國家藥監(jiān)局高級研修院 核酸專題班 人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測試劑申報要求及常見問題解析申報要求及常見問題解析

1、人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測試劑申報要求及常見問題解析2016.11蘇州要點 適用范圍 綜述資料 主要原材料&生產(chǎn)工藝、反應(yīng)體系 分析性能評估&穩(wěn)定性評價 陽性判斷值 臨床試驗 產(chǎn)品技術(shù)要求&說明書-2-要點 適用范圍 綜述資料 主要原材料&生產(chǎn)工藝、反應(yīng)體系 分析性能評估&穩(wěn)定性評價 陽性判斷值 臨床試驗 產(chǎn)品技術(shù)要求&說明書-3-人乳頭瘤病毒， HPV 基因組：環(huán)狀雙鏈DNA，E區(qū)、L區(qū)、LCR； 傳播：宿主特異性，組織特異性； 感染：一過性和持續(xù)性； 分型：低危型和高危型。-4- HPV檢測的臨床意義 持續(xù)性的高危型HPV感染是導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的主要原因。全球范圍的研究結(jié)果顯

2、示，在99.7%的宮頸癌患者體內(nèi)檢測到高危型HPV DNA的存在，其中HPV16型、18型、45型和31型感染占80%。低危型HPV一般與尖銳濕疣或低度鱗狀上皮內(nèi)病變相關(guān)，極少引起浸潤癌。-5- HPV檢測的臨床意義 宮頸癌診斷與篩查策略 高危型HPV檢測與宮頸癌篩查高危型HPV檢測用于宮頸細(xì)胞學(xué)檢查異常患者的分流及宮頸癌篩查（包括聯(lián)合篩查和初篩），可有效地增加宮頸病變檢出率，提高細(xì)胞學(xué)檢查敏感性，并降低篩查頻率。-6- HPV檢測的臨床意義 高危型HPV檢測的其他用途：HPV核酸檢測陽性結(jié)果的分流：HPV基因分型（16、18）疫苗效果評價流行病學(xué)調(diào)查-7- 預(yù)期用途 ASC-US分流 與宮頸

3、細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合進行宮頸癌篩查 宮頸癌初篩 其他：病毒核酸檢測-8- 預(yù)期用途限定性要求 高危型界定：HPV基因型1618 26 31 33 35 39 45 51 52 53 56 58 59 66 68 73 82 要求：13型高風(fēng)險（+5型中度風(fēng)險）其他型別：提供依據(jù)。-9- 預(yù)期用途限定性要求 基因分型的考慮 對HPV陽性結(jié)果的分流（如16、18型）驗證臨床意義 用于流行病學(xué)調(diào)查、疫苗評價、科學(xué)研究不建議盲目擴大分型范圍-10- 預(yù)期用途方法學(xué) PCR-熒光探針法 雜交捕獲法 PCR-雜交法 其他：酶切信號放大法等。-11-要點 適用范圍 綜述資料 主要原材料&生產(chǎn)工藝、反應(yīng)體系 分析性

4、能評估&穩(wěn)定性評價 陽性判斷值 臨床試驗 產(chǎn)品技術(shù)要求&說明書-12- 綜述資料 有關(guān)臨床適應(yīng)癥背景情況的描述 生物安全性 同類產(chǎn)品比較-13-要點 適用范圍 綜述資料 主要原材料&生產(chǎn)工藝、反應(yīng)體系 分析性能評估&穩(wěn)定性評價 陽性判斷值 臨床試驗 產(chǎn)品技術(shù)要求&說明書-14- 主要原材料研究資料 主要原材料 引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分 要求：篩選、來源、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)-15- 主要原材料研究資料 企業(yè)參考品和對照品 原料選擇和制備 參考品/對照品設(shè)置：陽性/陰性參考品檢測限參考品精密度參考品陽性/陰性對照品 定值資料-16- 生產(chǎn)工藝&反應(yīng)體系研究資料 生產(chǎn)工藝 反應(yīng)原理

