定量檢驗(yàn)性能評(píng)價(jià)要求與實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)-中山市人民醫(yī)院

1、主要內(nèi)容定量檢驗(yàn)性能評(píng)價(jià)要求與實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)方法學(xué)評(píng)價(jià)有關(guān)概念與管理要求檢驗(yàn)程序及性能特征驗(yàn)證、確認(rèn)和評(píng)價(jià)管理要求中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院中 山 市 人 民 醫(yī) 院 方法學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方案精密度正確度張秀明可報(bào)告范圍靈敏度和檢出限E-mail:檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序的性能特征 檢驗(yàn)：確定一個(gè)特性的值或特征為目的的一組操作。 測量精密度（重復(fù)性、中間精密度） 測量正確度 定量檢驗(yàn)和定性檢驗(yàn)：通常將確定一個(gè)特性的值的檢驗(yàn)稱為定量檢驗(yàn)；確定一個(gè)特性的特征的檢驗(yàn)稱為定性檢驗(yàn)。 測量準(zhǔn)確度 測量不確定度 檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)程序：檢驗(yàn)方法是檢驗(yàn)過程中所用操作邏輯次序的一般性描述，而檢驗(yàn)程序是指根據(jù)一種或多種檢驗(yàn)原理及給定的檢

2、驗(yàn)方法對(duì)某一檢驗(yàn)項(xiàng)目所做的詳細(xì)描述。分析特異性（分析干擾）分析靈敏度 空白限、檢出限、功能靈敏度和定量檢出限 檢測系統(tǒng)：檢驗(yàn)程序與校準(zhǔn)品和分析儀器組成檢測系統(tǒng)，檢驗(yàn)程序的分析性能通過校準(zhǔn)品和分析儀器而實(shí)現(xiàn)，因此檢驗(yàn)程序的分析性能通常又稱檢測系統(tǒng)的分析性能。分析測量范圍和臨床可報(bào)告范圍診斷靈敏度和診斷特異性CNAS CL02:2012 檢驗(yàn)程序的選擇性能驗(yàn)證 首選檢驗(yàn)程序驗(yàn)證（verification）是通過提供客觀證據(jù)證明給定項(xiàng)目滿足規(guī)定的要求。體外診斷醫(yī)療器械使用說明中規(guī)定的程序 驗(yàn)證是對(duì)主要的性能特征進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用數(shù)據(jù)說明是否滿足廠商聲明或預(yù)期用途，適用于配套檢測系統(tǒng)，必須由實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立完成。

3、公認(rèn)/權(quán)威教科書、經(jīng)同行審議過的文章或雜志發(fā)表的程序國際公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)或指南中的程序國家、地區(qū)法規(guī)中規(guī)定的程序 定量檢驗(yàn)驗(yàn)證的性能指標(biāo)主要是精密度、正確度和可報(bào)告范圍，某些檢驗(yàn)項(xiàng)目還應(yīng)包括檢出限。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇預(yù)期用途經(jīng)過確認(rèn)的檢驗(yàn)程序。 每一檢驗(yàn)程序的規(guī)定要求（性能特征）應(yīng)與該檢驗(yàn)的預(yù)期用途相關(guān)（驗(yàn)證）。對(duì)于定性免疫學(xué)檢驗(yàn)來說主要是檢出限、符合率和CUT-OFF值。性能確認(rèn)方法學(xué)評(píng)價(jià) 確認(rèn)（validation）是通過提供客觀證據(jù)對(duì)特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。又稱方法學(xué)性能評(píng)價(jià)（evaluation ofperformance of methodology）是通過實(shí)驗(yàn)途徑評(píng)價(jià)測量方法

