二張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202253固相載體HBcAgHBcAb（標(biāo)本）陽(yáng)性結(jié)果(五)、HBcAb-不公平競(jìng)爭(zhēng) 標(biāo)本和酶標(biāo)抗體加入時(shí)間的不同步性，導(dǎo)致的不公平競(jìng)爭(zhēng)，能引起檢測(cè)結(jié)果的陽(yáng)性率增加。一定時(shí)間后加入酶標(biāo)HBcAb第五十三張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202254常見(jiàn)模式少見(jiàn)

26、模式罕見(jiàn)模式 對(duì)于少見(jiàn)和罕見(jiàn)模式應(yīng)仔細(xì)復(fù)查后，慎重報(bào)告兩對(duì)半結(jié)果模式第五十四張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202255兩類方法(1) 非特異性梅毒抗體試驗(yàn)(2) 特異性梅毒抗體問(wèn)題： 為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學(xué)檢測(cè)方法？二、梅毒血清學(xué)檢測(cè)第五十五張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202256梅毒螺旋體一旦感染人體，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體-反應(yīng)素）。（抗原可能為TP損害患者組織釋放出的物質(zhì)或TP本身的脂質(zhì)成分）未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長(zhǎng)期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉(zhuǎn)為陰性。問(wèn)題： 臨床

27、上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)為什么需要做定性和定量?jī)煞N檢測(cè)方法？非特異性梅毒抗體試驗(yàn)第五十六張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202257方法包括： （1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn) (RPR) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST） （3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn) (VDRL)等。基本成分是心磷脂 卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見(jiàn)上述方法的敏感性和特異性都基本相似非特異性梅毒抗體試驗(yàn)第五十七張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022581、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速、轉(zhuǎn)幅 2、定性試驗(yàn)加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片

28、圈中， 并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23 -29 ） ，亮光下觀察結(jié)果100r/min約18mm非特異性梅毒抗體試驗(yàn)操作要點(diǎn)第五十八張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022593、定量試驗(yàn)稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。 下同定性試驗(yàn)。1:11:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512定量試驗(yàn)結(jié)果判斷血清稀釋度結(jié)果1:11:21:41:81:16+-1:1+-1:2

29、+-1:8非特異性梅毒抗體試驗(yàn)操作要點(diǎn)第五十九張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202260早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽(yáng)性。因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。非特異性梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)臨床意義第六十張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202261假陽(yáng)性反應(yīng)技術(shù)性假陽(yáng)性反應(yīng)一般是由于操作錯(cuò)誤引起的假陽(yáng)性反應(yīng)，經(jīng)過(guò)重復(fù)試驗(yàn)即可排除。生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)(一般滴度小于1:8），應(yīng)采用梅毒螺旋體抗

30、原血清學(xué)試驗(yàn)如TPPA等進(jìn)行排除。非特異性梅毒螺旋體抗體血清學(xué)假陽(yáng)性第六十一張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202262抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測(cè)梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)呈陽(yáng)性，則患者終身陽(yáng)性。問(wèn)題：梅毒螺旋體特異性抗體定量試驗(yàn)在梅毒診療中有意義嗎？梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗(yàn)第六十二張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202263梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn) (TPPA)梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn) (TPHA)梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

31、梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(cè) (RT)熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗(yàn)第六十三張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202264TPPATPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體抗原致敏明膠顆粒人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗(yàn)第六十四張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202265ELISA/ CLIAELISA試驗(yàn)是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板

32、條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測(cè)儀判定試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)。本法可用于大樣本血清檢測(cè)。化學(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用意義基本同ELISA化學(xué)發(fā)光法的敏感性？梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗(yàn)第六十五張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202266梅毒免疫層析快速檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)試驗(yàn)第六十六張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202267作為非梅毒螺旋體特異性抗體試驗(yàn)(如RPR等)初篩陽(yáng)性標(biāo)本的確證試驗(yàn)，排除RPR 假陽(yáng)性。不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。TPPA等梅毒螺旋體抗原

33、血清試驗(yàn)不能作為療效觀察的指標(biāo)。梅毒螺旋體特異性抗體試驗(yàn)臨床意義第六十七張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20226868非梅毒螺旋體特異性抗體試驗(yàn)梅毒螺旋體特異性抗體試驗(yàn)排除試驗(yàn)假陽(yáng)性確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染排除治愈的既往感染者確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染RPR：初篩試驗(yàn) TPPA：確證試驗(yàn)梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略思考第六十八張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202269規(guī)范化梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)要求根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略?？刹捎萌魏我活惷范狙鍖W(xué)檢測(cè)方法作為篩查試驗(yàn)。第六十九張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202270非梅毒螺旋體特異性抗體