5、反應(yīng)體系： 樣本采集設(shè)備及保存液 核酸分離/純化試劑（方法） 樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、質(zhì)控方法等-17-要點 適用范圍 綜述資料 主要原材料&生產(chǎn)工藝、反應(yīng)體系 分析性能評估&穩(wěn)定性評價 陽性判斷值 臨床試驗 產(chǎn)品技術(shù)要求&說明書-18- 分析性能評估核酸分離/純化性能陽性/陰性參考品符合率最低檢測限交叉反應(yīng)干擾試驗精密度-19- 分析性能評估核酸分離/純化提取效率、提取核酸濃度等-20- 分析性能評估陽性檢出能力針對每種適用的HPV基因型分別驗證。-21- 分析性能評估最低檢測限針對每種適用的HPV基因型分別驗證最低可檢測水平。-22- 分析性能評估交叉反應(yīng)：原理評價：序列比對（被檢測

6、靶序列與人基因組及可能存在于人類泌尿、生殖道的微生物基因組之間）；試驗驗證：其他HPV基因型；人類生殖道寄生微生物或可經(jīng)性傳播的其他病原體；其他常見病原體；人類基因組DNA。-23- 分析性能評估交叉反應(yīng)： 樣品來源 病原體鑒定 濃度水平（滴度確定） 病原體種類：-24- 分析性能評估其他HPV型別單純皰疹病毒型梅毒螺旋體解脲支原體、人型支原體、生殖支原體（至少兩種）淋病奈瑟菌（淋球菌）白色念珠菌陰道毛滴蟲沙眼衣原體-25- 分析性能評估陰道棒狀桿菌、短小棒狀桿菌、鮑曼不動桿菌、恥垢分枝桿菌、脆弱類桿菌、陰溝腸桿菌、糞腸球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌；乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、

7、HIV、EB病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒I型。-26- 分析性能評估干擾試驗： 潛在最差條件； 代表性HPV基因型，至少在HPV臨界陽性水平； 干擾物質(zhì)：血紅蛋白、白細(xì)胞、宮頸粘液、陰道避孕藥物、女性衛(wèi)生用品、陰道用抗真菌藥物、陰道潤滑劑等。-27- 分析性能評估精密度 模擬樣本：所有基因型 臨床樣本-28- 分析性能評估樣本收集液：分別完成性能評估，如最低檢測限、精密度等。-29- 穩(wěn)定性 試劑穩(wěn)定性：實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性等。 樣本穩(wěn)定性：樣本核酸提取液-30-要點 適用范圍 綜述資料 主要原材料&生產(chǎn)工藝、反應(yīng)體系 分析性能評估&穩(wěn)定性評價 陽性判斷

8、值 臨床試驗 產(chǎn)品技術(shù)要求&說明書-31- 陽性判斷值 必須注意到：HPV感染在女性中是廣泛存在的，且多為自限性，可自主清除。能夠準(zhǔn)確檢測高危型HPV核酸夠用于宮頸癌篩查-32- 陽性判斷值需設(shè)定合理的陽性判斷值，以盡可能地鑒別可導(dǎo)致CIN的HPV感染和一過性感染，從而科學(xué)地評價受試者罹患宮頸癌的風(fēng)險，避免因大量假陽性帶來的不必要的檢查和處置。-33- 陽性判斷值 樣本入組標(biāo)準(zhǔn) 試驗方案：ROC曲線-34-要點 適用范圍 綜述資料 主要原材料&生產(chǎn)工藝、反應(yīng)體系 分析性能評估&穩(wěn)定性評價 陽性判斷值 臨床試驗 產(chǎn)品技術(shù)要求&說明書-35- 臨床試驗 理想的宮頸癌篩查策略，關(guān)鍵在于鑒別宮頸癌相關(guān)

