核醫(yī)學(xué)其它體外分析+分子核進(jìn)展

1、其它體外放射分析1含意：除RIA之外的一切體外放射分析，但它的應(yīng)用有一定局限性。一、競(jìng)爭(zhēng)蛋白結(jié)合分析（CPBA）：待分析物的結(jié)合劑：蛋白質(zhì)舉例：TBG甲狀腺素結(jié)合球蛋白甲狀腺素 CBG皮質(zhì)醇結(jié)合球pro皮質(zhì)醇 SHBG性激素結(jié)合球pro皮質(zhì)醇 內(nèi)因子結(jié)合蛋白B12 視蛋白視黃醛 蛋白激酶CAMP、cGMP 牛乳蛋白酶、葉酸還原酶葉酸 2方法：競(jìng)爭(zhēng)性與RIA相同優(yōu)點(diǎn)：這些蛋白天然存在，來(lái)源豐富，制備簡(jiǎn)單，省時(shí)，方法學(xué)成熟易建立。缺點(diǎn)： 比抗體的特異性差、靈敏度也差，為了提高特異性，須在樣品制備上下功夫。如純化，清除干擾物等，不夠方便。 該類蛋白種類有限，應(yīng)用范圍受限，已有很多被RIA和IRMA取

2、代。 3 二、放射受體分析RRA RRA與RBA的區(qū)別含義：以受體為結(jié)合劑，利用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合原理對(duì)配體進(jìn)行體外分析。受體的分類： 膜R：一般為水溶性配體（肽類激素、兒茶酚胺等） 胞內(nèi)R：（漿or核），一般為脂溶性的配體（甲狀腺素，類固醇）受體樣品的制備：與RBA相同。 4標(biāo)記品的要求： 要求配體標(biāo)記前后生物活性不受影響。因?yàn)闃?biāo)記配體在RRA時(shí)活性往往是降低的。如125I標(biāo)上一個(gè)不影響，如果有二個(gè)125I標(biāo)上就有變化了。RRA的優(yōu)點(diǎn)： 1、R與L的結(jié)合反應(yīng)快、瞬間完成、比RIA出結(jié)果快。 2、能反應(yīng)L的生物學(xué)活性。如冬眠靈有多種衍生物，它們均能與特異抗體結(jié)合，但只有有生物活性的衍生物才能與受體結(jié)合，

3、這種測(cè)定反應(yīng)L的生物學(xué)活性，而不是免疫活性。所以研究物質(zhì)結(jié)合與功能RRA占有相當(dāng)?shù)牡匚弧?RRA的缺點(diǎn)： 1、靈敏度比RIA小10100倍，這是因?yàn)椴煌M織間得來(lái)的受體對(duì)配體的親和力有差異，又難以尋找高親和力的受體。 2、反應(yīng)條件和環(huán)境嚴(yán)格，離子強(qiáng)度，溫度、PH值要求高。 3、NSB結(jié)合容量大，親和力又小，NSB較大6臨床應(yīng)用： 1、利用受體來(lái)測(cè)體內(nèi)配體的含量。 2、測(cè)定體內(nèi)抗受體抗體的量。 有些疾病發(fā)現(xiàn)體內(nèi)存在著抗R的抗體（自身抗體），如Gtraves disease(TSH、甲狀腺素R的抗體)；Insulin B型抗癥（Ins R-Ab）、重癥肌無(wú)力（乙酰膽鹼受體抗體）。這類受體的抗體有兩

4、類特征： 1、受體結(jié)合部位抗體（RAb）：當(dāng)R與Ab成復(fù)合物時(shí)，復(fù)合物中的R可再與配體結(jié)合，即R的結(jié)合位點(diǎn)保留，但復(fù)合物卻抑制配體與單獨(dú)存在的游離R相結(jié)合。 2、受體非結(jié)合部位抗體（Ab）：它的特征是復(fù)合物對(duì)配體與R的結(jié)合無(wú)抑制作用。 7三、酶的放射分析（REA）1、酶的活性（力）分析 概念：酶活性（力）：指酶催化加速反應(yīng)的能力。 表示法：濃度/時(shí)間（反應(yīng)酶促反應(yīng)速度的快慢） 酶的反應(yīng)速度，可以是底物的消耗量或產(chǎn)物的生成量 單位：Kat：（催量）指在規(guī)定條件下，每秒鐘酶催化1mol底物轉(zhuǎn)變所需要酶的量。 舊單位：U；1 U=16.67kat 符號(hào)：底物用S表示， S*指標(biāo)記的底物 酶用E表示

