中國(guó)胃癌HER2檢測(cè)-指南解讀-鄭杰

1、中國(guó)胃癌HER2檢測(cè)指南解讀（2011版）概述本指南推薦IHC與FISH和（或）DSISH相結(jié)合的檢測(cè)策略胃癌有必要進(jìn)行準(zhǔn)確的HER2檢測(cè)HER2狀態(tài)檢測(cè)首先選用免疫組織化學(xué)法（IHC）IHC 3+的病例視為HER2陽性IHC 2+的病例建議進(jìn)一步行原位雜交（ISH：FISH和或DSISH）檢測(cè)，IHC 2+/ISH+的病例視為HER2陽性IHC 1+和IHC 0 病例，IHC 2+/ISH - 病例視為HER2陰性胃癌HER2檢測(cè)應(yīng)在有能力的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)質(zhì)量取決于標(biāo)本的采集、處理過程、IHC/ISH 檢測(cè)方法和評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行問題一1. 請(qǐng)問您所在的醫(yī)院胃癌HER2檢測(cè)是否屬于常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目？

2、是否不清楚問題二請(qǐng)問您所在的醫(yī)院，由誰決定是否做胃癌HER2免疫組化檢測(cè)？病理科外科腫瘤內(nèi)科消化內(nèi)鏡室問題三請(qǐng)您對(duì)多學(xué)科合作對(duì)胃癌HER2檢測(cè)的重要性打分（0-5重要性逐漸遞增），請(qǐng)按投票器選擇0 12345胃癌HER2檢測(cè)切片脫水包埋固定 HER2檢測(cè)的相關(guān)流程切片檢測(cè)判讀標(biāo)本收取問題四貴單位胃癌手術(shù)標(biāo)本送到病理科處理的時(shí)間？A 30分鐘內(nèi)B 1小時(shí)內(nèi)C 2小時(shí)內(nèi)D 2小時(shí)E 不清楚 問題五貴單位手術(shù)標(biāo)本固定時(shí)間？不固定直接取材固定時(shí)間在8小時(shí)內(nèi)固定時(shí)間在12小時(shí)左右（過夜）固定時(shí)間12-24小時(shí)不清楚標(biāo)本類型原發(fā)病灶的手術(shù)切除標(biāo)本原發(fā)病灶的胃鏡活檢標(biāo)本建議取6-8塊，以獲得足夠的樣本組織，

3、多點(diǎn)活檢對(duì)準(zhǔn)確的檢測(cè)有必要切除標(biāo)本離體后2030分鐘內(nèi)進(jìn)行標(biāo)記、切開、固定等初步處理后，及時(shí)送病理科活檢標(biāo)本的大小2x2x2mm3原發(fā)灶活檢組織、手術(shù)切除組織皆有的病例，建議使用手術(shù)切除組織進(jìn)行檢測(cè)標(biāo)本采集問題六貴單位送檢標(biāo)本采用何種固定液？不用固定液，直接送病理科10%福爾馬林固定液（蒸餾水配）10%福爾馬林固定液（中性緩沖液配）10%甲醛固定液不清楚標(biāo)本固定采用新鮮配制10%中性緩沖福爾馬林作為固定液固定液的量應(yīng)為組織的10倍手術(shù)切除標(biāo)本的固定時(shí)間為848h (至少1h/mm組織)活檢標(biāo)本的固定時(shí)間不超過24h (至少1h/mm組織)不宜使用其它固定液，非10%中性緩沖福爾馬林制劑可能會(huì)妨

4、礙IHC和ISH檢測(cè)的可靠性不宜用微波快速固定組織規(guī)范的標(biāo)本固定是HER2檢測(cè)質(zhì)量的保障；保存良好的組織形態(tài)，防止細(xì)胞內(nèi)蛋白和核酸的丟失標(biāo)本準(zhǔn)備固定1小時(shí)固定52小時(shí)固定4小時(shí)固定2周固定時(shí)間影響HER2染色結(jié)果固定22小時(shí)圖片由 of A Morey, St Vincents Hospital, NSW, Australia提供固定較差示例：乳腺癌HER2 IHC檢測(cè)固定較差會(huì)導(dǎo)致染色結(jié)果的異質(zhì)性胞質(zhì)染色可能是由固定較差導(dǎo)致圖片由 W Hanna提供固定較差示例：胃癌HER2 IHC檢測(cè)固定不完全會(huì)導(dǎo)致假陽性檢查結(jié)果胞質(zhì)染色可能由于使用了不恰當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞綀D片由Targos Molecular

5、 Pathology.提供固定較差示例：HER2 ISH檢測(cè)圖片由 Abbott/Vysis.提供固定不完全 - SISH，“空核”固定不完全導(dǎo)致探針信號(hào)較弱或缺失過度染色會(huì)導(dǎo)致持續(xù)性自發(fā)熒光 探針信號(hào)可能較弱或缺失HER2檢測(cè)HER2過表達(dá)的檢測(cè)HER2擴(kuò)增的檢測(cè) 免疫組織化學(xué)染色方法（IHC） 自動(dòng)化 原位雜交方法 （ISH） FISH Dual SISH實(shí)驗(yàn)室總體要求應(yīng)當(dāng)在有條件的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，擁有試驗(yàn)所需的儀器和設(shè)備及空間條件實(shí)驗(yàn)室掌握包括標(biāo)本的制備、抗體的選擇、抗原修復(fù)方法及其它相關(guān)技術(shù)；探針的選擇、檢測(cè)預(yù)處理方法及其它相關(guān)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì)量控制程序驗(yàn)證，建立完善的實(shí)驗(yàn)

