現(xiàn)代藥物分析重點(diǎn)

1、現(xiàn)代藥物分析重點(diǎn)現(xiàn)代藥物分析選論光學(xué)小分子設(shè)計(jì)及應(yīng)用一、熒光的基本原理 熒光物質(zhì)的分子吸收了特征頻率的光能后，由基態(tài)躍遷到能級(jí)較高的第一電子激發(fā)態(tài)單線態(tài)或第二電子 激發(fā)態(tài)單線態(tài)，然后通過(guò)無(wú)輻射躍遷返回到第一電子激發(fā)態(tài)單線態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)上，再?gòu)脑撃芗?jí)降落 至基態(tài)的各個(gè)不同的振動(dòng)能級(jí)上，同時(shí)釋放出相應(yīng)能量的分子熒光，最后以無(wú)輻射躍遷形式回到基態(tài)的 最低振動(dòng)能級(jí)。二、常見的染料種類熒光素類染料： FITC （異硫氰酸熒光素） FAM （羥基熒光素） TET （絲氯熒光素） 羅丹明類： R101 RB200 TAMRA菁染料：噻唑橙（ TO） 惡唑橙（ YO） 其他類：二苯乙烯、萘酰亞胺、香豆素類、

2、吖啶芘類三、分析化學(xué)藥物分子相關(guān)的期刊名稱Springer 、 Chemical Reviews 、Talanta 、Organic Letters 、dyes and pigments體內(nèi)藥物分析一、生物樣品處理方法以及特點(diǎn)【生物樣品的特點(diǎn)】 樣品珍貴，濃度低、量少；來(lái)源廣泛、組成復(fù)雜、基質(zhì)復(fù)雜；樣品脆弱，容易失活；提純步驟繁瑣?！旧飿悠诽幚矸椒ā坎环€(wěn)定樣品的預(yù)處理（氧化 水解）（1）易被氧化藥物：a.樣品中加入抗氧劑（VitC+EDTA、半胱氨酸、2-巰基乙醇）b.將不穩(wěn)定的藥物轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的衍生物（ 2）易水解藥物預(yù)處理：酯酶抑制劑常規(guī)方法：（1）蛋白質(zhì)沉淀法：加入甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑，

3、同時(shí)采用超速離心機(jī)；加入中性鹽沉淀；（ 2）超濾法：操作條件溫和，沒有相態(tài)變化，能量消耗小，破壞有效成分可能小需要血量少（3）液液萃取法：一次提取可取出大量雜質(zhì)，根據(jù)不同的有機(jī)溶劑，可具有高選擇性（4）SPE （固相萃取技術(shù)）特點(diǎn)：基質(zhì)效應(yīng)小（ 5）直接進(jìn)樣技術(shù)與柱切換技術(shù)在線處理和分離（樣品處理柱和樣品分析柱）（ 6）衍生化 可以提高穩(wěn)定性 檢測(cè)特性等問(wèn)題（ 7）離子交換樹脂：具有高選擇性，但較麻煩適用于高極性，可電離的物質(zhì)。（ 8）其他（頂空 GC 、制備 HPLC 、微透析技術(shù)）二、體內(nèi)藥物分析評(píng)價(jià)指標(biāo)、合格標(biāo)準(zhǔn)方法特異性： 特異性是指樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法專一的測(cè)定分析物

4、的能力，注意在 待測(cè)物出峰位置，空白基質(zhì)應(yīng)無(wú)干擾標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍：定量范圍應(yīng)查文獻(xiàn)， 結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定； 至少 6 個(gè)點(diǎn) 線性大于 0.99 每個(gè)濃度 點(diǎn)和加入濃度的差異， L20% 其他15%方法定量限 LOQ ：滿足 35個(gè)消除半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度或能檢測(cè)出 Cmax 的 1/1020時(shí)的藥物 濃度精密度與準(zhǔn)確度；三個(gè)濃度點(diǎn)每個(gè)濃度點(diǎn)五份樣批內(nèi)批間精密度低 20%中高15% 準(zhǔn)確度不單獨(dú)考察提取回收率； 中低 3 個(gè)濃度（ 80%、 100%、 120%）的提取回收率 ,其結(jié)果應(yīng)當(dāng) 精密和可重現(xiàn) . 應(yīng)考察高中低三個(gè)濃度的提取回收率 = 樣品處理過(guò)程后 /純標(biāo)準(zhǔn)品 * 100%介質(zhì)

