IFNγ上調(diào)的單核細(xì)胞表面MHCI類鏈相關(guān)分子促進(jìn)NK細(xì)胞活化

1、IFN-上調(diào)的單核細(xì)胞外貌MHC-I類鏈相干分子促進(jìn)NK細(xì)胞活化【摘要】目的:研究ifn-誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)的單核細(xì)胞h-i類鏈相干分子(is)分子對nk細(xì)胞的活化作用。要領(lǐng):接納密度梯離離心法分散人外周血單個核細(xì)胞pb,以免疫磁珠法從pb中特異性分選單核細(xì)胞及nk細(xì)胞,以細(xì)胞因子ifn-、tnf-刺激單核細(xì)胞后,再將單核細(xì)胞與nk細(xì)胞共造就,以流式細(xì)胞術(shù)f檢測nk細(xì)胞外貌d69分子及胞內(nèi)ifn-表達(dá),以51r開釋試驗(yàn)檢測nk細(xì)胞對k562細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。效果:ifn-上調(diào)人單核細(xì)胞外貌is表達(dá);ifn-刺激的單核細(xì)胞能促進(jìn)異體nk細(xì)胞d69及胞內(nèi)ifn-表達(dá),能加強(qiáng)nk細(xì)胞對k562細(xì)胞的殺傷效應(yīng)

2、;單核細(xì)胞的這種效應(yīng)至少部門依靠于ifn-上調(diào)的is分子,由于用抗i抗體關(guān)閉或用細(xì)胞小室阻斷細(xì)胞打仗,可以顯著地按捺nk細(xì)胞的活化。結(jié)論:ifn-上調(diào)人單核細(xì)胞外貌is分子介導(dǎo)了nk細(xì)胞的活化。【關(guān)鍵詞】單核細(xì)胞ifn-h-i類相干分子nk細(xì)胞活化的淋巴細(xì)胞含nk、t、nkt細(xì)胞排泄的細(xì)胞因子滋擾素ifn-不但具有直接的抗病毒作用,更具有強(qiáng)盛的免疫調(diào)治和修飾成效。如今以為,ifn-能普及地作用于體內(nèi)包羅淋巴細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞。對付單核細(xì)胞,ifn-一方面可以影響其向d或巨噬細(xì)胞分化;另一方面,ifn-還能誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生系列細(xì)胞因子1,2。機(jī)體單核細(xì)胞正常環(huán)境下處于免疫靜息狀態(tài),但在相宜的條件

3、下,它可以通過轉(zhuǎn)化為d大概排泄大量細(xì)胞因子來到場或調(diào)治免疫應(yīng)答。比來研究創(chuàng)造,單核細(xì)胞與nk細(xì)胞或t細(xì)胞之間存在著對話機(jī)制,而且ifn-及細(xì)胞間的直接打仗是介導(dǎo)單核細(xì)胞與淋巴細(xì)胞彼此作用的關(guān)鍵因素3。nkg2d是同時表達(dá)于人類nk細(xì)胞及d8+t細(xì)胞外貌的活化受體。對付nk細(xì)胞,它直接啟動活化信號;對付d8+t細(xì)胞,它提供緊張的共刺激信號4。h-i類鏈相干分子(i)是最早創(chuàng)造而且研究最多的nkg2d受體的配體。i是一種應(yīng)激誘導(dǎo)表達(dá)的分子,當(dāng)細(xì)胞處于熱休克、氧化、熏染等狀態(tài)時,i分子即被誘導(dǎo)表達(dá)于細(xì)胞外貌。細(xì)胞外貌的is作為一種應(yīng)激“標(biāo)識表記標(biāo)幟分子,可以或許被nk細(xì)胞或d8+t細(xì)胞外貌的nkg2

4、d受體識別,并刺激或共刺激nk細(xì)胞或d8+t細(xì)胞活化,終極掃除非常細(xì)胞。研究創(chuàng)造,is分子低程度的表達(dá)于某些正常構(gòu)造細(xì)胞如腸上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞外貌,單核細(xì)胞外貌未見is表達(dá)5。nkg2d還在nk細(xì)胞、t細(xì)胞、d及其他構(gòu)造細(xì)胞中起著緊張的“橋梁作用6。但nkg2d是否也在單核細(xì)胞與nk細(xì)胞對話中發(fā)揮作用？ifn-作用的單核細(xì)胞是否通過i-nkg2d促進(jìn)nk細(xì)胞活化？我們對此舉行了探究。1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料fit標(biāo)識表記標(biāo)幟抗人d3kt3、d1461d3、d69fn50、ifn-4s.b3單克隆抗體ab、純化及生物素化抗人nkg2d(1d11)ab、pe標(biāo)識表記標(biāo)幟抗人d56ab(n