4、的技術(shù)性能指標(biāo)，并判斷其是否可接受。 適用于非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)或制定的方法、超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法和修改過的確認(rèn)方法。 目的：明確該測量方法是否具有足夠的技術(shù)性能來說明分析方法的可靠性，并確認(rèn)其是否滿足臨床使用的要求或驗(yàn)證是否達(dá)到廠家聲明的技術(shù)性能。 主要由廠商或方法的研究開發(fā)者完成。 性能確認(rèn)應(yīng)盡可能復(fù)蓋所有性能指標(biāo)，并通過客觀證據(jù)（以性能特征形式）證實(shí)滿足檢驗(yàn)預(yù)期用途的特定要求。檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證要求檢驗(yàn)程序性能確認(rèn)要求重復(fù)性試驗(yàn)精密度評(píng)價(jià)EP5或EP15EP9或EP15主要內(nèi)容方法學(xué)評(píng)價(jià)方案中間精密度方法學(xué)比對(duì)正確度評(píng)價(jià) 方法學(xué)評(píng)價(jià)有關(guān)概念與管理要求回收試驗(yàn)檢驗(yàn)程序及性能特征性能驗(yàn)

5、證、確認(rèn)和評(píng)價(jià)管理要求檢出限評(píng)價(jià)空白限、檢出限、定量限（EP17)配對(duì)差異實(shí)驗(yàn)方案 方法學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方案劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)方案EP7分析干擾評(píng)價(jià)用病人標(biāo)本作偏倚分析實(shí)驗(yàn)方案精密度正確度可報(bào)告范圍靈敏度和檢出限多項(xiàng)式線性評(píng)價(jià)方案（EP6）稀釋回收實(shí)驗(yàn)方案可報(bào)告范圍確定參考區(qū)間參考區(qū)間的建立轉(zhuǎn)移與驗(yàn)證（C28）精密度評(píng)價(jià)CLSI文件精密度實(shí)驗(yàn)基本要求試驗(yàn)樣品一定要穩(wěn)定，要嚴(yán)格控制凍融、混勻的操作。至少做正常和病理2個(gè)水平的精密度實(shí)驗(yàn)。EP05-A3 .Evaluation of precision of quantitativemeasurement procedures; approved guidel

6、ine-thirdedition. 2014盡可能在可報(bào)告范圍內(nèi)做高、中、低3個(gè)水平。EP5-A2：Evaluation of Precision Performance of ClinicalChemistry Devices; Approved Guideline-SecondEdition，2004若有可能應(yīng)盡可能選擇參考區(qū)間兩端和醫(yī)學(xué)決定水平處的濃度。實(shí)驗(yàn)樣品的分析物含量應(yīng)盡量與公司對(duì)檢測系統(tǒng)性能評(píng)估時(shí)采用的含量一致，便于比較。EP15-A2. User Verification of Performance for Precisionand Trueness ,2005實(shí)驗(yàn)時(shí)按廠商操

7、作規(guī)程要求做好校準(zhǔn)，并且一定要和實(shí)驗(yàn)樣品一起做質(zhì)量控制。EP15-A3. User verification of precision and estimation ofbias；approved guideline-third edition.2014精密度實(shí)驗(yàn)方法建議的精密度實(shí)驗(yàn)方法 傳統(tǒng)方法（確認(rèn)或驗(yàn)證）CLSI EP5-A2. Evaluation of precisionperformance of quantitative measurementmethods.2004.至少2個(gè)水平先進(jìn)行重復(fù)性驗(yàn)證，批內(nèi)重復(fù)測定20次，求均值、標(biāo)準(zhǔn)差和CV2220實(shí)驗(yàn)方案，主要適用于廠商和實(shí)驗(yàn)方法

