液態(tài)活檢與你同行PPT培訓(xùn)課件

1、液態(tài)活檢與你同行醫(yī)學課件MIT Technology Review雜志發(fā)布了2015年度十大突破技術(shù)(10 Breakthrough Technologies 2015)的榜單。液態(tài)活檢技術(shù)光榮上榜。3“液態(tài)活檢”Christian Rolfo, Biochimica et Biophysica Acta, 2013.Lowes L E, et al. J. International journal of molecular sciences, 2016, 17(9): 1505. A liquid biopsy is a liquid biomarker that can be easil

2、y isolated from many body fluids blood, saliva, urine, ascites, pleural effusion, etc.) and, as well as a tissue biopsy, a representative of the tissue from which it is spread.包括：循環(huán)腫瘤細胞 （CTC）; 循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）; 腫瘤外泌體 （exosome）液體活檢發(fā)展歷程01液體活檢臨床應(yīng)用02液體活檢VS組織檢測03CONTENTPart 1液體活檢發(fā)展歷程6癌癥患者的ctDNA、cfDNA及其發(fā)現(xiàn)cf

3、DNA即循環(huán)游離DNA，機體細胞釋放入外周血液循環(huán)后發(fā)生部分降解的內(nèi)源性DNA。ctDNA即循環(huán)腫瘤DNA，是指腫瘤細胞DNA經(jīng)脫落或細胞凋亡后釋放進入循環(huán)系統(tǒng)?？蓙碜栽l(fā)腫瘤或轉(zhuǎn)移形成的新腫瘤。（是cfDNA的一種）甚至在腫瘤形成早期血液中往往還沒有CTCs但是卻已經(jīng)開始有ctDNA。Ma M, et al. J. Annals of translational medicine, 2015, 3(16).1991膀胱癌患者尿液DNA-TP53突變1999乳腺癌TP53突變胰腺癌KRAS突變2004肝癌和卵巢癌發(fā)現(xiàn)TP53突變2007食管癌CpG島甲基化2003結(jié)直腸癌發(fā)現(xiàn)KRAS突變200

4、7肺癌發(fā)現(xiàn)KRAS突變；黑色素瘤BRAF突變ctDNA成為腫瘤研究熱點，下一代癌癥指標幾十年來，人們發(fā)現(xiàn)ctDNA與腫瘤密切相關(guān)，能夠準確反映腫瘤的動態(tài)變化。腎癌DNA不穩(wěn)定性20088循環(huán)腫瘤細胞（CTCs） 循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液循環(huán)的腫瘤細胞。1869澳大利亞醫(yī)生Ashworth發(fā)現(xiàn)CTCs1989腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)現(xiàn)CTC1999-2003開展大量臨床實驗201319761976年CTC細胞被重新定義20042017FDA批準用于臨床 單細胞測序技術(shù)確立CTC的腫瘤替代性CTC可能在肉眼可見腫瘤形成之前進入外周血，是腫瘤轉(zhuǎn)移的“種子”。9外泌體及其發(fā)現(xiàn)Ra

5、poso G，et al. J. J Cell Biol, 2013, 200(4): 373-383.外泌體研究尚處于臨床早期，全球臨床試驗26例 198620131996膜性囊泡研究的三位科學家獲得諾貝爾獎發(fā)現(xiàn)外泌體EB病毒轉(zhuǎn)化的B細胞內(nèi)膜性囊泡可激活T細胞天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液和母乳。外泌體(Exosome)是活細胞分泌的來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體)的膜性囊泡。10液體活檢技術(shù)對比ctDNA 富集容易檢測難但腫瘤代表性較強CTC 檢測容易富集難外泌體的穩(wěn)定性較強，但距臨床應(yīng)用還較遠Part 2液態(tài)活檢臨床應(yīng)用ctDNA的臨床應(yīng)用Heitzer E, et al. J

6、. Clinical chemistry, 2015, 61(1): 112-123.早期診斷，檢測殘余病灶動態(tài)監(jiān)測治療反應(yīng)；指導(dǎo)靶向用藥判斷預(yù)后13最新版NCCN指南增加ROS1融合基因Nat Med. 2012 Feb 12;18(3):378-81.14ROS1融合基因2007年全基因組分析在肺癌上發(fā)現(xiàn)ROS1基因。在前期臨床的研究中，crizotinib顯示出對抗ROS1驅(qū)動的腫瘤細胞的活性?；頝at Med. 2012 Feb 12;18(3):378-81.15ROS1融合基因（臨床研究 PROFILE 1001）Shaw A T, et al. NEJM, 2014, 371(2

7、1): 1963-1971.入組病例：ROS1隊列研究入組ROS1突變陽性患者 50人檢測方法：FISH檢測研究結(jié)果：ORR：72%，mPFS為19.2個月16ROS1融合基因（臨床研究OO-1201）.吳一龍 2016 CSCO關(guān)鍵入組標準集中RT-PCR檢測ROS1-陽性確認ALK融合陰性局部晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLC既往接受過 3 線的系統(tǒng)治療ECOG PS 0 or 1可評估的疾病治療穩(wěn)定的腦轉(zhuǎn)移患者可入組克唑替尼250mg Bid PO，持續(xù)劑量28天一周期（N=127）臨床終點主要終點：ORR次要終點：持續(xù)響應(yīng)時間 響應(yīng)時間 疾病控制率 PFS OS 安全性 臨床結(jié)局OO-1201是一

