基因關(guān)鍵工程試題

1、名詞解釋問(wèn)題：Gene manipulation答案：基因操作。將在細(xì)胞外產(chǎn)生的核酸（物質(zhì)）分子插入到病毒，質(zhì)?；蚱渌d體系統(tǒng)中，再整合到特定的宿主中，從而形成一種新的可持續(xù)繁 殖的有機(jī)體。名詞解釋問(wèn)題：Interrupted genes參照答案：間斷基因。序列中間插入有與氨基酸編碼無(wú)關(guān)的DNA間隔區(qū)，使一種基因分隔成不持續(xù)的若干區(qū)段。我們稱這種編碼序列不持續(xù)的基由于間斷 基因。名詞解釋問(wèn)題：Promotor參照答案：?jiǎn)?dòng)子。DNA分子可以與RNA聚合酶特異結(jié)合的部位，也就是使轉(zhuǎn)錄開(kāi)始的部位。名詞解釋問(wèn)題：Subcloning參照答案：亞克隆。當(dāng)時(shí)始克隆中的外源DNA片段較長(zhǎng)，具有許多目的基因

2、以外的DNA片段時(shí)，在諸如體現(xiàn)、序列分析和突變等操作中不便進(jìn)行，將目 的基因所相應(yīng)的一小段DNA找出來(lái)，這個(gè)過(guò)程叫“亞克隆”。填空題問(wèn)題：基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克?。╣ene cloning）， gene cloning的基本要點(diǎn)有（），（）和（）。參照答案：克隆基因的類型；受體的選擇；載體的選擇填空題問(wèn)題：（）是遺傳物質(zhì)的基本單位，也是作為遺傳物質(zhì)的核酸分子上的一段片段。它可以是持續(xù)的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA ；可以 存在于染色體上，也可以（）參照答案：基因；持續(xù)；DNA；存在于染色體之外（如質(zhì)粒，噬菌體等）填空題問(wèn)題：基因操作并不是

3、一種法律概念，除了涉及基因克隆外，還涉及基因的（）、（）、（）和（）等與基因研究有關(guān)的內(nèi)容。參照答案：體現(xiàn)；調(diào)控；檢測(cè)；改造填空題問(wèn)題：?jiǎn)?dòng)子（Promotor）是指（）。一般一種Gene與否體現(xiàn)，（）是核心的一步，是起決定作用的。在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中,Promoter還是（）的結(jié)合 位點(diǎn)。參照答案：基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程中控制起始的部位；轉(zhuǎn)錄起始；RNA聚合酶填空題問(wèn)題：原核生物的RNA polymerase重要由兩部分構(gòu)成：（）和（），其中。-因子并不參與RNA的合成，它的作用重要是（）。參照答案：核心酶；。因子；辨認(rèn)要轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)填空題問(wèn)題：從（）到（）的這一段距離稱為一種轉(zhuǎn)錄單位，或者一種轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，其

4、中可涉及一種或者多種Gene 。參照答案：?jiǎn)?dòng)區(qū)；終結(jié)區(qū)填空題問(wèn)題：轉(zhuǎn)錄終結(jié)子重要有兩種，一種是（），另一種是（）。參照答案：依賴P因子；不依賴P因子填空題問(wèn)題：Gene的書(shū)寫(xiě)方式，一般是寫(xiě)出的DNA序列總是與（）相似的那條鏈，方向是從（）到（）。對(duì)于堿基的位置，一般自轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)向兩個(gè)方 向編號(hào)，其中轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)定為（），（）定為-1 。參照答案：mRNA； 5 ； 3 ； +1；在起始點(diǎn)上游第一種堿基填空題問(wèn)題：重疊基因（Overlapping gene）是指（），間隔基因（Interrupted gene）是指（）參照答案：一種基因的序列中，單個(gè)DNA序列可編碼一種以上的蛋白質(zhì)；在編碼序列中

5、間插入的一段無(wú)編碼作用的堿基序列簡(jiǎn)答題問(wèn)題：簡(jiǎn)述基因克隆的兩個(gè)基本特性？參照答案：基因克隆的兩個(gè)基本特性是一是強(qiáng)調(diào)外源核酸分子（一般狀況下都是DNA）在不同宿主中的繁殖，打破自然種的界線將來(lái)自于不有關(guān)物種的基因 放入一種宿主中是基因操作的一種重要特性，基因操作的另一種重要特性是繁殖。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：談?wù)勀銓?duì)gene的結(jié)識(shí)，并簡(jiǎn)要說(shuō)說(shuō)gene概念的發(fā)展?fàn)顩r？參照答案：可以體現(xiàn)和產(chǎn)生基因產(chǎn)物（Proteinor RNA）的DNA序列（可自由發(fā)揮，發(fā)展?fàn)顩r請(qǐng)查找有關(guān)資料）基因概念的發(fā)展：基因作為遺傳學(xué)中的專 用術(shù)語(yǔ)，其概念每發(fā)展一步都意味著遺傳學(xué)乃至整個(gè)生物學(xué)的一次革命和突破，其內(nèi)容的每次豐富和充實(shí)都凝

6、聚著生物學(xué)家們的滴滴心血?！盎颉备拍畹奶岢觯?遺傳學(xué)的奠基人孟德?tīng)栐?866年刊登的論文植物雜交實(shí)驗(yàn)指出生物每一種性狀都是通過(guò)遺傳因子來(lái)傳遞的，遺傳因子是某些獨(dú)立的遺傳單位。這樣把可 觀測(cè)的遺傳性狀和控制它的內(nèi)在的遺傳因子辨別開(kāi)來(lái)了，遺傳因子作為基因的雛形名詞誕生了。 1909年丹麥遺傳學(xué)家約翰遜在精密遺傳學(xué)原理一書(shū)中提 出“基因”概念，以此來(lái)替代孟德?tīng)柤俣ǖ摹斑z傳因子”。從此，可以體現(xiàn)和產(chǎn)生基因產(chǎn)物protein or RNA）的DNA序列（可自由發(fā)揮）“基因”一詞 始終隨著著遺傳學(xué)發(fā)展至今?；驑?gòu)造和功能的摸索：摩爾根和她的學(xué)生們運(yùn)用果蠅作了大量的潛心研究，1926年她的巨著基因論出版，

7、從而建立了出 名的基因?qū)W說(shuō)，初次完畢了當(dāng)時(shí)最新的基因概念的描述，即基因以直線形式排列，它決定著一種特定的性狀，并且能發(fā)生突變并隨著染色體同源節(jié)段的互換而互 換，它不僅是決定性狀的功能單位，并且是一種突變單位和互換單位。1941年比德?tīng)柡退啬诽岢鲆环N基因一種酶說(shuō)；1949年鮑林與合伙者在研究鐮刀 型細(xì)胞貧血癥時(shí)推論基因決定著多肽鏈的氨基酸順序；1944年艾弗里、麥卡蒂初次用實(shí)驗(yàn)明確證明：DNA是遺傳信息的載體；1952年赫爾希和蔡斯進(jìn) 一步證明遺傳物質(zhì)是DNA而不是蛋白質(zhì)；1953年美國(guó)分子生物學(xué)家沃森和英國(guó)分子生物學(xué)家克里克通力協(xié)作，根據(jù)X射線衍射分析，提出了出名 的DNA雙螺旋構(gòu)造模型，進(jìn)