5、a)、抗體的各同型比較抗體均購于ebisiene公司;小鼠抗人isab(lne159207)購于rd公司;fit標(biāo)識表記標(biāo)幟的山羊抗小鼠igg及山羊抗兔igg二抗購自北京中山生物技能。小鼠抗人d14免疫磁珠d14agnetipartiles,lnep9、磁性細(xì)胞分散架購于bdbisienepharingen公司;人重組滋擾素-ifn-、重組滋擾素-ifn-購自peprteh公司;人淋巴細(xì)胞分散液fill-hypaque購自天津tdb生物技能生長中央;胎牛血清購自hylne公司;fasalibur流式細(xì)胞儀購于bd公司。1.2要領(lǐng)2效果2.1細(xì)胞因子ifn-對人單核細(xì)胞is表達(dá)的上調(diào)作用活化淋巴

6、細(xì)胞排泄的細(xì)胞因子tnf-與ifn-一樣也到場了淋巴細(xì)胞與其他細(xì)胞如d的彼此作用7。tnf-與ifn-對單核細(xì)胞is表達(dá)的影響尚不明晰。在此一并研究了tnf-及ifn-對純化的人單核細(xì)胞外貌is表達(dá)的作用。奇怪分散的人單核細(xì)胞外貌低程度或陰性表達(dá)is分子,經(jīng)ifn-刺激24h后,單核細(xì)胞外貌is分子顯著上調(diào)。細(xì)胞因子tnf-不克不及略微上調(diào)單核細(xì)胞外貌is表達(dá)圖1。2.2ifn-刺激的單核細(xì)胞對nk細(xì)胞的活化作用進(jìn)一步研究ifn-及tnf-刺激后的單核細(xì)胞活化nk細(xì)胞的本領(lǐng)。效果表現(xiàn),無論是奇怪分散照舊在體外造就24h后的單核細(xì)胞,都不克不及促進(jìn)nk細(xì)胞外貌d69及胞內(nèi)ifn-表達(dá),也不克不及

7、促進(jìn)nk細(xì)胞殺傷nk敏感的k562細(xì)胞;tnf-作用后的單核細(xì)胞能薄弱的促進(jìn)nk細(xì)胞d69及胞內(nèi)ifn-表達(dá),對nk細(xì)胞的細(xì)胞毒作用亦有必然加強(qiáng)作用;當(dāng)單核細(xì)胞與ifn-共造就24h后,單核細(xì)胞對nk細(xì)胞有很強(qiáng)的活化作用,表示為nk細(xì)胞外貌d69及胞內(nèi)ifn-表達(dá)、nk細(xì)胞對k562的殺傷活性均顯著加強(qiáng)圖2。圖1細(xì)胞因子tnf-與ifn-對人單核細(xì)胞is分子表達(dá)的影響略圖2ifn-刺激后的單核細(xì)胞促進(jìn)nk細(xì)胞活化略a:ifn-刺激后的單核細(xì)胞與異體nk細(xì)胞共造就后,nk細(xì)胞d69及胞內(nèi)ifn-表達(dá)顯著加強(qiáng),而tnf-刺激后的單核細(xì)胞無此效應(yīng);b:ifn-而非tnf-刺激后的單核細(xì)胞與nk細(xì)胞共

8、造就后,nk細(xì)胞對k562的殺傷活性顯著加強(qiáng).2.3is及細(xì)胞直接打仗在單核細(xì)胞活化nk細(xì)胞中的作用ifn-能誘導(dǎo)單核細(xì)胞i上調(diào)表達(dá),ifn-作用后的單核細(xì)胞能活化nk細(xì)胞,單核細(xì)胞外貌i分子在nk細(xì)胞活化中的作用怎樣？對此舉行了研究。起首舉行i抗體阻斷試驗(yàn):1000g/lifn-刺激單核細(xì)胞24h后,在nk細(xì)胞/單核細(xì)胞共造就體系內(nèi)參加飽和劑量(5g/l)的抗isab159207,大概參加相稱劑量的的同型抗體,效果表現(xiàn),參加同型比較抗體后,nk細(xì)胞外貌d69及胞內(nèi)ifn-表達(dá)顯著升高圖3a,nk細(xì)胞對k562的殺傷活性也顯著加強(qiáng)圖3;但參加飽和劑量的抗體159207后,nk細(xì)胞外貌d69及胞