6、室標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP） 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)員具備相關(guān)資質(zhì)及經(jīng)過合格培訓(xùn)HER2檢測(cè)-IHC IHC方法 試驗(yàn)方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件可以選擇手工染 色、半自動(dòng)染色和全自動(dòng)免疫組化染色 建議使用全自動(dòng)染色方法 建議使用我國(guó)相關(guān)部門（SFDA）批準(zhǔn)的試劑盒 自行組配和分裝的抗體必須經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì) 量控制程序驗(yàn)證，并與權(quán)威機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的檢測(cè)試劑盒進(jìn) 行比對(duì)，以保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性IHC抗體結(jié)果判讀和分析普通光學(xué)顯微鏡熒光顯微鏡 病理醫(yī)生需要經(jīng)過培訓(xùn) IHC評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)和乳腺癌有所不同 樣本：活檢組織和切除組織有所不同 觀察：高異質(zhì)性需要全面觀察所有腫瘤組織 溝通：結(jié)果不確定時(shí)需要與腫瘤科醫(yī)生溝通IHC判讀標(biāo)準(zhǔn)（

7、參照ToGA經(jīng)驗(yàn)，所有圖片來自SCC）0 無反應(yīng)或腫瘤細(xì)胞膜染色10% 1+ 10%腫瘤細(xì)胞微弱或隱約膜染色，細(xì)胞膜僅部分區(qū)域著色2+ 10%腫瘤細(xì)胞弱到中度的完全或細(xì)胞基底部和兩側(cè)邊膜染色3+ 10%腫瘤細(xì)胞完全性或基底部和兩側(cè)邊膜強(qiáng)染色（對(duì)3+的病例同時(shí)表明百分率，注明是否有異質(zhì)性）IHC結(jié)果判讀時(shí)應(yīng)注意：細(xì)胞質(zhì)著色應(yīng)忽略不計(jì)，正常胃黏膜上皮細(xì)胞不應(yīng)著色 HER2檢測(cè)-IHC原位雜交檢測(cè)方法（ISH） 熒光原位雜交（FISH ） 雙色銀染原位雜交（Dual SISH， DSISH）探針建議使用我國(guó)相關(guān)部門（SFDA）批準(zhǔn)的試劑盒FISH，HER2紅色信號(hào)增多，局部呈簇狀，CEP17信號(hào)1-

8、2個(gè)，比值7.2，有擴(kuò)增（100） FISH，HER2和CEP17信號(hào)各1-2個(gè)，比值1.65，無擴(kuò)增（100） FISH：嚴(yán)格按照試劑盒標(biāo)準(zhǔn)程序執(zhí)行HER2檢測(cè)-FISH圖片來自SCCDSISH HER2黑色信號(hào)擴(kuò)增，呈簇狀；CEP17紅色信號(hào)1-2個(gè)；比值15，有擴(kuò)增(100) DSISH HER2和CEP17信號(hào)各1-2個(gè)，比值0.8，無擴(kuò)增(100) DSISH：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先進(jìn)行嚴(yán)格的對(duì)比試驗(yàn)和程序優(yōu)化 嚴(yán)格按照所用全自動(dòng)染色儀器的優(yōu)化程序和SOP執(zhí)行HER2檢測(cè)-DSISH圖片來自SCC請(qǐng)問貴院是否有統(tǒng)一的HER2檢測(cè)病理報(bào)告格式？是否問題七檢測(cè)報(bào)告內(nèi)容胃癌HER2 IHC/ISH檢測(cè)

9、報(bào)告臨床信息： 姓名 性別 年齡 門診住院號(hào) 送檢醫(yī)師聯(lián)系方式 檢測(cè)日期 年 月 日標(biāo)本信息： 病理號(hào)/蠟塊號(hào) 標(biāo)本類型： 手術(shù)切除 活檢腫瘤部位： 胃食道交界處 胃底 胃體 胃竇 幽門管 轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本固定液種類（10中性緩沖福爾馬林）是否標(biāo)本離體至固定時(shí)間(如有記錄) 分鐘標(biāo)本固定的時(shí)間(如有記錄) 分鐘組織學(xué)類型/分級(jí) Laurn分型 臨床分期 T N M HER2 IHC 檢測(cè)報(bào)告檢測(cè)信息：抗體信息(克隆號(hào)生產(chǎn)商) 檢測(cè)方法 手工/半自動(dòng) 全自動(dòng) 對(duì)照設(shè)置情況 3+ 0 樣本量是否足夠用于評(píng)估是否具有膜著色的腫瘤細(xì)胞的百分比 %著色的異質(zhì)性有無腫瘤細(xì)胞膜染色模式 完整 基底和側(cè)膜（U-sh