8、一步闡明基因成分就是DNA ，它控制著蛋白質(zhì)的合成；1957年法國(guó)遺傳學(xué)家本滋爾以T4噬菌體作為研究材料分析了基 因內(nèi)部的精細(xì)構(gòu)造，提出了順?lè)醋訉W(xué)說(shuō)。這個(gè)學(xué)說(shuō)打破了過(guò)去有關(guān)基因是突變、重組、決定遺傳性狀的“三位一體”概念及基因是最小的不可分割的遺傳單位的 觀點(diǎn)，從而覺(jué)得基由于DNA分子上一段核昔酸序列，負(fù)責(zé)著遺傳信息的傳遞，一種基因內(nèi)部仍可劃分為若干個(gè)起作用的小單位，即可辨別成順?lè)醋?、突變子?重組子。一種作用子一般決定一種多肽鏈合成，一種基因涉及一種或幾種作用子。突變子指基因內(nèi)突變的最小單位，而重組子為最小的重組合單位，只涉及一對(duì) 核昔酸。所有這些均是基因概念的偉大突破。有關(guān)基因的本質(zhì)擬定后

9、，人們又把研究視線轉(zhuǎn)移到基因傳遞遺傳信息的過(guò)程上。1961年開(kāi)始，尼倫伯格和科拉 納等人逐漸弄清了基因以核昔酸三聯(lián)為一組編碼氨基酸，并在1967年破譯了所有64個(gè)遺傳密碼，這樣把核酸密碼和蛋白質(zhì)合成聯(lián)系起來(lái)。然后，沃森和 克里克等人提出的“中心法則”更加明確地揭示了生命活動(dòng)的基本過(guò)程。1970年特明以在勞斯肉瘤病毒內(nèi)發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶這一成就進(jìn)步發(fā)展和完善了 “中心法 則”，至此，遺傳信息傳遞的過(guò)程已較清晰地展示在人們的眼前。過(guò)去人們對(duì)基因的功能理解是單一的即作為蛋白質(zhì)合成的模板。1961年法國(guó)雅各布和莫諾 的研究成果，又大大擴(kuò)大了人們有關(guān)基因功能的視野。她們?cè)谘芯看竽c桿菌乳糖代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制中發(fā)現(xiàn)了

10、有些基因不起合成蛋白質(zhì)模板作用，只起調(diào)節(jié)或操縱作 用，提出了操縱子學(xué)說(shuō)。從此根據(jù)基因功能把基因分為構(gòu)造基因、調(diào)節(jié)基因和操縱基因。基因概念的進(jìn)一步發(fā)展：70年代后，基因的概念隨著多學(xué)科滲入和 實(shí)驗(yàn)手段日新月異又有突飛猛進(jìn)的發(fā)展，重要有如下幾種方面?；蚓咧丿B性、內(nèi)含子和外顯子、管家基因與奢侈基因和基因的游動(dòng)性。所有這些成果無(wú)疑給基 因概念中注入鮮活科學(xué)的內(nèi)容，協(xié)助人們揭開(kāi)層層面紗去更加全面理解基因的真面目。時(shí)代在發(fā)展，科學(xué)在進(jìn)步，基因概念的進(jìn)一步發(fā)展，必將對(duì)人類的文明進(jìn) 步產(chǎn)生強(qiáng)大的推動(dòng)作用。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：如何理解gene及其產(chǎn)物的共線性和非共線性？參照答案：基因決定蛋白質(zhì)的序列構(gòu)成，是由密碼子相

11、應(yīng)特定氨基酸所決定的。當(dāng)一種基因的核昔酸序列與其產(chǎn)物的氨基酸序列是一一相應(yīng)時(shí)，則表白它們是 共線性的。在原核生物中，基因及其產(chǎn)物是共線性的。70年代以來(lái)，在真核生物中，發(fā)現(xiàn)了間斷基因，后來(lái)發(fā)現(xiàn)這種間斷基因在真核生物中普遍存在，也就 是后來(lái)所說(shuō)的基因間存在著內(nèi)含子。內(nèi)含子指真核生物基因中不能被翻譯成蛋白質(zhì)的DNA片斷，但可被轉(zhuǎn)錄，當(dāng)兩側(cè)序列的轉(zhuǎn)錄RNA被剪接在一起時(shí)，就 將內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的RNA從整個(gè)轉(zhuǎn)錄物中除去。外顯子是指可以翻譯成蛋白質(zhì)的任一間斷的基因片段，一種基因可有多種外顯子。內(nèi)含子并不是一成不變的，具有 相對(duì)性，對(duì)一種DNA片斷來(lái)說(shuō)，在某個(gè)基因中是內(nèi)含子，但在另一種基因中卻可以作為外顯子。

12、您的答案：簡(jiǎn)答題問(wèn)題：什么是gene cloning ?什么是亞克隆(subcloning)?參照答案：基因克?。阂欢ㄏ薅壬系韧诨虻姆蛛x，即從復(fù)雜的生物體基因組中，通過(guò)酶切，消化等環(huán)節(jié)，分離帶有目的基因的DNA片段?；騺喛寺。?初步克隆中的外源片段往往較長(zhǎng)，具有許多目的基因片段以外的DNA片段，在諸如體現(xiàn)、序列分析和突變等操作中不便進(jìn)行，因此必須將目的基因所相應(yīng)的一 小段DNA找出來(lái)，這個(gè)過(guò)程叫“亞克隆”。您的答案：簡(jiǎn)答題問(wèn)題：如果從一種原核生物中cloning某基因(1-2kb)，請(qǐng)談?wù)勊幕经h(huán)節(jié)？參照答案：對(duì)原核生物染色體DNA進(jìn)行不完全酶切，純化所得到的DNA片斷，并與載體連接，

13、轉(zhuǎn)化大腸桿菌；得到轉(zhuǎn)化子后，根據(jù)目的基因兩側(cè)的 已知序列設(shè)計(jì)探針，雜交，篩選轉(zhuǎn)化子；所得到的轉(zhuǎn)化子中具有目的基因，進(jìn)一步作亞克隆，一步步地向目的基因逼近，最后可得到目的基因簡(jiǎn)答題問(wèn)題：什么叫基因工程(Gene Engineering)，試從理論和技術(shù)兩個(gè)方面談?wù)凣ene Engineering誕生的基本？參照答案：基因工程(Gene Engineering )又稱基因操作(Gene Manipulation)、重組DNA ?；蚬こ淌且苑肿舆z傳學(xué)理論為基本，以分子生物學(xué)和 微生物學(xué)的現(xiàn)代措施為手段，將不同來(lái)源的基因(DNA分子)，按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子，然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以變