9、的HPV感染，避免一過性HPV感染的檢出，從而避免過多的陰道鏡檢查帶來的額外傷害。 臨床試驗重點關(guān)注：HPV檢測對于宮頸癌發(fā)生風(fēng)險的評價能力。-36- 參考文獻-宮頸癌篩查指南-37- 臨床試驗臨床試驗除應(yīng)包括HPV病原體檢測準(zhǔn)確性的評價外，還需完成前瞻性臨床試驗。-38- 臨床試驗 HPV核酸檢測準(zhǔn)確性驗證 針對具體預(yù)期用途的臨床有效性驗證 ASC-US分流 與宮頸細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合進行宮頸癌篩查 宮頸癌初篩-39- 臨床試驗 HPV核酸檢測準(zhǔn)確性驗證比較研究試驗-40- 臨床試驗對比方法：同類產(chǎn)品和/或核酸序列測定方法病例選擇：各種臨床表現(xiàn)的人群（NILM、ASC-US、CIN、宮頸浸潤癌等）

10、受試者年齡：30、3039、40歲以上-41- 臨床試驗樣本例數(shù)：總例數(shù)不少于500例。（基因分型試劑）每種HPV基因型均應(yīng)具有一定的陽性例數(shù)。不同的樣本采集方式：同源樣本的比較研究試驗，2家以上（含兩家）臨床試驗機構(gòu)，樣本例數(shù)不少于100例。-42- 臨床試驗統(tǒng)計學(xué)分析對比方法/測序陽性 陰性擬申報產(chǎn)品總計陽性可檢測到陰性不可檢測到總計基因分型檢測試劑：不同基因型分別統(tǒng)計-43- 臨床試驗 針對具體預(yù)期用途的臨床有效性驗證-44- 臨床試驗ASC-US人群分流用途ASC-US人群 HPV檢測 陰道鏡檢查（必要時結(jié)合病理）-45- 臨床試驗ASC-US人群分流用途 臨床試驗終點病理學(xué)檢查結(jié)果C

11、IN2的例數(shù)應(yīng)不少于60例。 針對CIN2、CIN3分別進行臨床性能評價。-46- 臨床試驗ASC-US人群分流用途在ASC-US人群中HPV核酸檢測結(jié)果與疾病狀態(tài)相關(guān)性HPV檢測結(jié)果組織病理學(xué)結(jié)果正常 CIN1 CIN2合計陰道鏡陰性（無病理檢查）CIN3HPV陽性A1A2 A3A4A5A1+A2+A3+A4+A5HPV陰性 B1 B2 B3 B4 B5合計 A1+B1 A2+B2 A3+B3 A4+B4 A5+B5B1+B2+B3+B4+B5N-47- 臨床試驗ASC-US人群分流用途 評價指標(biāo)：臨床靈敏度臨床特異性陽性/陰性預(yù)期值陽性/陰性似然比發(fā)病率（陽性率）-48- 臨床試驗宮頸癌聯(lián)

12、合篩查用途CIN2CIN2HPV16/18+ 陰道鏡/病理NILM ASC-US隨訪/年HPV+HPV-隨訪終點細(xì)胞學(xué)正常隨訪/3年&終點-49- 臨床試驗 宮頸癌聯(lián)合篩查用途 CIN2為判定標(biāo)準(zhǔn)，終點陽性例數(shù)不少于60例。 隨訪時間建議至少持續(xù)三年。-50- 臨床試驗 宮頸癌聯(lián)合篩查用途 評價指標(biāo)：相對風(fēng)險值: HPV+ vs. HPV-分型HPV+ vs. 其他HPV+分型HPV+ vs. HPV-其他HPV+ vs. HPV-絕對風(fēng)險值: HPV-51- 臨床試驗 宮頸癌初篩用途 入組人群：常規(guī)篩查人群 基礎(chǔ)檢查：HPV&細(xì)胞學(xué)檢查-52- 臨床試驗 宮頸癌初篩用途 隨訪方案：HPV16