5、效應(yīng)（ ME ）；用 LC-MS 測(cè)定樣品時(shí)，由于內(nèi)源性干擾物的存在，待測(cè)物在離子化過(guò)程中發(fā)生離子增強(qiáng)或離子抑制的作用 .使測(cè)物響應(yīng)值不穩(wěn)定在 85%-115% 范圍內(nèi)可認(rèn)為沒有介質(zhì)效應(yīng)措施：（1）選擇合適樣品前處理方法，LLE和SPE介質(zhì)效應(yīng)相對(duì)較少 （2）改變待測(cè)物的色譜分離條件，優(yōu)化色譜條件使內(nèi)源性物質(zhì)與待測(cè)物分開（3）采用小進(jìn)樣量（4）利用液相色譜電解質(zhì)效應(yīng)，加入有機(jī)酸或堿，促進(jìn)離子化（5）使用較低流速，降低了待測(cè)成分與基質(zhì)成分在離子源的競(jìng)爭(zhēng)（6）改用不同的離子源，考慮 APCI 和 APPA，ESI 對(duì)基質(zhì)的敏感性更高樣品穩(wěn)定性：室溫放置 8h 時(shí)間、反復(fù)凍融、長(zhǎng)期冰凍、進(jìn)樣器放置

6、89h三、代謝物研究的制備方法體外方法：肝微粒體溫孵法、肝細(xì)胞溫孵法、基因重組酶溫孵法、肝組織切片法、離體肝灌流法腸道 菌群體外溫孵法（甘草皂苷）體內(nèi)方法：膽汁 尿液 糞便 血液 其他（乳汁 肝勻漿等）蛋白質(zhì)組學(xué)一、蛋白質(zhì)組學(xué)的定義和特點(diǎn) 蛋白質(zhì)組學(xué)是指在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，翻譯后的修飾，蛋白與蛋 白相互作用等，由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細(xì)胞代謝等過(guò)程的整體而全面的認(rèn)識(shí)。 蛋白質(zhì)組學(xué)從蛋白質(zhì)的水平上，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量，動(dòng)態(tài)、整體的研究、闡明生物體全部蛋白質(zhì)，表達(dá) 模式及功能模式【特點(diǎn)】蛋白質(zhì)組學(xué)是動(dòng)態(tài)的，表現(xiàn)出多樣性。1從mRNA表達(dá)水平并不能預(yù)測(cè)蛋白

7、質(zhì)表達(dá)2）蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)修飾和加工并非必須來(lái)自同一基因序列3）蛋白質(zhì)組動(dòng)態(tài)反映生物系統(tǒng)所處的狀態(tài)4）蛋白質(zhì)組學(xué)較之前的基因組學(xué)對(duì)于生命現(xiàn)象的解釋更直接、更準(zhǔn)確。二、蛋白質(zhì)組學(xué)的定量方法利用熒光染料進(jìn)行定量的蛋白質(zhì)組分析技術(shù)。適用于檢測(cè)蛋自質(zhì)的熒光染料有兩類 :1）用于蛋白質(zhì)熒光染色，如 Sypro Ruby 和 RuBS2）用于蛋白質(zhì)的熒光標(biāo)記，如 Cy2,Cy3和Cy5,可進(jìn)行熒光雙向差示凝膠電泳。2 運(yùn)用質(zhì)譜進(jìn)行定量的蛋白質(zhì)組分析技術(shù)：a 穩(wěn)定同位素代謝標(biāo)記技術(shù)b 同位素親和標(biāo)簽技術(shù)主要是使用一種稱為ICAT的化學(xué)試劑。其結(jié)構(gòu)由三部分組成：第一 親和標(biāo)簽（生物素），用來(lái)分離經(jīng)標(biāo) 記后的多肽；第