5、P產(chǎn)物 反應(yīng)式：*S+E E*S E*P *P+E 經(jīng)過(guò)一般時(shí)間，從反應(yīng)液中分離出*P，測(cè)放。8 *P的CPS酶活性（力）的計(jì)算（kat）=- SAte *P的CPS酶的比活力（kat/g）=- SAtew可知以下幾個(gè)量：t（分）：*P的放射性CPS；SA標(biāo)記物的比活度；e儀器效率；W參加反應(yīng)的酶的蛋白量（mg）。9優(yōu)點(diǎn):1、靈敏度高（放射性標(biāo)記品）2、特性性強(qiáng)，由酶的專一性決定。3、適用廣，絕大多數(shù)酶可用此法。缺點(diǎn):1、需高質(zhì)量的定位標(biāo)記物2、分離方法復(fù)雜，難以自動(dòng)化。酶液制備：標(biāo)記物制備與選擇PH、激活或抑制劑的使用、溫度、時(shí)間等（自學(xué)）102、酶促同位素衍生物分析：實(shí)際上分析底物含量。反

6、應(yīng)：標(biāo)記試劑+待測(cè)底物 標(biāo)記衍生物 E舉例：32PrATP+膽鹼 32P一磷酰膽鹼+ADP激酶膽鹼 衍生物的放射性強(qiáng)弱標(biāo)記試劑比活度可計(jì)算待測(cè)物量 （底物）注意：需要知道一個(gè)分子待測(cè)物能與標(biāo)記試劑結(jié)合的分子比。如果用雙同位素標(biāo)記可以更準(zhǔn)確。 113、酶的激動(dòng)劑和抑制劑測(cè)定法： 原理：激動(dòng)或抑制劑可加快或減慢酶促反應(yīng)的速率，用系列濃度的激動(dòng)或抑制劑與酶進(jìn)行定時(shí)反應(yīng)，分離產(chǎn)物測(cè)放射性，可計(jì)算出激動(dòng)劑或抑制劑的量。如磷酸吡哆醛能使酪氨酸脫羧基產(chǎn)生Co2，14C標(biāo)記酪氨酸經(jīng)磷酸吡哆醛作用產(chǎn)生14Co2，可計(jì)算磷酸吡哆醛的量。124、放射酶促飽和分析法：與酶的底物分析相同 該法類同RIA的競(jìng)爭(zhēng)，不同之處

7、是E不斷從E*S和ES中釋放出來(lái)而再去與S反應(yīng)，如果反應(yīng)時(shí)間足夠長(zhǎng)，因*S與S為同一物，會(huì)均被轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物，失去競(jìng)爭(zhēng)之間的函數(shù)關(guān)系，所以不能象RIA那樣等待反應(yīng)平衡，而應(yīng)該在一定時(shí)間就得分離測(cè)定。這是它的關(guān)鍵（特點(diǎn)之一） 5， ELISA：固相酶標(biāo)記-免疫分析 待測(cè)抗原固相化，然后與酶標(biāo)記的抗體結(jié)合形成復(fù)合物，最后不測(cè)放射性而是讓酶顯色計(jì)算物質(zhì)含量。136、整體酶活力測(cè)定及應(yīng)用二氧化碳呼氣試驗(yàn)：用14C或13C等標(biāo)記酶的底物，如經(jīng)過(guò)酶的作用，其產(chǎn)物中可收集到CO2等，反映酶活力。應(yīng)用：幽門(mén)螺桿菌可產(chǎn)生尿素酶。如果胃內(nèi)有幽門(mén)螺桿菌，可將14C標(biāo)記的尿素分解為14CO2。因此有了呼氣14CO2。檢測(cè)

8、幽菌的檢驗(yàn)。147、其它體外分析的新進(jìn)展 化學(xué)發(fā)光分析（CLIA）：如發(fā)光劑魯米諾經(jīng)氧化劑H2O2和催化劑（HRP）作用下放出光子（發(fā)光）特點(diǎn)：a、用發(fā)光物質(zhì)代替放素建立的免疫分析。b、試劑盒穩(wěn)定性更好，發(fā)光物用特殊處理后才發(fā)光。c、無(wú)放射性污染d、設(shè)備相對(duì)簡(jiǎn)單（仍昂貴，但RIA也貴）e、發(fā)光效率與溫度有關(guān)，須配備恒溫設(shè)備f、 臨床上可應(yīng)用項(xiàng)目有限，價(jià)格高于RIA15時(shí)間分辨熒光免疫分析（TrFIA） 概念：稀土元素：稀土元素不是土,是周期表中5771號(hào)元素的總稱，現(xiàn)又新發(fā)現(xiàn)二個(gè)鈧、釔，共計(jì)17個(gè)元素。 如果用稀土元素標(biāo)記化合物，而這些稀土元素如Eu（銪）、Tb（鋱）Te、Sm（釤）、Dy（鏑