8、項針對東亞人群（中國、日本、韓國）的期臨床研究，其中包括中國患者74例，是迄今為止規(guī)模最大的ROS1陽性NSCLC臨床研究。17ROS1融合基因（臨床研究OO-1201）.吳一龍 2016 CSCO基線統(tǒng)計與疾病特點18ROS1融合基因（臨床研究OO-1201）.吳一龍 2016 CSCO基線疾病變化百分比IRR-評估的靶病變疾病變化百分比19ROS1融合基因（臨床研究OO-1201）.吳一龍 2016 CSCO治療中發(fā)生10%的不良反應(yīng)Part 3液態(tài)活檢VS組織檢測21血液檢測腫瘤基因突變的關(guān)鍵問題血液檢測是否有生存獲益?1血液檢測與組織的一致性程度?2血液檢測的優(yōu)勢與臨床獲益進展追蹤（比

9、影像學更早）血液檢測無痛微創(chuàng)、容易獲取無取樣空間限制23ctDNA檢測RAS突變與組織檢測的一致性Vidal J, et al. J. Annals of Oncology, 2017, 28(6): 1325-1332.IF: 11.85555例組織中檢測陽性的患者，53例血液樣本陽性，總體一致率達到96.4%。60例組織檢測RAS野生型的患者，54例血液檢測中為野生型，總體符合率90%。其余6例患者，血液檢測到突變而組織未檢測到。55例組織陽性60例組織陰性115例轉(zhuǎn)移型mCRC患者的組織和血液樣本研究結(jié)論：115例mCRC患者組織和血漿樣本RAS分析總一致性為93%。血液檢測的可靠性不亞

10、于組織檢測，甚至高于組織檢測24ctDNA檢測與組織檢測的一致性Vidal J, et al. J. Annals of Oncology, 2017, 28(6): 1325-1332.臨床案例：NRAS61等位基因突變的術(shù)前術(shù)后動態(tài)監(jiān)測案例KRAS146等位基因突變的術(shù)后監(jiān)測案例一個IV期結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的患者，檢測到血漿和組織NRAS61突變后4周后開始貝伐單抗-FOLFOX治療，顯著的ctDNA下降與疾病穩(wěn)定和12周時CT掃描結(jié)果相關(guān)聯(lián)；八個月后，患者疾病復(fù)發(fā)，RAS 等位基因突變率相應(yīng)增加，啟動二線治療方案FOLFIRI-阿柏西普三個月后，CT檢測并且穩(wěn)定，此時檢測不到ctDNA RA

11、S突變。一個IV期結(jié)直腸癌多發(fā)轉(zhuǎn)移的患者，血液活檢分析檢測到一個KRAS146等位基因突變，隨后手術(shù)組織樣本的檢測證實了血液檢測的結(jié)果。FOLFOX-貝伐單抗的治療早期，ctDNA RAS突變率逐漸降低，12周時檢測不到ctDNA，治療停止后，ctDNA KRAS146突變率增加，隨后再次進行化療，ctDNA KRAS146突變率隨之下降。作者年份期刊樣本數(shù)癌種方法突變一致率Shu Y, et al2017Scientific Reports605除腦瘤外的29種腫瘤NGS87.0%Ma20162016Gene219III-IV期的NSCLC患者ARMS82%（EGFR）IFUM trial

12、20142014Journal of Thoracic Oncology1060NSCLC患者試劑盒94%（EGFR）Villaflor 2016OncotargetNSCLC患者NGS79%Vidal J, et al2017Annals of Oncology115轉(zhuǎn)移型結(jié)直腸癌試劑盒93%（RAS）血液檢測與組織檢測具有較高一致性 組織和血液樣本的不一致性原因可能有：腫瘤的異質(zhì)性組織和血液的采樣時間差異腫瘤時期腫瘤的類型項目推薦等級適用人群臨床應(yīng)用藥物意義EGFR1類推薦所有病理診斷為肺腺癌、含有腺癌成分和具有腺癌分化的NSCLC患者；無嗜煙者、小活檢標本或混合組織學類型的患者.厄洛替尼

13、（1類推薦）阿法替尼（1類推薦）吉非替尼（1類推薦）敏感位點：19號外顯子缺失、21號外顯子（L858R,L861）18號外顯子（G719X，G719)，20號外顯子（S768I）耐藥位點：20號外顯子插入突變，KRAS突變ALK1類推薦克唑替尼（1類推薦）色瑞替尼（1類推薦）ALK重排FISH陽性ROS12A推薦克唑替尼（2A推薦）ROS1重排FISH陽性PD-L12A推薦pembrolizumab（1類推薦）PDL1 IHC50%EGFRT790M2A推薦EGFR-TKI藥物耐藥進展后Osimertinib（1類推薦）T790M突變陽性腳注：1. NCCN強烈推薦更為廣泛的分子檢測,包括那

14、些已經(jīng)有針對性藥物的罕見突變,或者有可能進行臨床研究。更為 廣泛的分子檢測是改善NSCLC治療的關(guān)鍵因素。 2. 首先考慮活檢樣本，如果重復(fù)活檢不可行，也可考慮血漿活檢。如果血漿T790M突變檢測陰性，可考慮反過來進行組織的基因檢測。 3. 如果活檢T790M為陰性，考慮血液檢測，如果血漿T790M突變檢測陰性，考慮可反過來進行基于組織的檢測。NCCN NSCLC基因檢測項目27液體活檢的檢測方法的選擇共識一：精準醫(yī)學是一項系統(tǒng)工程，包括：發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的基因異常（包括可靶點抑制、預(yù)測和或預(yù)后標志物）；發(fā)明可靶向特異基因異常的藥物；尋找證明其特異的有效性安全性證據(jù)應(yīng)用于臨床證明了證據(jù)的可重復(fù)性。任何一項缺少都不允許。共識二：液體活檢的檢測對象包括：循環(huán)腫瘤細胞，血漿DNA，Exosome。共識三：檢測已知的、