8、的研究和開發(fā)者重復(fù)性符合要求，進(jìn)行室內(nèi)精密度驗(yàn)證，每天測定一次，連續(xù)20天120實(shí)驗(yàn)方案，可用于臨床實(shí)驗(yàn)室，反映的是室內(nèi)精密度常規(guī)質(zhì)控在控CLSI EP15-A2.User Verification ofperformance for precision and Trueness.2005.EP15-A2或EP15-A3（驗(yàn)證）適用于所有定量方法，尤其是發(fā)光項(xiàng)目，至少2個(gè)水平，每天重復(fù)3次（或5次），連續(xù)5天，計(jì)算批內(nèi)CV和室內(nèi)CV。35（EP15-A2）或55（EP15-A3）實(shí)驗(yàn)方案，主要用于驗(yàn)證廠商的性能，也可與質(zhì)量目標(biāo)進(jìn)行比較傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方案舉例批內(nèi)和日間檢測結(jié)果（mmol/L）控制品中水

9、平高水平實(shí)驗(yàn)周期批內(nèi)7.27.3天間7.4批內(nèi)天間 某實(shí)驗(yàn)室在自動(dòng)分析儀上作葡萄糖測定，使用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法試劑盒。為了解該葡萄糖檢測系統(tǒng)的精密度性能，選用某公司的人血清凍干控制品作為精密度評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)樣品。選擇中和高2個(gè)水平。對(duì)每一個(gè)水平的評(píng)價(jià)樣品分別做批內(nèi)和日間重復(fù)測定。批內(nèi)將評(píng)價(jià)樣品隨機(jī)插入到病人樣品中檢測，連做20次；日間是每天做l次評(píng)價(jià)樣品，累積20次結(jié)果。結(jié)果見下表：6.97.07.26.87.47.17.17.17.07.37.27.26.97.37.27.56.87.07.37.011.3 10.6 10.6 11.210.5 10.7 11.7 11.211.1 1

10、1.0 10.8 10.910.9 10.7 11.0 10.610.9 10.6 11.2 11.011.5 11.0 11.5 10.811.2 11.0 10.3 11.311.1 10.9 10.8 10.710.8 11.1 11.0 11.311.2 11.1 11.4 10.66.77.17.27.17.47.16.87.07.57.27.07.07.27.17.16.96.9檢測結(jié)果精密度實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果及性能判斷確定性能目標(biāo)（廠商聲明）熟悉儀器、操作者培訓(xùn)、樣品制備確定重復(fù)測定次數(shù)和實(shí)驗(yàn)周期EP15-A2精密度實(shí)驗(yàn)方案控制品水平中水平高水平實(shí)驗(yàn)周期批內(nèi)20天間20批內(nèi)天間20重復(fù)

11、次數(shù)（n）均值（mmol/L）20nxi7.090.167.140.2310.960.2611.000.35x 標(biāo)準(zhǔn)差（mmol/L）聯(lián)系廠商尋求幫助否樣品檢測：重復(fù)測定3次，連續(xù)5天記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(xi x)n 12變異系數(shù)（%）2.263.2210%2.343.23sCLIA允許誤差（TEa）計(jì)算批內(nèi)和總的不精密度計(jì)算驗(yàn)證值，并檢驗(yàn)大于 精密度的估計(jì)值是否小于驗(yàn)證值sCV 100%1/4TEa=2 1/3TEa=3 1/4TEa=2 1/3TEa=3.50% .33% .50% .33%2.26%2. 3.22%3. 2.34%2. 3.23%3.50% 33% 50% 33%符合要求 符合

12、要求 符合要求 符合要求x判斷指標(biāo)精密度的估計(jì)值與廠商聲明比較小于是驗(yàn)證了廠商聲明的精密度判斷結(jié)論EP15-A2實(shí)驗(yàn)方案舉例EP15-A2實(shí)驗(yàn)方案舉例1.0 總 2.0廠家聲明（標(biāo)準(zhǔn)差）： 批內(nèi)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理x x x x x實(shí)驗(yàn)方法：每天分析1個(gè)批次，每個(gè)濃度重復(fù)測定4次，連續(xù)5天。141.3計(jì)算總均值：x12345D實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：Dn計(jì)算批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差：xdi xd2s批內(nèi)d1 i1 0.61重復(fù)次數(shù) 第1批第2批138第3批143第4批143第5批142D(n 1)計(jì)算總的標(biāo)準(zhǔn)差：X1X2X3X4140140140139D139144143143(xd x)D 12n 1138144143141B

