流式細胞檢測技術(shù)講座

1、關(guān)于流式細胞檢測技術(shù)講座第一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月主要內(nèi)容 流式細胞技術(shù)概念 流式細胞技術(shù)原理 流式實驗的設(shè)計 流式細胞技術(shù)在臨床&科研上的應用第二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月流式細胞技術(shù)概述 流式細胞技術(shù)的概念 流式細胞技術(shù)的特點 流式細胞儀的檢測范圍 BD公司流式細胞儀 流式細胞儀的結(jié)構(gòu)第三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月什么是 FCM ？流式細胞術(shù)：利用流式細胞儀對處于快速流動的細胞或生物顆粒進行多參數(shù)、快速的定量分析及分選的技術(shù)激光技術(shù)+流體力學+光電測量技術(shù)+計算機技術(shù)+細胞熒光化學技術(shù)+單克隆抗體技術(shù)第四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于202

2、2年6月FCM的特點測量速度快：最快可在1秒種內(nèi)檢測上萬個細胞可進行多參數(shù)測量：可以對同一個細胞做有關(guān)物理、化學特性的多參數(shù)測量具有明顯的統(tǒng)計學意義：提供細胞群體的均值和分布情況高分辨率(CVPEPerCP-Cy5.5FITCPerCP 4. 抗原密度 高表達的抗原幾乎可以用任何熒光素標記的抗體檢測，而較低表達的抗原（如細胞因子）則需要用較高S/N比值的熒光素（如PE和APC）標記的抗體檢測，從而達到有效區(qū)分陽性細胞群和陰性細胞的目的。如血小板活化檢測試劑： PAC-1-FITC/CD62P-PE/CD61-PerCP 第四十二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光抗體組合的選擇5.

3、熒光光譜之間的重疊在多色分析中，雖然可以通過熒光補償消除熒光光譜重疊的影響，但使用熒光探針的種類越多，補償?shù)膹碗s程度增加，因此選擇光譜重疊越少的組合越好6. 自發(fā)熒光每個細胞群體的自發(fā)熒光水平都不同，自發(fā)熒光在高波長范圍里（600nm）迅速降低。因此檢測自發(fā)熒光水平高的細胞時，使用發(fā)射光波長較長的熒光染料（如APC），可得到較好的S/N比7. 熒光素濃度、配伍不當、試劑的質(zhì)量均導致假陰性/ 假陽性結(jié)果一個抗體組合內(nèi)的抗體可能來源不同的公司，有不同的濃度、不同的亞型，可能均需要自身的同型對照，而實際上，這是非常困難的。盡量選擇同一家公司的試劑可以減少干擾。 第四十三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2

4、022年6月常用熒光染料組合FITCPE：最常用的雙色組合FITCPEPerCP：最常用的三色組合，進行多色熒光染色時熒光光譜重疊補償很小，但PerCP光量子產(chǎn)量并不太高，最好應用在檢測表達較高的抗原上，如CD4/8/3FITCPEPerCP+APC：最常用的四色組合，一般PE和APC用于檢測表達較低的抗原上，而FITC和PerCP用于檢測表達較高的抗原上，如CD3/8/45/4PerCP-Cy5.5與PE之間的重合光譜范圍很小，也可用于四色組合PE-Cy7可與FITC、PE、APC標記的抗體一同使用，熒光補償小PE-Cy5可與FITC、PE同時使用，但不能與APC同時使用，二者之間熒光干擾太大PE-Texas Red盡量不與PE同時使用，二者之間熒光補償非常大第四十四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月臨床上常見的流式檢測項目，所需的試劑組合基本都有參考或推薦的抗體組合，如：血小板活化檢測：造血干細胞計數(shù)： 但對于白血病/淋巴瘤免疫分型，國際上迄今為止尚沒有統(tǒng)一的抗體組合常用單抗組合熒光抗體PEFITC或PerCP對照管IgG1CD45試驗管CD34CD45熒光抗體FITCPEPerCP對照管PAC-1+RGDSIgG1CD6