醫(yī)學(xué)專題試驗(yàn)-腦脊液檢驗(yàn)

1、腦脊液檢驗(yàn)12021/7/19 星期一實(shí)驗(yàn)一 腦脊液理學(xué)檢查（目的） 掌握腦脊液理學(xué)檢查的內(nèi)容，方法。（標(biāo)本） 新鮮腦脊液。（操作）1觀察顏色 肉眼觀察腦脊液顏色變化，分別以無(wú)色，乳白色，紅色，棕色，或黑色，綠色等文字如實(shí)描述報(bào)告。22021/7/19 星期一2觀察透明度 肉眼觀察腦脊液透明度變化。正常腦脊液清晰透明，病理情況下可出現(xiàn)不同程度渾濁，可分別以“清晰透明”。“微渾”，“渾濁”等如實(shí)報(bào)告。3觀察凝塊或薄膜 輕輕傾斜試管，肉眼仔細(xì)觀察有無(wú)凝塊或薄膜。正常腦脊液無(wú)凝塊或薄膜，腦膜炎時(shí)可形成凝塊或薄膜，分別以“無(wú)凝塊”，“有凝塊”，“有薄膜”等如實(shí)報(bào)告。32021/7/19 星期一（注意事

2、項(xiàng)） 當(dāng)標(biāo)本顏色或透明度改變不明顯時(shí)，應(yīng)在燈光下以白色或黑色為背景仔細(xì)觀察，同時(shí)觀察有無(wú)凝塊。 懷疑為結(jié)核性腦膜炎時(shí)，標(biāo)本應(yīng)在24環(huán)境中靜置1224h再觀察腦脊液表面有無(wú)薄膜形成。參考值 ：無(wú)色，清晰透明，放置后無(wú)凝塊或薄膜形成。42021/7/19 星期一實(shí)驗(yàn)二 腦脊液顯微鏡檢查（目的）掌握腦脊液顯微鏡檢查的內(nèi)容，方法。（器材） 顯微鏡，改良牛鮑計(jì)數(shù)板，微量吸管?？潭任?，小試管。（試劑） 生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液，冰乙酸，白細(xì)胞稀釋液，瑞氏染液或瑞吉染液。（標(biāo)本）新鮮腦脊液。52021/7/19 星期一（操作） 細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)直接計(jì)數(shù)法（適用于清晰透明或微渾腦脊液）充池：微量吸管吸取混勻的腦脊

3、液，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的上下2個(gè)計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)：靜置23min，低倍鏡下計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共10個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。計(jì)算：10個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)即為每微升腦脊液細(xì)胞總數(shù)，再換算62021/7/19 星期一稀釋計(jì)數(shù)法（適用于渾濁的腦脊液）稀釋：如標(biāo)本細(xì)胞過(guò)多，可根據(jù)標(biāo)本內(nèi)細(xì)胞多少，用生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行一定倍數(shù)稀釋。充池：用微量吸管吸取混勻后的稀釋腦脊液充入1個(gè)計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)：靜置23后，低倍鏡計(jì)數(shù)1個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共5個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。計(jì)算：根據(jù)5個(gè)大方格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)及稀釋倍數(shù)，計(jì)算每升腦脊液的細(xì)胞總數(shù)。72021/7/19 星期一白細(xì)胞計(jì)數(shù)直接計(jì)數(shù)法（非血性清

4、晰透明或微渾腦脊液）除去紅細(xì)胞：在小試管內(nèi)加入冰乙酸12滴，轉(zhuǎn)動(dòng)試管，使內(nèi)壁粘附少許冰乙酸后傾去，滴加混勻的腦脊液34滴，混勻，放置數(shù)分鐘，使紅細(xì)胞破壞。充池：計(jì)數(shù)：計(jì)算：82021/7/19 星期一稀釋計(jì)數(shù)法（渾濁腦脊液）稀釋破壞紅細(xì)胞：根據(jù)標(biāo)本內(nèi)白細(xì)胞多少情況，用白細(xì)胞稀釋液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行一定倍數(shù)的稀釋，混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細(xì)胞。充池：用微量吸管吸取混勻稀釋后的腦脊液充入1個(gè)計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)：靜置23min后，低倍鏡計(jì)數(shù)1個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)的四角和中央大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。計(jì)算：根據(jù)5個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)和稀釋倍數(shù)，計(jì)算每升腦脊液的白細(xì)胞總數(shù) 92021/7/19 星期一白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)直接分類法 白細(xì)