9、）等可發(fā)射熒光，在紫外線激發(fā)下其發(fā)光能譜和發(fā)光時(shí)間相對(duì)集中而穩(wěn)定。而干擾因素的本底發(fā)光壽命很短，可將標(biāo)記物放置短時(shí)間，待本底光暴光后再去測(cè)量稀土熒光，所以叫時(shí)間分辨。必要時(shí)其發(fā)光還可做些增效處理。16該方法優(yōu)點(diǎn)：1、靈敏度高，特異性強(qiáng)2、出結(jié)果快3、樣品熒光能重現(xiàn)4、無(wú)放射性污染缺點(diǎn)：儀器價(jià)格貴 配套試劑制備困難17免疫PCR原理：用DNA做標(biāo)記物，用PCR法擴(kuò)增產(chǎn)物上的DNA，通量測(cè)定DNA的量進(jìn)行定性研究。基本反應(yīng)：1）將待測(cè)物抗原固化試管底部2）加入生物素標(biāo)記的特異抗體Ab-b3）加入親和素A做為連接分子 Ag+Ab-b+AAgAb-b-A4）再加入生物素標(biāo)記的DNA-b得AgAb-b-

10、A-b-DNA 引物 PCR擴(kuò)增 染色 記錄PCR擴(kuò)增的DNA量確定Ab的含量。18優(yōu)點(diǎn)：1） 特異性強(qiáng)（與RIA相同）2）靈敏度高（比酶標(biāo)高1000倍，也高于RIA）3）操作簡(jiǎn)單缺點(diǎn)：1）假陽(yáng)性高2）影響實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度的因素多3）未商品化19還有化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA）p209 用鹼性磷酸酶標(biāo)記Ab，反應(yīng)的復(fù)合物帶有酶，加入底物金剛烷（dioxetane phosphate）后酶促底物斷裂而發(fā)光。電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECL） p209 208、活化分析： 基本原理，用粒子束（射線）照射樣品，使其中待測(cè)穩(wěn)定核素發(fā)生核反應(yīng)變?yōu)榉潘兀捎谶@些放素各具有一定的半衰期、固定的能量特征r射線或其它射

11、線，測(cè)量其衰變出的射線能量和活度就可確定樣品中各元素的種類和活度。臨床應(yīng)用：微量元素分析21活化分析的類型：1）中活化分析：a、反應(yīng)堆中子活化分析（廣泛）b、中子高壓倍加器（啟動(dòng)費(fèi)用高）c、中子源，如Ra-Be中子源（Ra的a粒子轟擊Be可產(chǎn)生中子）d、自發(fā)裂變中子源252Cf（價(jià)格貴），將239Pu在反應(yīng)堆照射二年吸收13個(gè)中子才能得到252Cf產(chǎn)額很低。2）帶電粒子活化分析：一般將帶電子粒子如P、d、a加速，然后轟擊待測(cè)元素，產(chǎn)生新的放素或穩(wěn)定核素。如12C（p,r）13N3）r射線活化分析：較危險(xiǎn)，目前很少用。22活化分析的優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高10-9克左右沒(méi)有試劑污染可進(jìn)行非破壞性分析一次可同時(shí)分析幾十種元素缺點(diǎn)：精確度低有干擾反應(yīng)（副反應(yīng)）方法不易普及不能測(cè)化合物的量和結(jié)構(gòu)。23最常用的計(jì)算公式（相對(duì)測(cè)量法） WX AX - = - WS AS248、質(zhì)子激發(fā)X線發(fā)射分析PIXEA 原理：用高速運(yùn)動(dòng)的質(zhì)子轟擊待測(cè)元素，待測(cè)元素原子核外電子被擊出，留下的空穴將被外層電子來(lái)填補(bǔ)，多余的能量以特征X線放出。 特征（產(chǎn)生射線的能量與入射粒子無(wú)關(guān)，它只與被測(cè)元素的種類有關(guān)。不同的元素產(chǎn)生不同的特征X線。25分子核醫(yī)學(xué)進(jìn)展內(nèi)涵：利用示蹤技術(shù)觀察體內(nèi)的生化過(guò)程并與相關(guān)基因聯(lián)系起來(lái)的一門(mén)分支學(xué)科，分子識(shí)別是其重要理論基礎(chǔ)。研究領(lǐng)域：受體顯