14、化生物原先的遺傳特 性，獲得新品種，生產(chǎn)新產(chǎn)品，或是研究基因的構(gòu)造和功能。思考題問(wèn)題：簡(jiǎn)述基因操作、基因重組和基因工程的關(guān)系。思考題問(wèn)題：為什么說(shuō)基因工程是生物學(xué)和遺傳學(xué)發(fā)展的必然產(chǎn)物？思考題問(wèn)題：簡(jiǎn)述基因的構(gòu)造構(gòu)成對(duì)基因操作的影響。第二章名詞解釋問(wèn)題：Restriction and modification參照答案：限制和修飾。宿主特異性地降解外源遺傳物質(zhì)(DNA)的現(xiàn)象稱為限制。外源遺傳物質(zhì)通過(guò)甲基化等作用避免宿主的限制作用稱為修飾。名詞解釋問(wèn)題：Matched ends參照答案：匹配末端。辨認(rèn)位點(diǎn)為回文對(duì)稱構(gòu)造的序列，經(jīng)限制酶切割后，產(chǎn)生的相似的，互補(bǔ)的末端稱為匹配粘端，亦即粘性末端co

15、hesive end)。名詞解釋問(wèn)題：Blunt ends參照答案：平末端。在回文對(duì)稱軸上同步切割DNA的兩條鏈，產(chǎn)生的沒(méi)有堿基突出的末端稱為平末端。名詞解釋問(wèn)題：Isoschizomer參照答案：同裂酶。辨認(rèn)相似序列的限制酶稱同裂酶，但它們的切割位點(diǎn)也許不同。名詞解釋問(wèn)題：Isocaudiners參照答案：同尾酶。來(lái)源不同、辨認(rèn)序列不同，但產(chǎn)生相似粘性末端的酶。名詞解釋問(wèn)題：Site preferences參照答案：位點(diǎn)偏愛(ài)。某些限制酶對(duì)同一介質(zhì)中的不同位置的同一種辨認(rèn)序列體現(xiàn)出不同的切割效率的現(xiàn)象稱為位點(diǎn)偏愛(ài)。名詞解釋問(wèn)題：Star activity參照答案：星星活性。在極端非原則條件下，

16、限制酶能切割與辨認(rèn)序列相似的序列，這個(gè)變化的特殊性稱星星活性。名詞解釋問(wèn)題：Nicking enzyme參照答案：切口酶。有些限制酶只切割雙鏈DNA中的一條鏈，產(chǎn)生單鏈缺口，這種酶稱為切口酶。名詞解釋問(wèn)題：Klenow fragment參照答案：Klenow片段Klenow DNA聚合酶是E.coli DNA polymerase經(jīng)蛋白酶（枯草桿菌蛋白酶）裂解而從全酶中除去53外切活性的多 肽大片段，而聚合活性和3-5外切活性不受影響。名詞解釋問(wèn)題：Sequenase參照答案：測(cè)序酶。是改造的T7噬菌體DNA聚合酶，切除了 99%以上的3-5外切活性。Sequenase Version2切除了

17、所有的3-5外 切活性，用于雙脫氧鏈終結(jié)法對(duì)長(zhǎng)片段進(jìn)行測(cè)序。名詞解釋問(wèn)題：Reverse transcriptase參照答案：反轉(zhuǎn)錄酶。即依賴于RNA的DNA聚合酶，它有5-3合成DNA活性，但是無(wú)35外切活性。它來(lái)自AMV（禽成髓細(xì)胞瘤病毒）或Mo-MLV （Moloney 鼠白血病病毒，又稱M-MuLV）。名詞解釋問(wèn)題：Terminal transferase參照答案：末端轉(zhuǎn)移酶。來(lái)源于小牛胸腺，是存在于前淋巴細(xì)胞及分化初期的類淋巴樣細(xì)胞內(nèi)的一種不尋常的DNA聚合酶，在二價(jià)陽(yáng)離子存在下，末端轉(zhuǎn) 移酶催化dNTP加于DNA分子的3羥基端。若dNTP為T(mén)或C ，此二價(jià)陽(yáng)離子首選鉆離子；若dNT

18、P為A或G，此二價(jià)陽(yáng)離子首選鎂離 子。名詞解釋問(wèn)題：Ligase參照答案：連接酶。催化DNA 5磷酸基與3羥基之間形成磷酸二酯鍵，將兩段核酸連接起來(lái)的酶。名詞解釋問(wèn)題：T4 polynucleotide kinase參照答案：T4多核昔酸激酶。催化ATP的 Y-磷酸基轉(zhuǎn)移至DNA或RNA的5末端。名詞解釋問(wèn)題：Alkaline phosphatase參照答案：堿性磷酸酶。重要來(lái)源于牛小腸（Calf intestinal alkaline phosphatase），簡(jiǎn)稱CIP或CIAP，也有來(lái)自細(xì)菌（BAP）。催化除去DNA或RNA 5 磷酸。名詞解釋問(wèn)題：S1 nuclease參照答案：Sl核

19、酸酶。來(lái)源于米曲霉（Aspergillus oryzae），可降解單鏈DNA或RNA ，產(chǎn)生帶5磷酸的單核昔酸或寡核昔酸雙鏈；對(duì)dsDNA ， dsRNA ， DNA:RNA雜交體不敏感。名詞解釋問(wèn)題：Exonulease田參照答案：外切核酸酶田。來(lái)源于大腸桿菌，催化從dsDNA 3-OH逐個(gè)清除單核昔酸的反映，底物為dsDNA或線狀和帶切口或缺口的環(huán)狀DNA ， 反映成果是在dsDNA上產(chǎn)生長(zhǎng)的單鏈區(qū)。名詞解釋問(wèn)題：Single strand binding protein參照答案：?jiǎn)捂溄Y(jié)合蛋白。此蛋白能協(xié)同地與ssDNA結(jié)合而不與dsDNA結(jié)合，可以削弱鏈內(nèi)二級(jí)構(gòu)造的穩(wěn)定性，從而加速互補(bǔ)多

20、核昔酸的重新退火，并 通過(guò)消除阻礙DNA聚合酶邁進(jìn)的鏈內(nèi)二級(jí)構(gòu)造，而提高這些聚合酶的持續(xù)作用能力。名詞解釋問(wèn)題：Proteinase K參照答案：蛋白酶K是具有高活性的絲氨酸蛋白酶，屬枯草桿菌蛋白酶，可以水解范疇廣泛的肽鍵，特別適合水解羧基末端至芳香族氨基酸和中性氨基酸 之間的肽鍵。K指該蛋白酶通過(guò)水解角蛋白（keratin）可覺(jué)得該霉菌提供所有所需的碳源和氮源。名詞解釋問(wèn)題：Lysozymes參照答案：溶菌酶。一類水解細(xì)菌細(xì)胞壁中肽聚糖的酶，常用的是卵清溶菌酶，用于破碎細(xì)胞。填空題問(wèn)題：Ecok的一般分子構(gòu)成為R2M2S ，在這些亞基中，R亞基具有（）的作用，M亞基具有（）的作用，S亞基具有