9、內(nèi)ifn-表達(dá)、以及nk細(xì)胞對k562的殺傷活性大幅落落圖3a、,較靜息的nk細(xì)胞僅有薄弱進(jìn)步。這說明ifn-誘導(dǎo)的外貌is分子在單核細(xì)胞活化nk細(xì)胞中發(fā)揮著緊張作用。用transell小室進(jìn)一步證明了細(xì)胞間直接打仗在單核細(xì)胞活化nk細(xì)胞中的作用。從圖3中可以看出,用小室斷絕單核細(xì)胞及nk細(xì)胞后,nk細(xì)胞活化標(biāo)識表記標(biāo)幟d69及胞內(nèi)ifn-表達(dá)較nk/單核細(xì)胞混淆條件下顯著減低圖3b,nk細(xì)胞的細(xì)胞毒活性也顯著削弱圖3。這些效果提示nk細(xì)胞與單核細(xì)胞的直接打仗及單核細(xì)胞外貌的is分子,大概是ifn-介導(dǎo)nk/單核細(xì)胞彼此作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。圖3單核細(xì)胞活化nk細(xì)胞依靠is分子及細(xì)胞間的直接打仗略a

10、:ifn-預(yù)先刺激的單核細(xì)胞與nk細(xì)胞共造就,當(dāng)參加抗is抗體159207阻斷后,nk細(xì)胞d69及胞內(nèi)ifn-表達(dá)受按捺;b:ifn-預(yù)先刺激的單核細(xì)胞與nk細(xì)胞共造就,當(dāng)以細(xì)胞小室阻斷細(xì)胞直接打仗后,nk細(xì)胞d69及胞內(nèi)ifn-表達(dá)受按捺;:ifn-預(yù)先刺激的單核細(xì)胞與nk細(xì)胞共造就,當(dāng)參加抗is抗體159207阻斷左,或以細(xì)胞小室阻斷細(xì)胞直接打仗后右,nk細(xì)胞對k562細(xì)胞的殺傷活性變革.3討論完備的免疫應(yīng)答包羅自然免疫應(yīng)答和順應(yīng)性免疫應(yīng)答2方面,淋巴細(xì)胞和非淋巴細(xì)胞是免疫應(yīng)答的重要物質(zhì)底子,免疫應(yīng)答的效應(yīng)重要由淋巴細(xì)胞來發(fā)揮和表現(xiàn),非淋巴細(xì)胞那么起著不成缺少的幫助和調(diào)治的作用。終究上,免

11、疫細(xì)胞之間的接洽和彼此作用非常精細(xì)而龐大,在淋巴細(xì)胞之間、淋巴細(xì)胞與非淋巴細(xì)胞之間均存在著差異的“對話機(jī)制。免疫細(xì)胞之間的“對話方法重要有二種,一是通過開釋化學(xué)介質(zhì)重要是細(xì)胞因子通報信息;二是通過細(xì)胞之間的直接打仗舉行交換。對免疫細(xì)胞彼此作用的研究,此前重要會合在nk細(xì)胞與d、t細(xì)胞與d、nk細(xì)胞與t細(xì)胞幾個方面,對付單核細(xì)胞對免疫應(yīng)答的調(diào)治那么存眷不敷。體內(nèi)ifn-泉源于淋巴細(xì)胞,在免疫應(yīng)答的早期和晚期重要別離由nk細(xì)胞和活化的t細(xì)胞產(chǎn)生。除了發(fā)揮直接的抗病毒成效,ifn-對免疫應(yīng)答也起著關(guān)鍵的調(diào)治作用。很早就創(chuàng)造,ifn-對單核-巨噬細(xì)胞的生化、形態(tài)及成效有修飾和調(diào)治的作用,它能直接活化巨

