2022醫(yī)學(xué)課件大腸菌群檢測(三)重點(diǎn)

1、牛乳大腸菌群復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)BGLB液體接種操作第一頁，共十三頁。實(shí)訓(xùn)目的進(jìn)一步理解大腸菌群檢測的操作流程了解大腸菌群液體接種方法 進(jìn)一步熟悉無菌操作要點(diǎn)第二頁，共十三頁。實(shí)訓(xùn)儀器與設(shè)備酒精燈、接種針、火柴、75%酒精棉、LST肉湯培養(yǎng)物、BGLB肉湯培養(yǎng)基第三頁，共十三頁。實(shí)訓(xùn)步驟1、LST肉湯培養(yǎng)基的產(chǎn)氣檢查 觀察培養(yǎng)完畢的LST肉湯培養(yǎng)液，觀察小倒管中是否有氣體產(chǎn)生。假設(shè)有氣體產(chǎn)生，那么疑似大腸菌群，需要進(jìn)行BGLB肉湯培養(yǎng)基接種。第四頁，共十三頁。 LST肉湯 BGLB肉湯 結(jié)果 1：10 產(chǎn)氣 產(chǎn)氣 陽性 1：100 產(chǎn)氣 產(chǎn)氣 陽性 1：1000 產(chǎn)氣 產(chǎn)氣 陽性第五頁，共十三頁。2、B

2、GLB液體接種 將產(chǎn)氣的LST肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行液體接種。 在酒精燈上灼燒接種環(huán)，從LST肉湯培養(yǎng)基中挑取一環(huán)菌液，接種于BGLB肉湯培養(yǎng)基中，36培養(yǎng)48小時(shí)后。觀察產(chǎn)氣情況。第六頁，共十三頁。液體接種操作要點(diǎn)：1、操作前消毒2、接種環(huán)灼燒完全，鎳絲要燒紅。3、棉塞夾于拿接種針手的無名指和小指之 間4、翻開棉塞后試管口要在酒精燈旁，防止雜菌進(jìn)入。第七頁，共十三頁。BGLB接種操作問題： 1、如何進(jìn)行LST肉湯培養(yǎng)基的產(chǎn)氣檢查？2、如何用接種針進(jìn)行挑菌操作？3、液體接種過程中如何使用才能保證無菌狀態(tài)？第八頁，共十三頁。1、觀察試管內(nèi)的小倒管，如果小倒管有氣泡存在或者小導(dǎo)管上漂，說明試管產(chǎn)氣。2、首

3、先點(diǎn)燃酒精燈，在酒精燈旁進(jìn)行操作。其次接種前充分灼燒接種針，將鎳絲燒紅為止。接種時(shí)將試管放于酒精燈上方火焰外焰處，棉塞加于無名指和小指之間。3、吸量管在使用前進(jìn)行灼燒，拿管要求遠(yuǎn)離實(shí)訓(xùn)服，使用前檢查是否包扎完好無玻璃外露。第九頁，共十三頁。思考題：1、大腸菌群檢測流程2、回憶初發(fā)酵試驗(yàn)步驟 3、大腸菌群檢測涉及到幾種培養(yǎng)基？LST肉湯培養(yǎng)基的制備步驟、配方是什么？第十頁，共十三頁。2、初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)步驟1稱取25g固體樣品，參加225mL無菌水中，均質(zhì)制備成1：10 樣品溶液。 2用1只1mL無菌吸量管吸取1：10樣品溶液，用無菌方法各取1mL，分別參加到3只LST肉湯培養(yǎng)基中。 3吸取1mL1：

4、10樣品溶液，參加到裝有9mL無菌試管中搖勻，制備成1：100樣品溶液。 4換1只吸量管各取1mL1：100溶液，參加到3只LST肉湯培養(yǎng)基中。 5吸取1mL1：100樣品溶液，參加到裝有9mL無菌試管中搖勻，制備成1：1000樣品溶液。 6換1只支吸量管各取1mL1：1000溶液，參加到3只LST肉湯培養(yǎng)基中。736度1度，48小時(shí)2小時(shí)培養(yǎng)后觀察第十一頁，共十三頁。3、2種培養(yǎng)基，LST肉湯培養(yǎng)基和BGLB肉湯培養(yǎng)基。 LST肉湯培養(yǎng)基：胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g氯化鈉 5.0 g 乳糖 5.0 g 磷酸氫二鉀K2HPO4 2.75 g 磷酸二氫鉀KH2PO4 2.75 g 月桂基硫酸鈉 0.1 g 蒸餾水 1 000 mL pH 6.80.2 將上述成分溶解于蒸餾水中，調(diào)節(jié) pH。分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管10 mL。121 高壓滅菌15 min。第十二頁，共十三頁。內(nèi)容總結(jié)牛乳大腸菌群復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)BGLB液體接種操作。觀察培養(yǎng)完畢的LST肉湯培養(yǎng)液，觀察小倒管中是否有氣體產(chǎn)生。2、首先點(diǎn)燃酒精燈，在酒精燈旁進(jìn)行操作。其次接種前充分灼燒接種針，將鎳絲燒紅為止。接種時(shí)將試管放于酒精燈上方火焰外焰處，棉塞加于無名指和小指之間。4換1只吸量管各取1m