5、胞計(jì)數(shù)后，轉(zhuǎn)換高倍鏡，根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)和細(xì)胞核形態(tài)進(jìn)行直接分類，共計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞（包括內(nèi)皮細(xì)胞），分別計(jì)數(shù)單（個(gè)）核細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞）和多（個(gè)）核細(xì)胞（粒細(xì)胞系）的數(shù)量，結(jié)果以單核細(xì)胞百分比和多核細(xì)胞百分比報(bào)告。如白細(xì)胞不足100個(gè)，可直接寫出單核細(xì)胞和多核細(xì)胞具體數(shù)，若白細(xì)胞數(shù)不足30個(gè)，可不做直接計(jì)數(shù)而改用涂片染色分類計(jì)數(shù)102021/7/19 星期一涂片染色分類法 若直接分類不易區(qū)別細(xì)胞時(shí)，可將腦脊液以1000r/min離心5min，取沉淀物，制成均勻薄片，置于室溫或37恒溫箱內(nèi)盡快干燥，瑞氏或瑞吉染色后，油鏡下進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，結(jié)果報(bào)告與血液白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)報(bào)告方式相

6、同。若見激活型單核細(xì)胞（比普通單核細(xì)胞大，胞質(zhì)邊緣趁、呈花邊狀，胞質(zhì)內(nèi)有空泡），轉(zhuǎn)化型淋巴細(xì)胞（形態(tài)似異型淋巴細(xì)胞）及室管膜細(xì)胞（形態(tài)似大淋巴細(xì)胞）應(yīng)計(jì)入分類的百分比中 112021/7/19 星期一（注意事項(xiàng)）直接白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，也可用微量吸管吸取冰乙酸后盡可能全部吹出，僅使吸管內(nèi)壁粘附少許冰乙酸，再吸取少量混勻的腦脊液于吸管中，數(shù)分鐘后吸管內(nèi)紅細(xì)胞溶解，然后再充池計(jì)數(shù)。細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，如發(fā)現(xiàn)較多紅細(xì)胞有皺縮或腫脹等異?，F(xiàn)象，應(yīng)如實(shí)報(bào)告，以協(xié)助臨床醫(yī)生鑒別是陳舊性出血或新鮮出血。血性腦脊液中的白細(xì)胞必須校正后才有價(jià)值白細(xì)胞校正數(shù)=腦脊液白細(xì)胞未校正數(shù)腦脊液紅細(xì)胞數(shù)血液白細(xì)胞數(shù)/血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)122

7、021/7/19 星期一細(xì)胞涂片時(shí)，為了使細(xì)胞容易粘在玻片上，可取沉淀的細(xì)胞懸液2滴，加血清1滴，混勻后涂片。涂片染色分類時(shí)，如見內(nèi)皮細(xì)胞或異常細(xì)胞，則另行描述報(bào)告，必要時(shí)用巴氏或HE染色查找腫瘤細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板用0.75（V/V）乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免損壞計(jì)數(shù)板。132021/7/19 星期一方法學(xué)評(píng)價(jià)腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類目前一般任用手工顯微鏡法。白細(xì)胞直接分類法簡(jiǎn)單，快速，但屬粗略分類，其準(zhǔn)確性差，且細(xì)胞較小，初學(xué)者難把握，尤其是陳舊性標(biāo)本的細(xì)胞變形，分類更困難，誤差較大。涂片染色分類法分類詳細(xì)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，尤其是可以發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞。該法被推薦使用