13、d 1 5.6688批內(nèi)B 2.44s總s2n137144143142EP15-A2實(shí)驗(yàn)方案舉例主要內(nèi)容 與廠商聲明的性能的比較方法學(xué)評(píng)價(jià)有關(guān)概念與管理要求s批內(nèi)(0.61) 批內(nèi)(1.00)批內(nèi)精密度：批內(nèi)精密度與廠商聲明的性能一致。室內(nèi)精密度：s (2.44) 總(2.00)總檢驗(yàn)程序及性能特征性能驗(yàn)證、確認(rèn)和評(píng)價(jià)管理要求計(jì)算驗(yàn)證值并與s總比較：方法學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方案(n 1)sn 12批內(nèi) (nB)2T 4.39n2B2精密度()s4批內(nèi) ()DD 1驗(yàn)證值：正確度2.0 11.14總C 3.19T：自由度；D：實(shí)驗(yàn)天數(shù)；n：重復(fù)測定次數(shù)；C：2分布值，查統(tǒng)計(jì)表獲得可報(bào)告范圍靈敏度和檢出限T

14、4.39s總 (2.44) 驗(yàn)證值(3.19)結(jié)論： 總精密度符合廠商聲明的性能。正確度評(píng)價(jià)CLSI文件正確度評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方法EP9-A3:Measurement procedure comparison andbias estimation using patient samples; approvedguideline- third edition. 2013EP9-A2：Method Comparison and Bias EstimationUsing Patient Samples; Approved Guideline -Second Edition，2002CLSI EP9-A2.M

15、ethod Comparison and Bias EstimationUsing Patient Samples,2002825方法學(xué)比對(duì)實(shí)驗(yàn)方案，主要適用于廠商和實(shí)驗(yàn)方法的研究和開發(fā)者CLSI EP15-A2.User Verification of performance forprecision and Trueness. 2005.EP15-A2：User Verification of Performance forPrecision and Trueness ,2005方法比對(duì)實(shí)驗(yàn)方案，主要用于驗(yàn)證廠商的性能，測量均值的偏差與可接受的性能標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，當(dāng)偏倚性能標(biāo)準(zhǔn)時(shí)應(yīng)計(jì)算偏倚的

16、驗(yàn)證值。EP15-A3. User verification of precision andestimation of bias；approved guideline-thirdedition.2014定值參考物質(zhì)檢測的回收實(shí)驗(yàn)簡單回收試驗(yàn)EP9-A2實(shí)驗(yàn)方案基本要求EP9-A2實(shí)驗(yàn)方案基本要求 盡可能使50%的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本分析物的含量不在參考區(qū)間內(nèi)，各個(gè)標(biāo)本分析物含量越寬越好 檢驗(yàn)人員有足夠的時(shí)間熟悉儀器的操作、維護(hù)與保養(yǎng) 檢驗(yàn)人員有足夠的時(shí)間熟悉評(píng)價(jià)方案不要使用對(duì)任一方法有干擾的標(biāo)本 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，保持實(shí)驗(yàn)方法和比較方法都處于良好的質(zhì)量控制之下每份標(biāo)本應(yīng)有足夠的量，以便使實(shí)驗(yàn)方法和比較方法都