8、二 連接子，用來(lái)整合穩(wěn)定的同位素；第三 活性基團(tuán)，用來(lái)特異結(jié)合巰基。三、二維電泳第一相等電聚焦電泳分離 第二相按質(zhì)量分離固相PH梯度等電聚焦優(yōu)點(diǎn)：克服了載體兩性電解質(zhì)陽(yáng)極漂移，可精確設(shè)定PH準(zhǔn)備步驟：樣品準(zhǔn)備一一第一維固相PH梯度一一第二維SDS-PAG染色考馬斯亮藍(lán)一一圖像分析， 自動(dòng)掃描優(yōu)點(diǎn)：可分離10100 kD范圍內(nèi)蛋白質(zhì)；高靈敏度和高分辨率；便于計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像分析處理；與質(zhì)譜 分析匹配 缺點(diǎn)：極酸、極堿性蛋白質(zhì)，疏水性蛋白質(zhì)，極大蛋白質(zhì)、極小蛋白質(zhì)及低豐度蛋白質(zhì)用 此種技術(shù)難于有效分離。膠內(nèi)酶解過(guò)程費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，難于與質(zhì)譜聯(lián)用實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化創(chuàng)新藥物研發(fā)中的難點(diǎn)一、雜質(zhì)分析雜質(zhì)分類：無(wú)機(jī)雜質(zhì)

9、（試劑、配位體、催化劑、重金屬、其他金屬、無(wú)機(jī)鹽、活性炭） 、有機(jī)雜質(zhì)（起始 原料、副產(chǎn)物、中間體、降解產(chǎn)物、試劑、配位體、催化劑、幾何異構(gòu)立體異構(gòu)）殘留雜質(zhì)已鑒定雜質(zhì)：已確證了結(jié)構(gòu)特征的雜質(zhì) 特定雜質(zhì)：在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定雜質(zhì)并有自己限度標(biāo)準(zhǔn)的雜質(zhì)已鑒定或未鑒定 潛在雜質(zhì)：按照理論推測(cè)在生產(chǎn)或儲(chǔ)藏過(guò)程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)，實(shí)際生產(chǎn)中不一定存在雜質(zhì)譜：存在于藥品中的雜質(zhì)組成或模式雜質(zhì)譜分析的基本途徑：揮發(fā)性雜質(zhì)一一殘留溶劑一一HS-GC其他 GC-MS有機(jī)一一RP-HPLC 不同檢測(cè)器/梯度洗脫互補(bǔ)方法 HPEC or HPTLC or HPGPC無(wú)機(jī)雜質(zhì)ICP-MS or離子色譜二、手型（一）不同構(gòu)

10、型的立體異構(gòu)體生物活性不同 藥物的生物活性完全或主要由其中的一個(gè)對(duì)應(yīng)體產(chǎn)生s-萘普生 兩個(gè)對(duì)應(yīng)體具有完全相反的生物活性哌西那朵 個(gè)對(duì)映體有嚴(yán)重的毒副作用四咪唑 兩個(gè)對(duì)應(yīng)體的生物活性不同，但合并用藥有利奈必洛爾 兩個(gè)對(duì)應(yīng)體具有完全相同的生物活性普羅帕酮（二）手性藥物研究1原料藥制備工藝研究結(jié)構(gòu)確證選擇制劑的劑型、處方與工藝質(zhì)量研究制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)穩(wěn)定性研究（三）絕對(duì)構(gòu)型（或通過(guò)衍生物的構(gòu)型）確證方法1比旋度測(cè)定4.旋光色散（ORD） 手性柱色譜（Chiral HPLC/GC）5.圓二色譜（CD） 核磁共振6.單晶X-衍射（XRSD）三、限度報(bào)告限度：超出此限度的雜質(zhì)均應(yīng)在檢測(cè)報(bào)告中報(bào)告，并應(yīng)報(bào)告具體

