中藥對(duì)乳酸桿菌與解脲脲原體臨床分離株的體外抑制實(shí)驗(yàn)研究

1、中藥對(duì)乳酸桿菌與解脲脲原體臨床別離株的體外抑制實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的測(cè)定7味中藥對(duì)解脲脲原體Uu臨床別離株及乳酸桿菌的影響。方法用微量稀釋法測(cè)定柴胡、蛇床子、苦參、黃連、槐花、野菊花、夏枯草對(duì)Uu臨床株的最小抑菌濃度I值以及體外抑制乳酸桿菌的抑菌圈直徑。結(jié)果黃連、夏枯草對(duì)Uu較高敏感，I90均為7.81g/l；蛇床子、槐花、野菊花中度敏感，I90為31.2562.5g/l；柴胡、苦參不敏感。黃連對(duì)乳酸桿菌的抑菌圈直徑為8，其它中藥均為0。紅霉素對(duì)Uu敏感率為29.41%，對(duì)乳酸桿菌抑菌圈直徑為22。結(jié)論7味中藥體外對(duì)Uu有不同程度的抑制作用，對(duì)乳酸桿菌無(wú)影響。紅霉素體外對(duì)Uu及乳酸桿菌均有抑制作

2、用。【關(guān)鍵詞】解脲脲原體;乳酸桿菌；中藥；最小抑菌濃度解脲脲原體Ureaplasaurealyti,Uu是泌尿生殖道感染的常見(jiàn)病原體之一，它不僅引起非淋球菌性尿道炎，還可引起泌尿生殖道多種疾病，如陰道炎、宮頸炎、盆腔炎、不孕不育等。目前西藥治療首選四環(huán)素類、喹諾酮類及大環(huán)內(nèi)酯類，但隨著耐藥株的增加，加之強(qiáng)效廣譜抗菌素反復(fù)應(yīng)用引起的副作用、菌群失調(diào)等，使本病治療面臨重重困難。本實(shí)驗(yàn)在原有的根底上，討論中藥體外對(duì)Uu與乳酸桿菌的作用，旨在為治療Uu感染找到更好的藥物。1材料與儀器1.1菌株來(lái)源17株Uu臨床別離株及干酪乳桿菌干酪亞種均來(lái)源于同濟(jì)醫(yī)院性病研究中心實(shí)驗(yàn)室。1.2藥物中草藥：柴胡、蛇床子

3、、苦參、黃連、槐花、野菊花、夏枯草水煎劑1g/l即每毫升相當(dāng)于1g生藥，由上海市中醫(yī)醫(yī)院制劑室制備。西藥：紅霉素批號(hào)050601(上海先鋒藥業(yè))，由同濟(jì)醫(yī)院性病研究中心實(shí)驗(yàn)室制備。2方法2.1中草藥煎劑制備方法分別稱取柴胡、黃連、夏枯草等7味藥材，參加500l水，浸泡1h，電爐煎煮，沸后30in，過(guò)濾，沉渣加水煎煮，再過(guò)濾，兩液混合，濃縮至11，離心取上清液，調(diào)整pH值至6.00.5，高壓滅菌10in，備用。2.2乳酸桿菌培養(yǎng)基制備方法參照凌代文1?乳酸細(xì)菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法?。2.3最小抑菌濃度I值測(cè)定方法微量稀釋法測(cè)定中草藥煎劑的I值：Uu培養(yǎng)及其U顏色改變單位測(cè)定按文獻(xiàn)RbertsnJA

4、,1982方法2，中草藥煎劑的I測(cè)定按文獻(xiàn)(KennyGE,1986)方法略加改良。2.4抑菌圈直徑測(cè)定方法瓊脂傾注法測(cè)定抑菌圈直徑，方法如下。3結(jié)果3.17味中草藥與紅霉素體外抗Uu的結(jié)果見(jiàn)表1。表17味中草藥與紅霉素對(duì)17株Uu臨床別離株的I值略中草藥對(duì)病原菌的I值，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，參照文獻(xiàn)3國(guó)內(nèi)同類實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)為判斷根據(jù)，以I90為根據(jù)，黃連與夏枯草對(duì)Uu為較高敏感，蛇床子、槐花、野菊花為中度敏感，柴胡、苦參不敏感。表2紅霉素對(duì)17株Uu臨床別離株體外抑制作用結(jié)果略“表示無(wú)抑制Uu株根據(jù)曹玉璞主編?支原體與支原體卜紅霉素抗Uu的I值1g/l時(shí)為敏感，本實(shí)驗(yàn)17株中，5株敏感，其敏感