17、能做雙份測定 試驗(yàn)方法和比較方法有足夠的數(shù)據(jù)確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有代表性將標(biāo)本按1、2、3、4、5、6、7、8順序 排列先測一遍，然后將順序倒過來做雙份第二次測定 每個(gè)標(biāo)本用試驗(yàn)方法和比較方法作重復(fù)測定 至少做40份病人標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)至少持續(xù)5天應(yīng)在2個(gè)小時(shí)內(nèi)兩種方法對(duì)同批標(biāo)本分別開始實(shí)驗(yàn)，最好使用當(dāng)天采集的標(biāo)本EP9-A3方案要求40份樣本，單次測量熟悉儀器，樣本制備，檢測EP9-A2方法學(xué)比對(duì)實(shí)驗(yàn)流程數(shù)據(jù)收集EP15-A2實(shí)驗(yàn)方案基本要求同一方法內(nèi)重復(fù)測定值的離群值檢驗(yàn)繪制Y-X散點(diǎn)圖和（Y-X）-X偏差圖若可能，刪除非線性點(diǎn)不好剩余的范圍是否足夠應(yīng)貯存收集的標(biāo)本直至有足夠的標(biāo)本量。目測線性檢查好是

18、否收集20份病人標(biāo)本，濃度覆蓋分析測量范圍。超過一個(gè)離群值用實(shí)驗(yàn)方法和比對(duì)方法分別檢測這20份標(biāo)本。通常每天測定5至7個(gè)，持續(xù)3至4天。目測方法間的離群值檢查少于一個(gè)離群值足夠分布范圍檢查r20.95調(diào)查調(diào)查r20.95是增加數(shù)據(jù)，延伸分布范圍否每種分析方法都應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)完成，如果是貯存的標(biāo)本應(yīng)在復(fù)融后1到2個(gè)小時(shí)內(nèi)測定完畢。計(jì)算回歸方程使用部分偏倚程序不好目測散點(diǎn)圖的一致性檢查使用線性回歸程序使用部分殘差程序每種方法都應(yīng)有質(zhì)控程序保障。任何一批因?yàn)橘|(zhì)控或操作困難而被拒絕，應(yīng)在問題糾正后重測該批標(biāo)本。計(jì)算平均和最大偏倚的估計(jì)值并與廠商聲明的性能或內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)比較EP15-A2兩種方法結(jié)果的比較數(shù)據(jù)

19、收集與處理熟悉儀器，樣本制備，檢測數(shù)據(jù)收集EP15-A2實(shí)驗(yàn)方案舉例實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表計(jì)算每個(gè)樣本兩種方法間結(jié)果的差值將數(shù)據(jù)分割成幾部分，每部分獨(dú)立計(jì)算平均偏倚實(shí)驗(yàn)方法 比較方法 bi bi b (bi b)2 %bi%b %b (%b %b)2ii繪制（Y-X）X偏倚或百分偏倚圖76127256771212621 3.5 12.25 1.30 3.663.5 12.25 4.96 2.606 8.5 72.25 2.29 4.6513.3966.7521.63檢查偏倚在檢測的濃度范圍內(nèi)是否一致一致否聯(lián)系廠商尋求幫助4計(jì)算兩種方法間的平均偏倚否29251.52.25 16.0013.642.051

20、86.024.21計(jì)算偏倚或百分偏倚的標(biāo)準(zhǔn)差213436求和20443196.5 42.25 4.41計(jì)算偏倚和偏倚百分比的驗(yàn)證限，并檢驗(yàn)估計(jì)偏倚或偏倚百分比是否在驗(yàn)證限內(nèi)與廠商聲明的性能或內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)比較小于52.56.253571.161.201.44大于5047.22346.08核實(shí)了廠商聲明的偏倚是假設(shè)一種血清葡萄糖測定方法的允許偏倚為2.00 mg/dL實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理 三、點(diǎn)畫偏倚和百分比偏倚圖一、計(jì)算每個(gè)標(biāo)本兩種方法間結(jié)果的差值偏倚(b ) 實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果 比較方法結(jié)果iii實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果i 比較方法結(jié)果百分偏倚(%bi ) i 100%比較方法結(jié)果i二、計(jì)算兩種方法的平均偏倚I