12、噬細(xì)胞,能促進(jìn)髓樣ds排泄il-12和向th1極化。對付單核細(xì)胞,ifn-一方面可以影響其向d或巨噬細(xì)胞分化;另一方面,ifn-還能誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生系列細(xì)胞因子如il-15、il-12、tnf-、il-6、-sf等1,2。既往研究創(chuàng)造,ifn-介導(dǎo)了單核細(xì)胞與淋巴細(xì)胞之間的交互活化,這種交互作用依靠細(xì)胞間的直接打仗,但其詳細(xì)分子機(jī)制不清3。我們的研究表現(xiàn),泉源于淋巴細(xì)胞的ifn-能上調(diào)單核細(xì)胞外貌is表達(dá),i那么介導(dǎo)了nk細(xì)胞的活化。is基因位于人類第6號染色體h-i類基因地區(qū),與經(jīng)典的h-i類分子卻只有30%雷同序列。is無抗原提呈成效,作為一種應(yīng)激分子,它普及表達(dá)于處于應(yīng)激或惡變的細(xì)胞外貌

13、,某些正常細(xì)胞外貌或胞質(zhì)內(nèi)也存在is表達(dá)。此前創(chuàng)造,單核細(xì)胞胞質(zhì)而非胞膜存在i卵白表達(dá)5。細(xì)胞因子tnf-、ifn-對單核細(xì)胞is表達(dá)無雷同的影響,這提示單核細(xì)胞大概是ifn-發(fā)揮免疫調(diào)治作用的一個很緊張的靶細(xì)胞,而ifn-那么大概是是淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞之間的重要信號分子。終究上,浩繁證據(jù)表白,ifn-在淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞的“對話中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。單核細(xì)胞、d和巨噬細(xì)胞是免疫體系中專職的ap,固然巨噬細(xì)胞及大部門d泉源于單核細(xì)胞,但它們之間的生物學(xué)性狀差異十明白顯,在nkg2d配體的表達(dá)和調(diào)治上也是云云:單核細(xì)胞構(gòu)成性表達(dá)i轉(zhuǎn)錄模板和卵白,g-sf、il-4誘導(dǎo)的單核細(xì)胞源性d(ds)卻無i

14、s的轉(zhuǎn)錄和卵白合成;ifn-可以上調(diào)單核細(xì)胞外貌某種i分子表達(dá)7。i類ifnifn-大概是結(jié)核桿菌的熏染可以誘導(dǎo)d外貌i分子表達(dá),從而介導(dǎo)nk細(xì)胞6的活化;對付巨噬細(xì)胞,如今創(chuàng)造lps而非ifn-可以或許誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞表達(dá)rae-18。這種差異表白,單核細(xì)胞的分化,也影響著i分子的表達(dá)和調(diào)治,但此中的詳細(xì)機(jī)制不明晰。單核細(xì)胞及d在il-15的表達(dá)調(diào)治上也有顯著差異,單核細(xì)胞il-15與i分子一樣受ifn-而非ifn-調(diào)治,而ifn-那么能促進(jìn)d表達(dá)i和il-159?；谝陨涎芯啃Ч?我們以為在抗原提呈細(xì)胞aps與淋巴細(xì)胞之間大概存在著一種以ifn為信使、以nkg2d為橋梁的交換對話機(jī)制?！緟?/p>

15、考文獻(xiàn)】1delnestey,harbnnierp,herbaultn,erfern-sithesnytedifferentiatinfrdendritiellstarphagesj.bld,2022,101(1):143-150.2bekeredjian-dingi,rthsi,gilless,etal.tell-independent,tlr-induedil-12p70prdutininpriaryhuannytesj.jiunl,2022,176(12):7438-7446.3gnzalez-alvari,dinguez-jienez,rtiza,erl

16、eukin-15andinterfern-gaapartiipateintherss-talkbeteennaturalkillerandnytiellsrequiredfrtuurnersisfatrprdutinj.arthritisresther,2022,8(4):r88.4rauletdh.rlesfthenkg2diunreeptranditsligandsj.natreviunl,2022,3(10):781-790.5stephensha.iandibgenes:antheenigaftheirplyrphisbereslved?j.trendsiunl,2001,22(4):378-385.6jinushi,takeharat,kantt,etal.ritialrlefhlassi-relatedhainaandbexpressinnifn-stiulateddendritiellsinnkellativatin:ipai