芫荽人工種子的制作研究

1、1研究目的人工種子，是細胞工程中最年輕的一項新興技術(shù)。利用體細胞胚發(fā)生的特征，把它包埋在膠囊中，可以形成具有種子的性能并直接在田間播種。優(yōu)點1、通過組織培養(yǎng)的方法可以獲得數(shù)量很多的胚狀體而且繁殖速度快，結(jié)構(gòu)完整； 2、可根據(jù)不同植物對生長的要求配置不同成分的“種皮”； 3、在大量繁殖苗木和用于人工造林方面，人工種子比采用試管苗的繁殖方法更能降低成本，而且方便機械化播種，可節(jié)省勞動力； 4、體細胞胚是由無性繁殖體系產(chǎn)生的，因而可以固定雜種； 5、有時可以在人工種子中加入某些農(nóng)藥、菌肥、有益微生物、激素等； 6、胚狀體發(fā)育的途徑可以作為高等植物基因工程和遺傳工程的橋梁。 7、解決了有些作物品種繁殖

2、能力差、結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題。 2bac研究背景最初是由英國科學(xué)家于1978年提出的。 1978年Murashige提出人工種子概念。1984年Kitto首次制作出了胡蘿卜的種子，但存活率很低。1986年Redenbaugh等成功地利用藻酸鈉包埋單個體細胞胚，生產(chǎn)人工種子 。在國內(nèi)，金翼毅等進行芹菜和苜蓿的人工種子的研究。李修慶建立了胡蘿卜人工種子的基本制作流程，桂耀林等研究了換臉體細胞的胚胎發(fā)生并制出了人工種子。番木瓜體細胞胚人工種子（Castillo等，1998）；b. 馬鈴薯微芽人工種子（Patel等，2000）；c. 人參體細胞種子（Choi和Jeong，2002）。 3培養(yǎng)技術(shù)通

3、過組織培養(yǎng)技術(shù)，可把植物組織的細胞培養(yǎng)成在形態(tài)及生理上與天然種子胚相似的胚狀體，也叫作體細胞胚。這種體細胞胚有于葉、根、莖分生組織的結(jié)構(gòu)。科學(xué)家把體細胞胚包埋在膠囊內(nèi)形成球狀結(jié)構(gòu)，使其具備種子機能。所以，人工種子是一種人工制造的代替天然種子的顆粒體，可以直接播種于田間。 4培養(yǎng)工藝流程外植體（芫荽幼苗的莖）脫分化、去分化，用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出芫荽的愈傷組織將顆粒性胚狀愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化分培養(yǎng)基或不含2,4-D的MS培養(yǎng)基上發(fā)育（經(jīng)球形胚，心形胚，魚雷型胚）為成熟的胚狀體胚狀體的包埋人工種子的播種、萌發(fā)、幼苗的移栽外植體愈傷組織人工種子體細胞胚5實驗結(jié)果及分析激素對芫荽愈傷組織誘導(dǎo)的影響本實驗設(shè)計

4、了四種誘導(dǎo)培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)出芫荽的愈傷組織。2,4-D 1.0mg/L NAA 1.0mg/L2,4-D 1.0mg/L KT 0.5mg/LNAA 2.0mg/L KT 0.5mg/L1)2,4-D的誘導(dǎo)效果不及NAA2)生長素類與細胞分裂素配合使用比單獨施加生長素的誘導(dǎo)效果要好。 6實驗結(jié)果及分析培養(yǎng)基對芫荽胚狀體形成的影響2,4-D去掉是必要的（表二），濃度為1.0mg/L時完全抑制成熟體細胞胚的形成有機添加物對芫荽體細胞胚的發(fā)育也有顯著影響，添加一定的酪朊水解物對體細胞的發(fā)育極為明顯的促進作用，過多抑制碳水化合物對芫荽體細胞胚的形成和發(fā)育也有一定的影響，3%蔗糖含量最適與芫荽成熟體細胞胚的形成，過高抑制7實驗結(jié)果及分析包埋芫荽胚狀體在固體培養(yǎng)基上生產(chǎn)的正常成熟胚狀體，可挑出直接進行人工種子的制作；懸浮培養(yǎng)基中形成的成熟的胚狀體則先用18目的不銹鋼網(wǎng)過濾，除去大的愈傷組織塊，用長度為2mm的成熟的胚狀體進行包埋。包埋劑： 3%海藻酸鈉，2%CaCl2H2O固化，二者均用1/2MS配制，胚狀體與包埋劑融合，然后吸管吸取胚狀體并逐一滴入固化液中，待固定成形后用無菌水沖洗，便可得到。包埋球在固化液（2%CaCl2H2O)中停留約2030分鐘。8實驗結(jié)果及分析人工種子的播種，萌發(fā)及幼苗的移栽播種在1/