21、Ib%bii502047.2220b i1 2.5%b i1 2.36%nn實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理 五、偏倚與可接受性能標(biāo)準(zhǔn)的比較 四、計(jì)算偏倚和百分偏倚的標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算的偏倚b(2.50mg / ml) 性能指標(biāo) (2.00ng / ml)I(bi b)2357.0019tssb i1 4.33mg / ml 4.27%2.539 4.33n 1驗(yàn)正值 b 2.0 4.46mg / mln20I(%bi %b)2346.08b(2.50mg / ml) 驗(yàn)證值(4.46mg / ml)s%bi1n 119兩種方法的檢驗(yàn)結(jié)果一致EQA：135家實(shí)驗(yàn)室，血糖均值40，標(biāo)準(zhǔn)差1.73mg/dL定值參

22、考物質(zhì)檢測的回收實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)舉例定值參考物質(zhì)檢測回收實(shí)驗(yàn)記錄表有證參考物質(zhì)（CRMs）：已用參考方法或決定性方法定值，可從美國國家標(biāo)準(zhǔn)局（NIST）或其他國際組織認(rèn)可的提供者獲得。操作者 分析批 重復(fù)次數(shù)nxi x-0.7(xi x)2xi37日期3/20ZXMWWJWDMPJLWJY批1批1批1批1批1重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)1重復(fù)20.493839373836393838370.31.30.091.690.490.092.891.690.090.090.49從能力驗(yàn)證試驗(yàn)（PT）中獲得的參考物：如CAP和衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心能力驗(yàn)證試驗(yàn)中提供的調(diào)查品。3/213/223/

23、233/24-0.70.3廠商提供的正確度確認(rèn)物或質(zhì)控物。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃中使用的質(zhì)控物。由第三方提供的已用不同方法定值的物質(zhì)。-1.71.30.30.3-0.7可接受性判斷簡單回收試驗(yàn) 分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。 目的是測定比例系統(tǒng)誤差，以衡量候選方法的正確度。簡單回收試驗(yàn)簡單回收試驗(yàn)2. 回收率計(jì)算 1. 方法回收率為回收量除以分析樣品中純分析物的濃度，公式如下：Tt - TCC V00TV將被分析的純品標(biāo)準(zhǔn)液加入樣品中，成為分析樣品，原樣品加入同量的無分析物的溶液作基礎(chǔ)樣品，然后用試驗(yàn)方法分析，兩者測定結(jié)果的差值為回收量。回收率（ %）b 100C Tt：分析樣

24、品的測定結(jié)果Tb：基礎(chǔ)樣品的測定結(jié)果T T ：回收量C0：加入的純分析物的濃度V0：加入的純分析物的體積TV：總體積tbC：分析樣品中加入的純分析物的濃度（加入后濃度）理想的回收率應(yīng)為100%簡單回收試驗(yàn)注意事項(xiàng)主要內(nèi)容 方法學(xué)評(píng)價(jià)有關(guān)概念與管理要求準(zhǔn)確吸量，因?yàn)楸环治鑫锏睦碚撝凳歉鶕?jù)加入標(biāo)準(zhǔn)液體積及原樣品的體積計(jì)算所得，吸液量稍有不準(zhǔn)，就會(huì)影響結(jié)果；檢驗(yàn)程序及性能特征性能驗(yàn)證、確認(rèn)和評(píng)價(jià)管理要求樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)液后，總的濃度必須在方法的分析范圍內(nèi)，一般須加入高、中、低不同濃度做回收試驗(yàn)，計(jì)算平均回收率； 方法學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方案精密度加入標(biāo)準(zhǔn)液后，最好使試驗(yàn)樣品的被測濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平；正確度可報(bào)