34、試驗(yàn)梅毒螺旋體特異性抗體試驗(yàn)第七十張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.20227171陽(yáng)性 梅毒螺旋體血清試驗(yàn) （ELISA） 陰性 報(bào)告： ELISA陰性 陽(yáng)性 RPR定性/定量試驗(yàn) 陰性 推薦TPPA復(fù)檢 陽(yáng)性 報(bào)告： ELISA陽(yáng)性 RPR陽(yáng)性及滴度 陰性 報(bào)告： ELISA 陽(yáng)性 TPPA陽(yáng)性 RPR陰性 報(bào)告： ELISA 陽(yáng)性 TPPA陰性 RPR陰性 報(bào)告： ELISA陽(yáng)性 RPR陰性 梅毒螺旋體特異性抗體試驗(yàn)第七十一張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202272三、HCV感染的血清學(xué)檢測(cè)二一年五月二十日 第七十二張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于

35、2022年6月25.08.202273HCV的血清學(xué)檢測(cè)第七十三張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202274HCV抗體假陰性問(wèn)題HCV-RNA檢測(cè)更敏感，12周間接法檢測(cè)抗-HCV抗體第七十四張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202275HCV血液篩查檢測(cè)流程第七十五張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202276HCV臨床診斷篩查的檢測(cè)流程做補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)或建議進(jìn)一步做補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)第七十六張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202277HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)流程（1）第七十七張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25

36、.08.202278HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)流程（2）第七十八張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202279HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)流程（3）第七十九張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202280HCV檢測(cè)結(jié)果解釋第八十張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202281酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）： 第三代試劑：雙抗原夾心法檢測(cè)抗體(目前普遍采用） 第四代試劑：檢測(cè)抗體和HIV-1 p24抗原快速方法：金標(biāo)法化學(xué)發(fā)光法蛋白免疫印跡試驗(yàn)（WB）篩查試驗(yàn)確證試驗(yàn)四、HIV抗體檢測(cè)第八十一張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08

37、.202282什么是艾滋病窗口期？艾滋病 病毒進(jìn)入人體后，需要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間人體才會(huì)產(chǎn)生艾滋病毒抗體，或 人體已產(chǎn)生艾滋病毒抗體，但血液中抗體量少尚無(wú)法測(cè)出。在此期間抗體檢測(cè)呈陰性，這段時(shí)間即為“窗口期”。如何計(jì)算窗口期？應(yīng)從高危行為之時(shí)或是接受輸血之時(shí)起，至最初HIV抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的時(shí)間第八十二張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202283“窗口期”帶來(lái)的我到底有沒(méi)有得艾滋病？困惑？第八十三張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202284哪些因素影響HIV“窗口期”時(shí)間？人體對(duì)艾滋病毒的免疫應(yīng)答：一般5天至9天，或1周至2周機(jī)體可產(chǎn)生抗體。檢測(cè)方法和試劑：

38、靈敏度越高，窗口期越短第八十四張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.2022854th 代3rd 代= =1st-2nd 代HIV 抗原IgM 抗體IgG 抗體檢測(cè)線= 窗口期ELISA試劑與HIV“窗口期”2周3周12周目前普遍采用的第三代酶免試劑HIV窗口期一般不超過(guò)6周第八十五張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202286縮短1周檢測(cè)方法和試劑比較化學(xué)發(fā)光法核酸檢測(cè)延長(zhǎng)1周ELISA縮短數(shù)天第八十六張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202287HIV抗體檢測(cè)程序 樣品初篩試驗(yàn)篩查試劑陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)復(fù)檢試驗(yàn)均陽(yáng)性反應(yīng)一陰一陽(yáng)均陰性反應(yīng)確證試驗(yàn)報(bào)告陰性原有試劑+另一不同原理或廠家初篩試劑HIV抗體陰 性HIV抗體陽(yáng) 性HIV抗體不確定篩查實(shí)驗(yàn)室確證實(shí)驗(yàn)室第八十七張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202288篩查試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)，可直接出具HIV抗體陰性報(bào)告HIV初篩檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告和處理 篩查試驗(yàn)陰性（）第八十八張，PPT共九十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月25.08.202289篩查試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告，不能出陽(yáng)性報(bào)告。并進(jìn)行以下處理篩查試驗(yàn)陽(yáng)性（+）（