21、（）的作用，當(dāng)該 該酶發(fā)生作用時(shí)，需用到的輔因子有：（）、（）、（）。參照答案：限制酶；甲基化；辨認(rèn)DNA序列；ATP； SAM； Mg2+填空題問(wèn)題：限制性內(nèi)切核酸酶（Restriction endonuclease）的命名是按屬名和種名相結(jié)合的原則的，一般第一種大寫(xiě)字母取自（），第二、三個(gè)字母取 自（），第四個(gè)字母則用（）表達(dá)。參照答案：屬名的第一種字母；種名的前兩個(gè)字母；菌株名填空題問(wèn)題：II型限制酶辨認(rèn)回文對(duì)稱序列，在回文序列（）或（）切割DNA ，產(chǎn)生帶3 -OH和5 -P基團(tuán)的DNA的產(chǎn)物，需（）的存在才干發(fā) 揮活性，相應(yīng)的修飾酶只需SAM 。參照答案：內(nèi)部；附近；Mg2 +填空題

22、問(wèn)題：從因特網(wǎng)上可以找到限制酶的數(shù)據(jù)庫(kù)（），該網(wǎng)站由New England Biolabs公司維護(hù)（）。參照答案： REBASE填空題問(wèn)題：辨認(rèn)相似序列的限制酶稱（）參照答案：同裂酶填空題問(wèn)題：I-CeuI酶是衣滴蟲(chóng)葉綠體大rRNA基因的內(nèi)含子編碼的產(chǎn)物，辨認(rèn)位點(diǎn)為（）bp，辨認(rèn)的核心部位為（）至（）位置的19bp ，反映溫 度為37C 。參照答案：26； -12； +7填空題問(wèn)題：位點(diǎn)偏愛(ài)是指：（）參照答案：限制酶對(duì)不同位置的同一種辨認(rèn)序列體現(xiàn)出不同的切割效率填空題問(wèn)題：1單位NaeI 或NarI 的定義：（）參照答案：切割lug腺病毒2 DNA在50ul體系中1小時(shí)所需的酶量填空題問(wèn)題：有

23、些限制酶只切割雙鏈DNA中的一條鏈，產(chǎn)生單鏈缺口，即（）參照答案：切口酶填空題問(wèn)題：個(gè)體間DNA限制性片段長(zhǎng)度的差別叫（）參照答案：限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）填空題問(wèn)題：DNA載體經(jīng)Hindlll切割后產(chǎn)生粘性末端，能發(fā)生載體自連，影響載體與外源DNA的連接效率，常用的避免載體自連的措施有（）、（）。參照答案：去磷酸化；部分補(bǔ)平填空題問(wèn)題：完全的回文序列應(yīng)具有兩個(gè)特點(diǎn)即（）和（）。參照答案：可以在中間劃一種對(duì)稱軸，兩側(cè)的序列兩兩對(duì)稱互補(bǔ)配對(duì)；兩條互補(bǔ)鏈的5-3的序列構(gòu)成相似，即將一條鏈旋轉(zhuǎn)180，則兩條鏈重疊填空題問(wèn)題：Dcm Methylase （Dcm甲基化酶）的辨認(rèn)序列為（）和（）

24、，該酶的作用位點(diǎn)為（）。參照答案：CCTGG； CCAGG；第二個(gè)胞嘧啶C的C5位置填空題問(wèn)題：大腸桿菌中至少有三種依賴于甲基化的限制系統(tǒng)（）、（）、（）。它們辨認(rèn)的序列各不相似，但只辨認(rèn)通過(guò)甲基化的序列，都限制CpG甲 基化酶作用的DNA 。參照答案：mcrA； mcrBC； mrr您的答案：填空題問(wèn)題：分別寫(xiě)出如下限制性內(nèi)切核酸酶（Restriction endonuclease）的辨認(rèn)序列EcoRl（）、Sau3AI（）、HindIII（）。參照答案：GAATTC； GATC； AAGCTT填空題問(wèn)題：Weiss單位的定義為（）參照答案：在37C下20分鐘內(nèi)催化1nmol32P從焦磷酸根

25、置換到y(tǒng),B32PATP所需的酶量填空題問(wèn)題：限制性內(nèi)切核酸酶（Restriction endonuclease） 一般保存在（）濃度的甘油溶液中。參照答案：50%填空題問(wèn)題：載體和外源DNA經(jīng)酶切，在進(jìn)行下一步操作前，需消除限制性內(nèi)切核酸酶Restriction endonuclease）的影響。常用的措施有（）、（）、 （）、（）。參照答案：EDTA法；加熱法；苯酚抽提法；試劑盒除酶法填空題問(wèn)題：對(duì)DNA進(jìn)行雙酶切時(shí)，酶切緩沖液的選擇原則有（1）（）、（2）（）、（3）（）參照答案：可選用都合適的緩沖液或通用緩沖液；若緩沖液不可替代則先用低濃度的，再加適量NaCl和第二種酶；先用低鹽緩沖液

26、再用高鹽緩沖液填空題問(wèn)題：Dnasel為內(nèi)切核酸酶，在不同的輔因子條件下，產(chǎn)生不同的酶切效果，當(dāng)Mg2+存在時(shí)（）；當(dāng)Mn2+存在時(shí)（）。參照答案：獨(dú)立作用于每條DNA鏈，且切割位點(diǎn)隨機(jī)；可在兩條鏈的大體同一位置切割dsDNA ，產(chǎn)生平端或1到2個(gè)核甘酸突出的DNA片斷填空題問(wèn)題：Klenow DNA聚合酶是E.coli DNA polymerase經(jīng)蛋白酶裂解而從全酶中除去（）活性的多肽大片斷，而其她活性保持不變。參照答案：5-3的外切活性填空題問(wèn)題：T4 phage DNA polymerase分子量為（）kDa，該酶的35的外切活性比Klenow酶強(qiáng)（）倍，由于它不從單鏈DNA模板上替代

27、 引物，故可用于（）。參照答案：114； 200；提高誘變反映填空題問(wèn)題：反轉(zhuǎn)錄酶來(lái)自AMV或MoMLV ，即依賴于RNA的DNA聚合酶，它有（）活性，但無(wú)（）活性。參照答案：5-3合成DNA的；3-5的外切填空題問(wèn)題：末端轉(zhuǎn)移酶來(lái)源于（），是存在于前淋巴細(xì)胞及分化初期的類淋巴樣細(xì)胞內(nèi)的一種不尋常的DNA聚合酶，在（）存在下，末端轉(zhuǎn)移酶催化dNTP加 于DNA分子的3羥基端。參照答案：小牛胸腺；Mg2 +填空題問(wèn)題：T4 DNA連接酶的分子量為68kDa ，它可以催化DNA 5磷酸基與3羥基之間形成磷酸二酯鍵。反映底物為粘端、切口、平端 的RNA或DNA 。低濃度（）和（）可以提高平端連接效率