5、率為29.41%。參照美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)NLS1995年制訂的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)紅霉素耐藥標(biāo)準(zhǔn)即I16g/l，斷定為耐藥臨床株4，本次實(shí)驗(yàn)有兩株為紅霉素耐藥株。3.27味中草藥與紅霉素體外抗乳酸桿菌的結(jié)果柴胡、蛇床子、槐花、苦參、夏枯草、野菊花隨著藥物濃度的增大對(duì)乳酸桿菌的抑菌圈直徑均為0。黃連在藥物濃度比擬小時(shí)對(duì)乳酸桿菌的抑菌圈直徑為0，當(dāng)藥物濃度增大到125g/l時(shí)，出現(xiàn)抑菌圈，直徑為8。紅霉素體外抑制乳酸桿菌的抑菌圈直徑見(jiàn)表3。表3紅霉素體外抑制乳酸桿菌的抑菌圈直徑略參照凌代文主編?乳酸細(xì)菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法?中常見(jiàn)抗菌素對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌標(biāo)準(zhǔn)菌株抑菌圈直徑的標(biāo)準(zhǔn)1，本實(shí)驗(yàn)紅霉素在15g含

6、量時(shí)，抑菌圈直徑為22，判斷紅霉素對(duì)乳酸桿菌中度敏感。4結(jié)論7味中藥體外對(duì)Uu有不同程度的抑制作用，對(duì)乳酸桿菌無(wú)影響。紅霉素體外對(duì)Uu及乳酸桿菌均有抑制作用。5分析與討論Uu感染在中醫(yī)古典醫(yī)籍中沒(méi)有明確記載，它所引起的女性生殖系統(tǒng)疾病屬于中醫(yī)“帶下“陰癢等范疇。隋巢元方5?諸病源候論?中記載：“婦人陰癢，是蟲(chóng)蝕所為。三蟲(chóng)九蟲(chóng)在腸胃之間，因臟虛蟲(chóng)動(dòng)作，食于陰，其蟲(chóng)作勢(shì)，微那么癢，重者乃痛?？梢?jiàn)古人雖分不出支原體、滴蟲(chóng)、霉菌等病原體，但已認(rèn)識(shí)到陰癢是蟲(chóng)蝕所為。Uu是泌尿生殖道感染的常見(jiàn)病原體之一，它不僅引起非淋球菌性尿道炎，還可引起泌尿生殖道多種疾玻目前，Uu的致病機(jī)制尚不清楚，可能與多種因素有關(guān)

7、，如宿主的抵抗力、菌群失調(diào)、Uu血清型別等。正常情況下，Uu寄生在人泌尿生殖道粘膜上，并不致病，當(dāng)陰道酸性環(huán)境遭到破壞，部分抵抗力下降時(shí)，即成為條件致病菌，導(dǎo)致生殖系統(tǒng)炎癥的發(fā)生。有資料6報(bào)道，乳酸桿菌作為正常菌占陰道所有微生物的95%，而陰道炎患者，乳酸桿菌僅占25%55%。Dinguez等7在實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)Uu在乳酸桿菌缺乏時(shí)更常見(jiàn)。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃連雖對(duì)乳酸桿菌有一定的影響，但對(duì)Uu也有較高敏感作用，是否與它藥配伍能增強(qiáng)黃連抗Uu作用，削弱對(duì)乳酸桿菌的影響，值得我們進(jìn)一步研究。夏枯草對(duì)Uu較高敏感，蛇床子、槐花、野菊花對(duì)Uu中度敏感，并且它們對(duì)乳酸桿菌的抑菌圈直徑為0，說(shuō)明它們不僅能

8、抑制Uu而且對(duì)乳酸桿菌無(wú)影響，為臨床治療Uu感染的較好藥物。柴胡、苦參體外對(duì)Uu不敏感，但對(duì)乳酸桿菌亦無(wú)影響，是否因?yàn)閷?duì)乳酸桿菌無(wú)影響，保持陰道正常的酸堿度，對(duì)Uu起到間接的抑制作用，還需深化研究。以上結(jié)果證明中藥不僅有抑制Uu的作用,而且能維持陰道內(nèi)正常的乳酸桿菌。分析原因可能為：中藥對(duì)乳酸桿菌無(wú)抑制作用，乳酸桿菌分解陰道粘膜上皮中貯存的糖元產(chǎn)生乳酸，維持陰道的正常酸性環(huán)境。而Uu最適宜在pH為6.06.5的環(huán)境中生長(zhǎng)，中藥通過(guò)維持陰道的正常酸性環(huán)境，從而破壞Uu的生存環(huán)境，對(duì)Uu起到很好的抑制作用。正常情況下，陰道內(nèi)的乳酸桿菌有序結(jié)實(shí)地黏附于陰道粘膜上皮，形成空間性的占位保護(hù)作用。中藥對(duì)這些乳酸桿菌沒(méi)有影響，維持了其在陰道上皮的定植抗力，從而阻止外來(lái)Uu的入侵。中藥本身含有抑制Uu的有效成分，加上不影響乳酸桿菌，起到扶正祛邪的作用。中藥不抑制乳酸桿菌，乳酸桿菌大量定植于陰道中，其營(yíng)養(yǎng)處于競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)狀態(tài)，那么Uu無(wú)足夠的營(yíng)養(yǎng)供給，不利于生長(zhǎng)。并且乳酸桿菌能產(chǎn)生多種抗微生物因子，有效地抑制其它細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖，調(diào)整著陰道的菌群失調(diào)，對(duì)Uu也起到很好的抑制作用。實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，西藥紅霉素體外抑制Uu的同時(shí)，