25、告范圍靈敏度和檢出限加入標(biāo)準(zhǔn)液的體積一般在10%以內(nèi)。若稀釋過大，誤差將發(fā)生改變，甚至消失。EP6-A定量測量程序的線性評(píng)價(jià)可報(bào)告范圍可報(bào)告范圍包含兩種類型的范圍，即分析測量范圍（analytical measurement range，AMR）和臨床可報(bào)告范圍（clinical reportable range，CRR）。AMR：指對(duì)沒有進(jìn)行任何預(yù)處理，包括稀釋，濃縮等的標(biāo)本，分析方法能夠直接測定出的待測物的范圍。通常用EP6-A方案確定AMRCRR：是指對(duì)臨床診斷、治療有意義的待測物濃度范圍。此范圍如果超出了AMR，可將標(biāo)本通過稀釋、濃縮等預(yù)處理使待測物濃度處于分析測量范圍內(nèi)進(jìn)行測定。通常

26、用最大稀釋度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)確定CRR上限，下限為定量檢出限或功能靈敏度實(shí)驗(yàn)方法EP6-A多項(xiàng)式線性評(píng)價(jià)制備線性樣本：通常選擇一個(gè)高濃度樣本和一個(gè)零濃度（或極低濃度）樣本通過倍比稀釋獲得，從低濃度到高濃度依次為1號(hào)樣本、2號(hào)樣本，。10080 數(shù)據(jù)擬合濃度范圍覆蓋廠商聲明的線性范圍或分析測量范圍。文件要求驗(yàn)證廠商聲明不低于5個(gè)濃度的樣本，但在實(shí)際工作中選擇7個(gè)更方便，便于找出非線性部分的拐點(diǎn)。每個(gè)濃度重復(fù)測定不低于2次，以判斷方法的精密度是否符合要求。6040200判斷精密度判斷線性0246810樣本號(hào)二次多項(xiàng)式以樣本號(hào)（或已知值）為橫座標(biāo)，測定值的均值為縱座標(biāo)作圖，目測數(shù)據(jù)的分布情況。一次多項(xiàng)式三次

27、多項(xiàng)式利用多項(xiàng)式回歸方法進(jìn)行線性評(píng)價(jià)。多項(xiàng)式線性評(píng)價(jià)多項(xiàng)式線性評(píng)價(jià)精密度評(píng)價(jià) 數(shù)據(jù)擬合將一系列已知濃度的線性樣本進(jìn)行測定每個(gè)樣本至少重復(fù)測量2次，測定結(jié)果滿足精密度的要求，可繼續(xù)進(jìn)行線性評(píng)價(jià)將測定的數(shù)據(jù)擬合為一次多項(xiàng)式 Y=(a+bx)直線、二次多項(xiàng)式 Y=(a+bx+cx2) 、三次多項(xiàng)式 Y=(a+bx+cx2+dx3)數(shù)據(jù)精密度差，不給予線性評(píng)價(jià)判斷各項(xiàng)系數(shù)與0之間的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，求得臨床可接受的最佳擬合多項(xiàng)式多項(xiàng)式線性評(píng)價(jià)多項(xiàng)式線性評(píng)價(jià) 非線性的臨床意義判斷非線性的臨床意義判斷當(dāng)數(shù)據(jù)擬合的最適多項(xiàng)式為非線性且數(shù)據(jù)精密度符合要求時(shí)，則需估計(jì)非線性的程度，即判斷與直線的偏離程度，

28、用ADL表示。ADL 臨界值非線性程度無臨床意義非線性程度臨床不可接受應(yīng)用示例應(yīng)用示例 驗(yàn)證三碘甲狀原氨酸(T3)檢測的分析測量范圍標(biāo)本號(hào) 測量值1 測量值2均值0.492.1953.94差值D0.021234560.52.113.925.717.8610.000.482.283.955.837.8010.20確定實(shí)驗(yàn)室可接受的不精密度和非線性程度的允許誤差范圍分別為5.0和10.0。-0.17-0.03-0.120.06準(zhǔn)備高值（H）和低值（L）血清樣本各一份，按5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H和5H的關(guān)系配成六個(gè)等間距的稀釋濃度樣本，分別標(biāo)記為1、2、3、4、5和6。5