8、，但其操作較復(fù)雜，費(fèi)時(shí)。142021/7/19 星期一血液分析儀也可進(jìn)行腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類，此法簡(jiǎn)單，快速，但標(biāo)本尤其是病理性，陳舊性標(biāo)本中的組織，細(xì)胞的碎片以及細(xì)胞變形等都可以影響細(xì)胞分類和計(jì)數(shù)，故結(jié)果重復(fù)性，可靠性有待進(jìn)一步探討。另外，蛋白質(zhì)含量高，尤其有凝塊的腦脊液標(biāo)本容易使儀器堵孔，故不推薦使用152021/7/19 星期一質(zhì)量控制標(biāo)本采集后應(yīng)在1h內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，若放置太久，細(xì)胞可能凝集成團(tuán)或破壞，影響計(jì)數(shù)結(jié)果。標(biāo)本必須混勻方可充池，否則影響計(jì)數(shù)結(jié)果因穿刺損傷血管，引起血性腦脊液，白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果必須校正，以剔除因出血而帶來(lái)的白細(xì)胞。細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)注意新型隱球菌與白細(xì)胞，紅細(xì)胞區(qū)

9、別162021/7/19 星期一白細(xì)胞計(jì)數(shù)直接法的試管或吸管中的冰乙酸要盡量去盡，否則結(jié)果偏低。若標(biāo)本陳舊，細(xì)胞變形時(shí)，白細(xì)胞直接分類法誤差大，推薦用涂片染色分類法分類計(jì)數(shù)。涂片染色分類計(jì)數(shù)時(shí)，離心速度不能太快，否則細(xì)胞形態(tài)受影響，有條件的單位可用玻片離心沉淀法，細(xì)胞室沉淀法等收集細(xì)胞。涂片固定時(shí)間不能太長(zhǎng)，更不能高溫固定，以免細(xì)胞皺縮。172021/7/19 星期一參考值腦脊液細(xì)胞總數(shù)：成人（010）106/L,兒童（015）106/L.無(wú)紅細(xì)胞，僅有少數(shù)白細(xì)胞，以單個(gè)核細(xì)胞為主，幾乎完全為淋巴細(xì)胞，偶爾內(nèi)皮細(xì)胞。182021/7/19 星期一實(shí)驗(yàn)三 腦脊液蛋白質(zhì)定性檢查目的） 掌握腦脊液蛋

10、白質(zhì)定性試驗(yàn)（潘迪試驗(yàn)）的方法。（原理）腦脊液中球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色渾濁或沉淀。（器材） 小試管，刻度吸管，尖滴管。（試劑） 飽和苯酚溶液：取苯酚10ml（有結(jié)晶時(shí)，先放入56水浴箱中加熱助溶），加蒸餾水至100ml，充分混勻，置入37溫箱中數(shù)小時(shí)，見底層有苯酚析出，取上層飽和苯酚溶液于棕色瓶中避光保存。（標(biāo)本）新鮮腦脊液。192021/7/19 星期一（操作）1加試劑 取試劑2ml于小試管中。2加標(biāo)本 用尖滴管垂直滴加腦脊液標(biāo)本12滴。3觀察結(jié)果 在黑暗背景下立即用肉眼觀察結(jié)果。4判斷結(jié)果（1）清晰透明，不呈現(xiàn)云霧狀為（一）。（2）呈微白霧狀，對(duì)光不易看見，黑色背景下

11、才能見到為（+）202021/7/19 星期一（3）灰白色云霧狀為（+）。（4）白色渾濁或白色薄云狀沉淀為（+）。（5）白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀為（+）。（6）立即形成白色凝塊為（+）。212021/7/19 星期一注意事項(xiàng)當(dāng)室溫在10以下時(shí)，應(yīng)將試劑保存在37溫箱中，否則飽和度降低，可致假陰性。試管內(nèi)徑以小為佳，一般為（13+-1）mm，加入試劑后立即觀察結(jié)果。標(biāo)本中如紅細(xì)胞過(guò)多，應(yīng)離心沉淀取上清液檢測(cè)222021/7/19 星期一質(zhì)量控制標(biāo)本因穿刺出血，有血清蛋白混入可引起假陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)中所用試管和滴管必須潔凈，否則易出現(xiàn)假陽(yáng)性。苯酚不純可引起假陽(yáng)性。室溫低于10，苯酚飽和度降低可引起加陰性。人工配置