28、。參照答案：聚乙二醇PEG ；單價(jià)陽(yáng)離子填空題問(wèn)題：E.coli DNA連接酶與T4 DNA連接酶相似，但需（）的參與，且其平端連接效率低常用于置換合成法。參照答案：煙酰胺一腺嘌吟二核昔酸（NAD+）填空題問(wèn)題：T4多核昔酸激酶在高濃度的ATP時(shí)發(fā)揮最佳活性，（）是其強(qiáng)烈克制劑。參照答案：NH4 +填空題問(wèn)題：BAL31核酸酶重要活性為3外切核酸酶活性，可從線性DNA兩條鏈的3端清除掉單核昔酸；還可從內(nèi)部切割核酸，作用于單鏈。BAL31發(fā)生作用依賴（），（）可克制其活性。參照答案：Ca2 + ； EGTA填空題問(wèn)題：綠豆核酸酶來(lái)源于綠豆芽，與S1酶相似，但比S1酶更溫和，在（）上才切割，可使D

29、NA突出端變成平端。參照答案：大切口填空題問(wèn)題：核糖核酸酶A來(lái)源于牛胰，為內(nèi)切核酸酶，可特異襲擊（）。可除去DNA:RNA中未雜交的RNA區(qū)，可用來(lái)擬定DNA或RNA中單堿 基突變的位置。參照答案：RNA上嘧啶殘基的3端填空題問(wèn)題：用于構(gòu)建嵌套缺失體常用到的核酸酶有（）、（）、（）。參照答案：Dnasel；外切核酸酶III；BAL31填空題問(wèn)題：瓊脂糖酶作用于低熔點(diǎn)瓊脂糖，它的活性是可切割瓊脂糖酶亞單位。由于此酶可分解瓊脂糖，因此應(yīng)用于（）。參照答案：分離大片段DNA選擇題問(wèn)題：限制性內(nèi)切酶一般保存在（）濃度的甘油溶液中。參照答案：C 50%點(diǎn)評(píng)：合適濃度的甘油和二甲基亞砜可以作為冰凍保護(hù)劑，

30、保護(hù)生物大分子的活性。選擇題問(wèn)題：限制性圖譜與限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）圖譜的最明顯區(qū)別在于（）參照答案：A前者是物理圖譜后者是連鎖圖點(diǎn)評(píng)：具體理解兩者的概念選擇題問(wèn)題：迄今為止所發(fā)現(xiàn)的限制性內(nèi)切核酸酶可以作用于（）參照答案：C只能作用于雙鏈DNA點(diǎn)評(píng)：限制性內(nèi)切核酸酶的辨認(rèn)和切割序列有很強(qiáng)的特異性，特別是第II型的限制性內(nèi)切酶。選擇題問(wèn)題：已知某一內(nèi)切酶在一種環(huán)狀DNA上有4個(gè)切點(diǎn)，當(dāng)用此酶切割該環(huán)狀DNA ，可以得到（）個(gè)片段參照答案：B 4點(diǎn)評(píng)：注意DNA分子的形狀，其他條件相似的時(shí)候，線狀比環(huán)狀產(chǎn)生的片段要多一種。選擇題問(wèn)題：甘油會(huì)使許多限制性內(nèi)切核酸酶的特異性發(fā)生變化，是導(dǎo)致某

31、些酶星星活性的重要因素之一，避免的措施是在酶切反映體系中，將甘油的濃度控 制在（）如下參照答案：A 5%點(diǎn)評(píng)：低溫下保存生物大分子時(shí)，甘油可以作為冰凍保護(hù)劑，但反映體系中甘油濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致星星活性。選擇題問(wèn)題：在下列進(jìn)行DNA部分酶切的條件中，控制哪一項(xiàng)最佳（）參照答案：D 酶量點(diǎn)評(píng)：多種酶均有適合自己的反映溫度；同步根據(jù)酶反映動(dòng)力學(xué)，酶切反映一定期間后酶的活性就會(huì)削弱或喪失，因此控制酶量是最合適的選擇題問(wèn)題：下列試劑中，哪一種可以螯合Ca2+離子（）參照答案：D EGTA點(diǎn)評(píng)：EDTA螯合Mg2+等金屬離子，EGTA螯合Ca2+離子。選擇題問(wèn)題：DNA被某種酶切割后，電泳得到的電泳帶有些擴(kuò)散

32、，下列因素中，哪一項(xiàng)不太也許（）參照答案：C 酶失活點(diǎn)評(píng)：理解限制性內(nèi)切酶酶切本質(zhì)和DNA電泳實(shí)驗(yàn)原理。選擇題問(wèn)題：nick與gap的區(qū)別在于（）參照答案：A前者是斷開(kāi)了一種磷酸二酯鍵，后者是指DNA的單鏈中有較小的缺失點(diǎn)評(píng)：注意理解專業(yè)詞匯。選擇題問(wèn)題：可以在切口部位起作用的酶是（）參照答案：B S1核酸酶 點(diǎn)評(píng)：BAL31核酸酶重要活性為3外切核酸酶活性，可以從線性DNA兩條鏈的3端去掉單核昔酸；S1核酸酶可降解單鏈DNA或RNA ，產(chǎn) 生帶5磷酸的單核昔酸或寡核昔酸，中檔濃度可在切口或小缺口處切割雙鏈；核糖核酸酶A可以特異襲擊RNA上的嘧啶殘基的3端，可除 去DNA:RNA中未雜交的RN

33、A區(qū)；入外切核酸酶可以作用于dsDNA ，持續(xù)逐個(gè)釋放5單核昔酸。選擇題問(wèn)題：Klenow酶與DNA聚合酶相比，前者喪失了（）活性參照答案：A53外切酶點(diǎn)評(píng)：Klenow DNA聚合酶是E.coli DNA polymerase經(jīng)蛋白酶（枯草桿菌蛋白酶）裂解而從全酶中除去53外切活性的多肽大片段，而聚合活性 和3-5外切活性不受影響。選擇題問(wèn)題：限制酶的命名遵循一定的原則，波及來(lái)源（宿主），菌株或生物型。命名時(shí)（）參照答案：A屬名第一字母，種名頭兩個(gè)字母，菌株號(hào)，然后再加上序號(hào)（羅馬字）點(diǎn)評(píng)：限制酶的命名遵循一定的原則，波及來(lái)源（宿主），菌株或生物型。命名時(shí)，依次取屬名第一字母，種名頭兩個(gè)字母

