生物菌種凍干保存步驟了解一下

1、Word文檔 生物菌種凍干保存步驟了解一下 凍干機(jī)適用于大多數(shù)細(xì)菌、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母等的真空冷凍干燥保藏，但不適于霉菌的菌絲型、菇類、藻類和原蟲等。生物菌種凍干保存步驟，其操作流程如下： 1、安瓿管預(yù)備安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時(shí)，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗潔凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后、貼上標(biāo)簽，標(biāo)上菌號(hào)準(zhǔn)時(shí)間，加入脫脂棉塞后，121下高壓滅菌15-20分鐘，備用。2、愛護(hù)劑的選擇和預(yù)備愛護(hù)劑種類要依據(jù)微生物類別選擇。配制愛護(hù)劑時(shí)，應(yīng)留意其濃度及pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過濾滅菌；牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂，一般在100間歇

2、煮沸2-3次，每次10-30分鐘，備用。3、凍干樣品的預(yù)備在相宜的培育條件下將細(xì)胞培育至靜止期或成熟期，進(jìn)行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺(tái)聯(lián)合管理辦公室文件微生物菌種純度檢測(cè)技術(shù)規(guī)程(試行)，與愛護(hù)劑混合勻稱，分裝。微生物培育物濃度以細(xì)胞或孢子不少于108-1010個(gè)/ml為宜(以大腸桿菌為例，為了取得每毫升1010個(gè)活細(xì)胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采納較長(zhǎng)的毛細(xì)滴管，直接滴入安瓿管底部，留意不要濺污上部管壁，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，裝量為半個(gè)球部。若是液體培育的微生物，應(yīng)離心去除培育基，然后將培育物與愛護(hù)劑混勻，再分裝于安瓿管中。分裝

3、安瓿管時(shí)間盡量要短，在1-2小時(shí)內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍。分裝時(shí)應(yīng)留意在無菌條件下操作。4、預(yù)凍一般預(yù)凍2小時(shí)以上，溫度達(dá)到-20到-35左右。5、冷凍干燥采納凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機(jī)的干燥箱內(nèi)，開頭冷凍干燥，時(shí)間一般為8-20小時(shí)。終止干燥時(shí)間應(yīng)依據(jù)下列狀況推斷：安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀；真空度接近空載時(shí)的最-高值；樣品溫度與管外溫度接近；選用1-2支對(duì)比管，其水份與菌懸液同量，視為干燥完結(jié)；選用一個(gè)安瓿管，裝1-2%氯-化鈷，如變深蘭色，可視為干燥完結(jié)；冷凍干燥完畢后，取出樣品安瓿管置于干燥器內(nèi)，備用。6、真空封口及真空檢驗(yàn)將安瓿管頸部用強(qiáng)火焰拉細(xì)，然后采納真空泵抽真空，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采納高頻電火花真空測(cè)定儀測(cè)定真空度。7、保藏安瓿管應(yīng)低溫避光保藏