13、/18+，HPV+&ASCUS 陰道鏡/病理其他 HPV+ASCUSHPV-&細(xì)胞學(xué)陰性隨訪/年隨訪/年隨訪/3年&終點隨訪-53- 臨床試驗 宮頸癌初篩用途 隨訪時間：至少持續(xù)三年 30歲以下人群需單獨統(tǒng)計 評價指標(biāo)（增加）：相對風(fēng)險值：NILM vs. HPV-54-要點 適用范圍 綜述資料 主要原材料&生產(chǎn)工藝、反應(yīng)體系 分析性能評估&穩(wěn)定性評價 陽性判斷值 臨床試驗 產(chǎn)品技術(shù)要求&說明書-55- 產(chǎn)品技術(shù)要求與注冊檢驗 參考品設(shè)置（關(guān)注國家參考品更新） 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1226-2014-56- 產(chǎn)品說明書【預(yù)期用途】該產(chǎn)品用于體外定性檢測女性宮頸樣本（如宮頸脫落上皮細(xì)胞或分泌物等）

14、中高危型人乳頭瘤病毒（HPV）（列出具體能夠檢測的基因型）核酸（明確檢測靶物質(zhì)，如DNA、RNA）。明確該產(chǎn)品是否能夠鑒別HPV基因型。-57- 產(chǎn)品說明書【預(yù)期用途】篩查宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為ASC-US（意義未確定的非典型鱗狀上皮細(xì)胞）結(jié)果的患者，以確定是否需要進行陰道鏡檢查；-58- 產(chǎn)品說明書【預(yù)期用途】對于30歲及以上的女性，通過檢測是否有高危型HPV感染，與宮頸細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合進行宮頸癌篩查，此檢測結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險因素的評估、以及臨床診療和篩查指南的要求，用于指導(dǎo)患者的管理；-59- 產(chǎn)品說明書【預(yù)期用途】對于某年齡段（根據(jù)臨床試驗結(jié)果而定）女性，通過檢測是否有高危型HPV感染，進

15、行宮頸癌篩查，此檢測結(jié)合細(xì)胞學(xué)病史和其他風(fēng)險因素的評估、以及臨床診療和篩查指南的要求，用于指導(dǎo)患者的管理。-60- 產(chǎn)品說明書【預(yù)期用途】未做相關(guān)臨床試驗的產(chǎn)品應(yīng)在此項下聲明：由于未做相關(guān)驗證，本產(chǎn)品不能用于相關(guān)臨床預(yù)期用途（按照如上項目描述）。由于未完成相關(guān)臨床試驗，本產(chǎn)品不得用于宮頸癌篩查相關(guān)的臨床用途。-61- 產(chǎn)品說明書【預(yù)期用途】強調(diào)：1）聯(lián)合篩查：此檢測不能獨立或優(yōu)先于宮頸細(xì)胞學(xué)檢查應(yīng)用，不推薦在任何年齡段的人群中單獨使用本檢測進行宮頸癌篩查；此方法不能代替宮頸細(xì)胞學(xué)檢查。-62- 產(chǎn)品說明書【預(yù)期用途】強調(diào)：2）年齡30歲的女性中，HPV感染率很高，同時自主清除率也很高，因此對這部分人群，如宮頸細(xì)胞學(xué)檢查正常則不應(yīng)再采用HPV檢測進行聯(lián)合篩查，建議僅采用宮頸細(xì)胞學(xué)方法進行篩查，或參照上述宮頸癌初篩用HPV試劑進行篩查。-63- 產(chǎn)品說明書【預(yù)期用途】強調(diào)：3）本試劑檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合宮頸細(xì)胞學(xué)檢查及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進行綜合分析，不得單獨作為患者管理的依據(jù)。4） HPV核酸