34、，菌株號(hào)，然后再加上序號(hào)（羅馬字） 選擇題問(wèn)題：如下對(duì)同裂酶的描述中，哪一項(xiàng)是對(duì)的的（） 參照答案：A辨認(rèn)相似序列的限制酶稱同裂酶點(diǎn)評(píng)：辨認(rèn)相似序列的限制酶稱同裂酶，但它們的切割位點(diǎn)也許不同。具體可分為：同裂同切酶、同序異切酶、“同功多位”等選擇題問(wèn)題：下列DNA聚合酶中，哪一種酶只切割雙鏈DNA中的一條鏈，產(chǎn)生單鏈切口，即切口酶（） 參照答案：A Dnasel點(diǎn)評(píng)：在Mg2+存在下，獨(dú)立作用于每條DNA鏈，且切割位點(diǎn)隨機(jī)。在Mn2+存在下，它可在兩條鏈的大體同一位置切割dsDNA ，產(chǎn)生平端或12個(gè) 核昔酸突出的DNA片段；Klenow DNA聚合酶是E.coli DNA polymeras

35、e經(jīng)蛋白酶（枯草桿菌蛋白酶）裂解而從全酶中除去53外切活性的多 肽大片段，而聚合活性和3-5外切活性不受影響；T4噬菌體DNA聚合酶與Klenow DNA聚合酶相似，但35外切活性強(qiáng)200倍，且不 從單鏈DNA模板上替代引物；T7噬菌體DNA聚合酶的活性功能與T4噬菌體DNA聚合酶和Klenow DNA聚合酶類似，但3-5外切活性 為 Klenow 的 1000 倍。選擇題問(wèn)題：BAP與CIAP的區(qū)別在于（）參照答案：B CIAP 68C時(shí)失活，而B(niǎo)AP 68C穩(wěn)定點(diǎn)評(píng)：CIAP來(lái)源于牛小腸堿性磷酸酶，而B(niǎo)AP來(lái)自細(xì)菌的堿性磷酸酶。BAP抗性強(qiáng)、抗高溫和清除污劑。CIAP可用蛋白酶K消化滅活，

36、或 在5mM EDTA下。65C或75C解決10分鐘，然后用酚、氯仿抽提，純化去磷酸化的DNA ，從而除去CIAP的活性。選擇題問(wèn)題：下列哪一種酶作用時(shí)需要引物（）參照答案：B 反轉(zhuǎn)錄酶點(diǎn)評(píng)：其他三種酶均只需要DNA鏈即可選擇題問(wèn)題：CIAP催化脫磷酸時(shí)有兩種最適溫度，37C和56C ，二種溫度分別合用于（）端脫磷酸參照答案：A 5突出端；平末端和突出的3端點(diǎn)評(píng)：3端突出時(shí)，磷酸基團(tuán)是內(nèi)陷的，需要?jiǎng)×乙稽c(diǎn)的反映條件。選擇題問(wèn)題：有關(guān)宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下述描述中只有（）不恰當(dāng)參照答案：D這一系統(tǒng)的核酸酶都是II類限制性內(nèi)切核酸酶點(diǎn)評(píng)：根據(jù)酶的亞單位構(gòu)成、辨認(rèn)序列的種類和與否需要輔助因

37、子，限制與修飾系統(tǒng)至少可分為四類：11型、IIs型、1型、III型 選擇題問(wèn)題：限制性內(nèi)切核酸酶可以特異性地辨認(rèn)（） 參照答案：C 雙鏈DNA的特定堿基序列點(diǎn)評(píng)：理解限制性內(nèi)切酶的辨認(rèn)序列。選擇題問(wèn)題：如下為同尾酶的是（）參照答案：B BamHl,Sau3AI,StyI點(diǎn)評(píng)：所謂同尾酶即她們可以產(chǎn)生相似的粘性突出末端。其中B選項(xiàng)中BamHl辨認(rèn)位點(diǎn)為GlGATCC ， Sau3AI辨認(rèn)位點(diǎn)為IGATC ， StyI辨 認(rèn)位點(diǎn)為 CCIWWGG （W=AorT）選擇題問(wèn)題：在長(zhǎng)模板鏈的指引下引物延伸合成長(zhǎng)的DNA互補(bǔ)鏈時(shí)應(yīng)選用（）參照答案：B T7 DNA聚合酶您的答案：點(diǎn)評(píng)：T7 DNA聚合酶

38、是所有DNA聚合酶中持續(xù)合成能力最強(qiáng)的一種選擇題問(wèn)題：在大腸桿菌中，大多數(shù)均有三個(gè)位點(diǎn)特異性的DNA甲基化酶，如下選項(xiàng)中哪一種酶不涉及在內(nèi)（）參照答案：D SssI點(diǎn)評(píng)：Sss I甲基化酶來(lái)自原核生物Spiroplasma選擇題問(wèn)題：在大腸桿菌中，至少有3種依賴于甲基化的限制系統(tǒng)，如下選項(xiàng)中不屬于這3種的為（）參照答案： C mcrD點(diǎn)評(píng)：無(wú) mcrD選擇題問(wèn)題：如下幾種核酸酶中，不能用于嵌套缺失的為()參照答案：B S1核酸酶點(diǎn)評(píng)：S1核酸酶可降解單鏈DNA或RNA ，酶濃度大時(shí)可完全消化雙鏈，中檔濃度可在切口或小缺口處切割雙鏈。選擇題問(wèn)題：下面有關(guān)限制酶的論述哪個(gè)是錯(cuò)誤的()參照答案：A

39、限制酶是外切酶而不是內(nèi)切酶點(diǎn)評(píng)：理解限制性內(nèi)切酶的特性。選擇題問(wèn)題：在下列酶中，催化反映不需要ATP的是()參照答案：D BamHl點(diǎn)評(píng)：1型和III型限制性內(nèi)切酶在發(fā)生限制作用時(shí)需要ATP ， II型則不需要，而B(niǎo)amHl為II型限制性內(nèi)切酶，在催化反映時(shí)不需要ATP 選擇題問(wèn)題：DNA連接酶在體內(nèi)的重要作用是在DNA復(fù)制、修復(fù)中封閉缺口，下列對(duì)DNA連接酶的描述中，那項(xiàng)是對(duì)的的() 參照答案：A 將雙鏈DNA分子中的5磷酸基團(tuán)同3OH末端重新形成磷酸二酯鍵點(diǎn)評(píng)：理解DNA連接酶的特性。選擇題問(wèn)題：下列酶中，除()外都具有磷酸酶的活性參照答案：A BamHl點(diǎn)評(píng)：磷酸酶活性涉及磷酸化活性和去