10、aped) 兩者皆有判讀結(jié)果：0 l+ 2+ 3+ 無法判讀結(jié)論：陽性；不確定；陰性；無法判讀檢測(cè)人員：技術(shù)員 病理醫(yī)師 HER2 ISH 檢測(cè)報(bào)告 檢測(cè)信息：探針信息(生產(chǎn)商/商品號(hào)) 檢測(cè)方法 對(duì)照設(shè)置情況 陽性對(duì)照 陰性對(duì)照 樣本量是否足夠用于評(píng)估是否IHC檢測(cè)結(jié)果0 l+ 2+ 3+ 無法判讀判讀結(jié)果： 用于評(píng)估的腫瘤細(xì)胞數(shù)量 HER2信號(hào)總數(shù)CEPl7信號(hào)總數(shù) HER2信號(hào)數(shù)平均值細(xì)胞核 CEPl7信號(hào)數(shù)平均值細(xì)胞核 17號(hào)染色體是否為多體是否結(jié)論： 陽性(擴(kuò)增) 陰性(無擴(kuò)增) 無法判讀 檢測(cè)人員：技術(shù)員 病理醫(yī)生 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 （1）HER2蛋白和基因擴(kuò)增的檢測(cè)均應(yīng)在內(nèi)、外部質(zhì)

11、量控制良好的病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)必須嚴(yán)格按照指南要求執(zhí)行，以保證結(jié)果可靠不具備HER2檢測(cè)條件的單位應(yīng)按照指南要求，妥善處理和準(zhǔn)備好標(biāo)本，提供給有質(zhì)量保證的病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 （2）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、外部質(zhì)量控制和SOP的主要要求如下準(zhǔn)備開展GC HER2檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇12家已較好開展該項(xiàng)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行25100例標(biāo)本的對(duì)比驗(yàn)證或通過參加有關(guān)外部質(zhì)量控制活動(dòng)來實(shí)現(xiàn)，外部質(zhì)控陽性和陰性結(jié)果的一致性應(yīng)達(dá)到90以上，每年應(yīng)進(jìn)行12次從事GC HER2檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員和病理醫(yī)師應(yīng)進(jìn)行必要的培訓(xùn)和資格考核實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 （3）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的SOP，并做好每次檢測(cè)情況的記錄和存檔工作任何改

12、變操作程序和試劑的行為均應(yīng)重新進(jìn)行嚴(yán)格的驗(yàn)證內(nèi)部質(zhì)控應(yīng)包括同一組織不同批次染色結(jié)果的重復(fù)性分析，每次染色陽性、陰性對(duì)照的設(shè)置，如有可能還應(yīng)沒置包括低表達(dá)低擴(kuò)增對(duì)照檢測(cè)相關(guān)的儀器和設(shè)備需定期維護(hù)、校驗(yàn)類似乳腺癌亮視野檢測(cè)方法有優(yōu)勢(shì)Her2檢測(cè)流程樣本收集鏡下觀察異質(zhì)性高需要觀察整張切片檢測(cè)所需時(shí)間胃癌進(jìn)展快，宜及時(shí)獲得結(jié)果多學(xué)科參與結(jié)果判讀與乳腺癌有所不同胃癌HER2檢測(cè)： 基本過程和特殊性數(shù)量、質(zhì)量合適的含有腫瘤組織的活檢標(biāo)本 具有代表性的手術(shù)切除標(biāo)本多學(xué)科協(xié)作共同努力 醫(yī)生和技術(shù)員知識(shí)更新和觀念改變 患者和醫(yī)生多學(xué)科協(xié)作檢測(cè)HER2：臨床醫(yī)生之角色采樣 手術(shù)和胃鏡活檢（6-8塊組織） 固定

13、10%中性緩沖福爾馬林樣本送檢（離體時(shí)間）30分鐘結(jié)果解讀 HER2 + IHC 0 1+ 2+ 3+ HER2 陽性多學(xué)科協(xié)作檢測(cè)HER2：病理醫(yī)生之角色Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118145.檢測(cè)結(jié)果分析檢查備檢標(biāo)本是否可用正確設(shè)立內(nèi)部對(duì)照組依照國(guó)際評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)分檢測(cè)結(jié)果報(bào)告使用標(biāo)準(zhǔn)化HER2檢測(cè)結(jié)果報(bào)告表報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括標(biāo)本取樣，固定，檢測(cè)方法及評(píng)分系統(tǒng)多學(xué)科檢測(cè)治療小組(MDT)會(huì)議學(xué)科協(xié)作檢測(cè)HER2：技術(shù)員之角色處理: 避免影響檢測(cè)結(jié)果之因素- 最佳固定時(shí)間及固定方法- 石蠟包埋- 組織切片的合理時(shí)間 (最好于HER2檢測(cè)前切片)- 標(biāo)本脫蠟方法: 使用標(biāo)準(zhǔn)化/經(jīng)驗(yàn)證之檢測(cè)步驟- IHC- ISHFISH Dual SISHWolff AC, et al. J Clin Oncol