29、.777.83按隨機(jī)的順序，對(duì)每個(gè)稀釋濃度樣本重復(fù)測量兩次，記錄數(shù)據(jù)結(jié)果。10.10-0.20應(yīng)用示例應(yīng)用示例重復(fù)測量誤差:CVr=2.68%測量均值 預(yù)期值1 預(yù)期值3310.207% 差值42.240.05回歸分析結(jié)果:二次和三次多項(xiàng)式均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的非線性系數(shù)，由于三次多項(xiàng)式的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤較小，最適多項(xiàng)式為三次。0.492.20.2842.1924.10.4912.1933.9345.7857.81810.1030.0013.945.777.8310.1-0.166-0.223-0.0980.278-4.21-3.86-1.252.75系統(tǒng)誤差回歸標(biāo)準(zhǔn) 自由誤 度階別 系數(shù) 數(shù)值1st b

30、1 1.90t檢驗(yàn)6.0087.9169.8250.055 34.16 0.228102nd b2 0.073 0.009 7.880.0579-第一個(gè)點(diǎn)的線性偏倚超過方法學(xué)允許范圍3rd b20.0 0.019 -2.7052應(yīng)用示例應(yīng)用示例5045403512108線性評(píng)價(jià)差值圖3025201510564200481200-5123456T3測定均值(nmol/L)濃度倍數(shù)結(jié)論：該方法在實(shí)驗(yàn)所涉及的濃度范圍內(nèi)不成線性。應(yīng)用示例應(yīng)用示例 去掉第一個(gè)點(diǎn)后再分析測量均值2.20預(yù)期值1 預(yù)期值22 - 10.18% 差值8.38重復(fù)測量誤差:3.54，符合要求。多項(xiàng)式回歸分析:最適多項(xiàng)式為二次。

31、2.034.005.977.949.912.213.913.94-0.09-0.18-0.090.18-2.34-3.19-1.181.82系統(tǒng)誤差回歸標(biāo)準(zhǔn) 自由誤 度階別 系數(shù) 數(shù)值t檢驗(yàn)5.775.781st b11.970.063 31.040.201107.837.842nd b2 0.092 0.008 11.473rd b2 -0.027 0.061 -0.460.030910.1010.093rd b3 0.010 0.0051.980.0198線性偏倚（DL）全部符合要求應(yīng)用示例應(yīng)用示例VAR00002T3差值圖(2-6點(diǎn))1210.008.006.004.002.000.00

32、線性評(píng)價(jià)108差值圖640.002.004.006.008.0010.0012.00ObservedLinear-2.00-4.0020QuadraticCubic濃度(nmol/L)1234567得到縮小范圍的AMR：2.2-10.1nmol/LVAR00001確定CRR上限（最大稀釋度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)）主要內(nèi)容 已知值樣本：在AMR內(nèi)選擇高值樣本13份 制備實(shí)驗(yàn)樣本：按廠商推薦的最大稀釋度稀釋 上機(jī)實(shí)驗(yàn)：記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果（實(shí)測值）方法學(xué)評(píng)價(jià)有關(guān)概念與管理要求檢驗(yàn)程序及性能特征性能驗(yàn)證、確認(rèn)和評(píng)價(jià)管理要求 計(jì)算預(yù)期值：已知值/稀釋倍數(shù)方法學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方案 計(jì)算稀釋回收率：（實(shí)測值/預(yù)期值）100% 確定最大稀釋度：回收率在90%110%為合格精密度正確度可報(bào)告范圍分析靈敏度和檢出限 確定CRR上限：依據(jù)功能靈敏度、分析測量范圍及最大稀釋度確定臨床可報(bào)告范圍上限。分析靈敏度IUPAC規(guī)定的靈敏度和檢出限靈敏度：校準(zhǔn)曲線的斜率，即對(duì)于規(guī)定量的變化分析程序產(chǎn)生信號(hào)的變化。檢出限（LoD）：分析程序具有