40、磷酸化活性。您做對(duì)了0個(gè)簡(jiǎn)答題問(wèn)題：簡(jiǎn)述限制性內(nèi)切核酸酶(Restriction endonuclease)的概念及其生物學(xué)功能？參照答案：定義：指辨認(rèn)DNA的特異序列，并在辨認(rèn)位點(diǎn)或其周邊切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶。生物學(xué)功能：保護(hù)宿主不受外來(lái)DNA分子的感染， 可降解外來(lái)的DNA分子，從而制止其復(fù)制和整合到細(xì)胞中。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：PCR引物設(shè)計(jì)引入酶切位點(diǎn)時(shí)，為什么需在酶切位點(diǎn)后加上某些堿基？參照答案：限制酶切割DNA時(shí)對(duì)辨認(rèn)序列兩端的非辨認(rèn)序列有長(zhǎng)度規(guī)定，也就是說(shuō)在辨認(rèn)序列兩端必須要有一定數(shù)量的核昔酸，否則限制酶將難以發(fā)揮切 割活性。因此，一般需在設(shè)計(jì)引物時(shí)在限制酶切位點(diǎn)外另加34個(gè)堿基。簡(jiǎn)

41、答題問(wèn)題：試回答影響限制性內(nèi)切核酸酶(Restriction endonuclease)切割效率的因素？參照答案：外因：反映條件、底物純度、反映溫度和限制性內(nèi)切酶自身的活性；內(nèi)因：位點(diǎn)偏愛(ài)性；甲基化；底物的構(gòu)象。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：在酶切緩沖液中，一般需加入BSA，請(qǐng)問(wèn)加入BSA的作用是什么？并簡(jiǎn)述其原理？參照答案：作用是提供一定的蛋白質(zhì)濃度，起保護(hù)限制性內(nèi)切酶的作用。限制性內(nèi)切酶在稀釋液中會(huì)迅速變性，BSA是一種較好的可加入酶反映液中的中 性蛋白質(zhì)。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：何謂Star activity ？簡(jiǎn)述Star activity的影響因素及克服措施？參照答案：在極端非原則條件下，限制酶能切割與辨認(rèn)序列相

42、似的序列，這個(gè)變化的特性稱為星星活性。引起星星活性的的因素：高甘油濃度5%): 酶過(guò)量(100U/ml)；低離子強(qiáng)度(8.0)；有機(jī)溶劑如PMSD (二甲基亞砜)、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺(dimethylacetamide)、 二甲基甲酰胺(dimethylformamide)和sulphalane等；用其他二價(jià)陽(yáng)離子Mn2+、Cu2+、Co2+或Zn2+替代Mg2+ 。星星活性的克制措施：減少 酶的用量，避免過(guò)量酶切，減少甘油濃度；保證反映體系中無(wú)有機(jī)溶劑或乙醇；提高離子強(qiáng)度到100150mM (在不克制酶活性的前提下)；減少反 映pH至7.0 ；使用Mg2+作為二價(jià)陽(yáng)離子。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：

43、某DNA序列中存在DpnI酶切位點(diǎn)，以此DNA為模板，在體外合成DNA序列，當(dāng)用該酶進(jìn)行酶切時(shí)，發(fā)現(xiàn)切割不動(dòng)，試分析也許因 素？參照答案：生物體內(nèi)的DNA序列也許是通過(guò)甲基化修飾的，而在體外合成時(shí)，缺少這種修飾作用。當(dāng)用依賴于甲基化的限制酶DpnI來(lái)切割非甲基化的 序列時(shí)，就會(huì)浮現(xiàn)不能切割的狀況。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：天然的質(zhì)粒載體(plasmid vectors) 一般需經(jīng)改造后才干應(yīng)用，涉及清除不必要的片段，引入多克隆位點(diǎn)等。試問(wèn)在此過(guò)程中如何增減酶切位 點(diǎn)？參照答案：在酶切水平上，通過(guò)酶切和連接產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)。將產(chǎn)生的5突出端補(bǔ)平后，再連接以產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)；同尾末端的連接，不同的同 尾酶切割D

44、NA產(chǎn)生的末端，再互相連接時(shí)，可產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)，同步本來(lái)的酶切位點(diǎn)卻消失；平末端的連接簡(jiǎn)答題問(wèn)題：雙脫氧終結(jié)法測(cè)定DNA序列的片段一般不能太長(zhǎng)，如何運(yùn)用本章所學(xué)知識(shí)測(cè)定較長(zhǎng)片段的DNA序列？參照答案：將所需要測(cè)序的DNA片斷采用2種不同的限制性內(nèi)切酶切割，產(chǎn)生不同的酶切片段，將此酶切片段連接到載體上，測(cè)序后，拼接，即可得 到全長(zhǎng)的DNA序列；用一種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行部分酶切，酶切產(chǎn)物與載體連接后，測(cè)序，拼接，即可得到全長(zhǎng)DNA片斷。采用以上任一措施均可，需要 注意的是，在進(jìn)行部分酶切時(shí)，應(yīng)當(dāng)控制好條件，要保證所得到的酶切片斷能覆蓋所需測(cè)序的DNA片斷。您的答案：簡(jiǎn)答題問(wèn)題：大腸桿菌DNA聚合酶

45、I，具有3-5 外切活性和5-3的聚合酶活性以及53的外切活性，試根據(jù)此推測(cè)該聚合酶也許具有哪些用途？參照答案：運(yùn)用E.coli DNA聚合酶的53外切核酸酶活性，可用切口平移法標(biāo)記DNA ，所有DNA聚合酶中只有此酶有此反映；用 于cDNA克隆中的第二鏈，即單純的DNA聚合活性；對(duì)3突出端的DNA作末端標(biāo)記（互換或置換反映）。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：用T4 phage DNA polymerase可進(jìn)行末端標(biāo)記，試簡(jiǎn)述其原理？參照答案：T4 phage DNA聚合酶具有35外切活性和53的聚合酶活性，35的外切活性可以被53的聚合活性所封閉，一方 面在反映體系中加入一種dNTP ，產(chǎn)生3凹端，然后加入通

46、過(guò)標(biāo)記的dNTP ，運(yùn)用T4 phage DNA聚合酶的聚合活性補(bǔ)平3凹端，即可得到標(biāo) 記了末端的DNA片斷。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：BAP和CIAP有何作用？為什么一般采用CIAP而不采用BAP ?參照答案：作用：催化除去DNA或RNA 5磷酸BAP抗性強(qiáng)，抗高溫和去污劑。CIAP可用蛋白酶K消化滅活，或在5mM EDTA下，65C解 決或75C解決10分鐘，然后用酚氯仿抽提，純化去磷酸化的DNA ，從而清除CIAP的活性。相比之下，CIAP比BAP更易清除，因此，一般 采用 CIAP 。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：依賴于DNA的RNA聚合酶涉及SP6噬菌體RNA聚合酶和T4或T7噬菌體RNA聚合酶，此類聚合酶可用于體

47、現(xiàn)外源基因， 論述常用的構(gòu)建方略？參照答案：將T7 RNA聚合酶基因置于E.coli lacUV5啟動(dòng)子之下，插入到入噬菌體中，感染E.coli ，建立穩(wěn)定的溶源菌。E.coli BL21 （DE3）菌株即為將lacUV5啟動(dòng)子和T7聚合酶基因置于入噬菌體DE3區(qū)，該入噬菌體DNA整合于染色體的BL21處。若將T7噬菌體 啟動(dòng)子控制的目的基因經(jīng)質(zhì)粒載體導(dǎo)入該宿主菌中，在IPTG誘導(dǎo)下，可啟動(dòng)外源基因的體現(xiàn)；先導(dǎo)入帶T7噬菌體啟動(dòng)子控制的目的基因的質(zhì)粒，再 用入噬菌體（帶T7 RNA聚合酶基因）感染E.coli ，激活目的基因的體現(xiàn)。簡(jiǎn)答題問(wèn)題：簡(jiǎn)述T4多核昔酸激酶的活性和用途？參照答案：T4多