11、的檢測(cè)數(shù)據(jù)。鑒定限度：超出此限度的雜質(zhì)均應(yīng)進(jìn)行定性分析，確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)質(zhì)控限度：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中一般允許的雜質(zhì)限度，如制訂限度高于此限度，則應(yīng)有充分的依據(jù) 原材料的雜質(zhì)限度最大 日計(jì)量報(bào)告 限度鑒定濃度質(zhì)控濃度2g0.03%0.05%0.05%報(bào)告限度最大 日劑小于等于1g大于1g量限度0.1%0.05%鑒定限 度最大 日劑量小于1mg1 10m g大于10mg2 g大于2g限度1.0% 或 5ug（取最小 值）0.5% 或 20ug（取 最小值）0.2% 或 2mg （取 最小值）0.10%質(zhì)控限 度最大日劑量小于10m10100mg大于100mg2g大于 等于2g限度1.0% 或 50ug（取最

12、小 值）0.5% 或200ug（取最 小值）0.2% 或 3mg （取 最小值）0.15%計(jì)算藥物分析模式識(shí)別識(shí)別出某個(gè)樣本與哪一類供模仿用的樣本相同或相似。即對(duì)表征事物或現(xiàn)象的各種形式的信 息（數(shù)值的，文字的，邏輯關(guān)系的）進(jìn)行處理與分析，以對(duì)其進(jìn)行描述、辨認(rèn)、分類和解釋，是信息科 學(xué)和人工智能的重要組成部分。借助數(shù)學(xué)的方法和計(jì)算機(jī)技術(shù)揭示事物或現(xiàn)象的隱含性質(zhì)和內(nèi)部規(guī)律。 基本功能是對(duì)樣本分類或辨別聚類：是研究“物以類聚”的一種統(tǒng)計(jì)方法，是數(shù)據(jù)挖掘、信息分析中的一個(gè)活躍研究領(lǐng)域。聚類分析 的目的在于辨別在某些特性上相似的事物，并按這些特性將樣本劃分成若干類（群）。同一類內(nèi)的事物具有高度的同質(zhì)性

13、，而不同類的事物則有高度的異質(zhì)性。聚類分析可歸屬為無(wú)監(jiān)督的模式識(shí)別方法。系統(tǒng)聚類法：先將n個(gè)樣本各自看成一類，然后規(guī)定樣本之間的距離和類與類之間的距離，開始各樣本 自成一類，這時(shí)類之間的距離與樣本之間的距離相同，然后選擇距離最小的兩類合并成新類，并計(jì)算該 新類與其他類之間的距離，接著再將距離最近的兩類合并，重復(fù)此過(guò)程，直至所有的樣本都聚成一類為 止。類與類之間的距離也有多種的定義方法，不同的定義方法就產(chǎn)生了不同的系統(tǒng)聚類方法；如最短距 離法、最長(zhǎng)距離法、中間距離法、重心類、平均法、利差平方和法、可變類平均法、可交法等；步驟基 本上是一樣的，不同是類與類之間的距離有不同的定義方法。主成分分析 通

14、過(guò)數(shù)學(xué)交換處理，從原始測(cè)量數(shù)據(jù)中抽提出能夠反映其內(nèi)在數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)和規(guī)律的新的綜合 變量，用以簡(jiǎn)化數(shù)據(jù)復(fù)雜性，描述樣本，建立簡(jiǎn)化數(shù)學(xué)模型，以便對(duì)原始數(shù)據(jù)的進(jìn)一步分析。映射技術(shù)：是將高維空間中的點(diǎn)集在最優(yōu)的意義下變換成為低維空間中點(diǎn)集的一種數(shù)學(xué)方法，即將較多 數(shù)變量（高維）變換為少數(shù)幾個(gè)變量（低維），而這些較少的新變量能夠最大限度地表征原多個(gè)變量的信 息。人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)：一種模仿生物神經(jīng)系統(tǒng)（BNN信息處理方式的技術(shù)。人腦中存在著由巨量神經(jīng)細(xì)胞結(jié)合 而成的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，它構(gòu)成了大腦信息處理的物質(zhì)基礎(chǔ)。生物神經(jīng)系統(tǒng)信息處理的特點(diǎn)：高度并行性；信息的處理和存儲(chǔ)合二為一并行處理：多進(jìn)程同時(shí)處理（以空間復(fù)雜性降低時(shí)

15、間復(fù)雜性串行處理：?jiǎn)芜M(jìn)程順序處理 名解：數(shù)學(xué)分離、聚類、特征、空間、主成分、降維方法、特征提取、類距離、類間距離 論述題：解釋、比較、綜合幾個(gè)方法距離公式（基本公式）MP神經(jīng)元輸入計(jì)算公式（基本公式）藥物基因組學(xué)一、列舉6類代表性基因多態(tài)性檢測(cè)技術(shù)基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR勺SNP檢測(cè)技術(shù)（熒光標(biāo)記）基于核酸入侵反應(yīng)的SNP檢測(cè)技術(shù)基于生物質(zhì)譜的SNP檢測(cè)技術(shù)（MALDI-TOF-MS基于基因芯片的SNP檢測(cè)技術(shù)基于生物發(fā)光焦測(cè)序的SNP檢測(cè)新一代大規(guī)模測(cè)序技術(shù)二、簡(jiǎn)述焦測(cè)序技術(shù)原理及其應(yīng)用四個(gè)酶 DNA Polymerase、ATP sulfurylase、Luciferase、Apyrase目

16、標(biāo)DNA單鏈與鏈霉素親和素相結(jié)合（此鏈霉親和素包裹在磁納米之外）借助各種分離技術(shù)（如磁場(chǎng)）經(jīng)多步操作將干擾物分離，使溶液中僅剩 DNA單鏈 利用聚合酶在引物后進(jìn)行合成，加入四種原料的其中一種（ATGC ）若可以發(fā)生互補(bǔ)配對(duì)，則聚合酶作 用時(shí)釋放焦磷酸4焦磷酸在硫酸化酶的作用下形成產(chǎn)物，再經(jīng)熒光素酶產(chǎn)生熒光1個(gè)當(dāng)量PP對(duì)應(yīng)一個(gè)當(dāng)量熒光，如此循環(huán)2.3直到整個(gè)測(cè)序完畢5.若NTP與DNA不反應(yīng)，則會(huì)被降解酶降解以排除干擾應(yīng)用： 通過(guò)人工方式將一個(gè)或多個(gè)基因引入基因組 一一轉(zhuǎn)基因技術(shù)2序列標(biāo)簽、定量性能診斷21三體綜合癥、唐氏綜合癥診斷大腸癌，糞便中脫落細(xì)胞單細(xì)胞檢測(cè)芯片PCR :芯片表面將單細(xì)胞捕

17、獲三、概述抗凝藥物氯吡格雷的個(gè)體化給藥注意事項(xiàng)FDA對(duì)氯吡咯雷用藥的黑框警告：1使用氯吡咯雷前需檢查病人 CYP2C19基因多態(tài)性，主要檢測(cè) CYP2C19*2和*3位點(diǎn)CYP2C19*2和*3基因人群為慢代謝人群，氯吡咯雷前體藥物轉(zhuǎn)化速率慢，應(yīng)增加用藥劑量，從300mg/d 增加到6oomg/d在使用氯吡咯雷是需要避免使用 CYP2C19抑制性藥物，如奧美拉唑代謝組學(xué)代謝組：生物體內(nèi)參與物質(zhì)傳遞、能量代謝和信息傳導(dǎo)等代謝調(diào)控的全體小分子物質(zhì)。代謝組學(xué)：通過(guò)組群指標(biāo)分析，定量研究生物體在內(nèi)、外因素的遺傳變異、疾病侵襲、藥物干預(yù)、環(huán)境 變化等作用下，所含的內(nèi)源性小分子代謝物種類。數(shù)量變化的動(dòng)態(tài)規(guī)律及與生理、病理變化的關(guān)聯(lián)。