48、核昔酸激酶的活性催化ATP的 Y一磷酸基轉(zhuǎn)移到DNA或RNA的5末端?？审w現(xiàn)為兩種反映，正反映指ATP的 y一磷酸 基被轉(zhuǎn)移到去磷酸化的DNA 5端，用于對(duì)缺少5-磷酸的DNA進(jìn)行磷酸化。在互換反映中，過(guò)量的ATP可使該激酶將磷酸化的5端磷酸轉(zhuǎn)移 給ADP ，然后DNA從【Y-32P】ATP中獲得放射性標(biāo)記的？一磷酸而重新磷酸化，因此可用于DNA的末端標(biāo)記。用途：該酶重要用于對(duì)缺少5 磷酸的DNA或合成接頭進(jìn)行磷酸化，同步可對(duì)末端進(jìn)行標(biāo)記。通過(guò)互換反映，用于標(biāo)記5末端，以供Maxam-Gilbert法測(cè)序、S1核酸酶分析以 及其他須使用末端標(biāo)記DNA的環(huán)節(jié)。您的答案：思考題問(wèn)題：限制性內(nèi)切酶可

49、劃分為哪幾種類型，各自有何特點(diǎn)？思考題問(wèn)題：哪些酶可用于DNA片段的末端標(biāo)記？思考題問(wèn)題：DNA聚合酶有哪些類型，各有什么活性？思考題問(wèn)題：在分子克隆中所用的酶重要作用于哪些底物？第三章名詞解釋問(wèn)題：Vehicle參照答案：載體。將外源DNA或基因攜帶入宿主細(xì)胞（host cell）的工具稱為載體。具有如下三個(gè)必須元件：復(fù)制原點(diǎn)、多克隆位點(diǎn)和篩選標(biāo)記。名詞解釋問(wèn)題：Gene clone參照答案：基因克隆?？寺∽鲃?dòng)詞時(shí)，指從單一祖先產(chǎn)生同一的DNA分子群體或細(xì)胞群體的過(guò)程；作名詞時(shí)指從一種共同祖先無(wú)性繁殖下來(lái)的一群遺傳上 同一的DNA分子、細(xì)胞或個(gè)體所構(gòu)成的特殊的生命群體。運(yùn)用重組DNA技術(shù)分離

50、目的基因，稱之為基因克隆。名詞解釋問(wèn)題：Gene library參照答案：基因文庫(kù)。由大量的具有基因組DNA （即某畢生物的所有DNA順序）的不同DNA片段的克隆所構(gòu)成的群體，稱之為基因文庫(kù)。名詞解釋問(wèn)題：Plasmid incompatibility參照答案：質(zhì)粒不相容性。運(yùn)用同一復(fù)制系統(tǒng)的兩個(gè)質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象稱質(zhì)粒的不相容性，它是指在第二個(gè)質(zhì)粒導(dǎo)入后，在不波及DNA限 制系統(tǒng)時(shí)浮現(xiàn)的現(xiàn)象。名詞解釋問(wèn)題：a -complementation參照答案：a-互補(bǔ)。指lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的a-半乳糖昔酶陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)的互補(bǔ)。這兩個(gè)

51、無(wú)酶學(xué)活性的產(chǎn)物混合在一起時(shí)，可恢復(fù)a-半乳糖昔酶的活性。名詞解釋問(wèn)題：X-gal/IPTG參照答案：兩者都是乳糖的衍生物，X-gal：乳糖操縱子底物，可以作為生色劑，被a-半乳糖昔酶分解后可產(chǎn)生蘭色產(chǎn)物，可使菌落呈現(xiàn)蘭色；IPTG:乳糖 操縱子誘導(dǎo)物。名詞解釋問(wèn)題：lytic growth參照答案：裂解生長(zhǎng)狀態(tài)。噬菌體侵染宿主細(xì)胞后，大量復(fù)制并組裝成子代噬菌體顆粒，導(dǎo)致宿主細(xì)胞裂解的現(xiàn)象稱裂解生長(zhǎng)狀態(tài)。名詞解釋問(wèn)題：lysogenic state參照答案：溶源狀態(tài)。噬菌體侵染宿主細(xì)胞后，將 入 噬菌體基因組DNA通過(guò)位點(diǎn)專一性重組整合到宿主的染色體DNA中，并隨宿主的繁殖傳給子代 細(xì)胞的現(xiàn)象

52、稱溶源狀態(tài)。名詞解釋問(wèn)題：Multiplicity of infection參照答案：感染復(fù)數(shù)。指單個(gè)宿主細(xì)胞感染的噬菌體顆粒數(shù)，等于實(shí)驗(yàn)所用的噬菌體與細(xì)胞的數(shù)量之比。名詞解釋問(wèn)題：Insertion vectors參照答案：插入型載體。通過(guò)特定的酶切位點(diǎn)容許外源DNA片段插入的載體稱為插入型載體。名詞解釋問(wèn)題：Replacement vectors參照答案：置換型載體。而容許外源DNA片段替代載體的非必須DNA片段的載體，稱為置換型載體。名詞解釋問(wèn)題：Cosmid參照答案：粘粒。帶有將DNA包裝到噬菌體顆粒中所需的cos序列的質(zhì)粒。涉及質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)，可以象質(zhì)粒同樣轉(zhuǎn)化并增殖；涉及cos位點(diǎn)，

53、可以 象噬菌體顆粒同樣包裝、侵染。名詞解釋問(wèn)題：Replicative form DNA參照答案：復(fù)制型DNA 。在宿主細(xì)胞內(nèi)，感染性的單鏈?zhǔn)删wDNA （正鏈）在宿主酶的作用下轉(zhuǎn)變成環(huán)狀雙鏈DNA ，用于DNA的復(fù)制，這種雙 鏈DNA稱為復(fù)制型DNA 。名詞解釋問(wèn)題：Phagemid參照答案：噬菌粒。具有ColEl復(fù)制起點(diǎn)及單拷貝的絲狀體噬菌體重要基因間隔區(qū)的質(zhì)粒載體。此基因間隔區(qū)含病毒DNA合成的起始與終結(jié)及噬菌體顆 粒形態(tài)發(fā)生所必須的所有順式作用序列。含phagemid的細(xì)菌被噬菌體感染后，基因II蛋白作用于間隔區(qū)，啟動(dòng)滾環(huán)復(fù)制產(chǎn)生ssDNA并進(jìn)行包裝。您的答案：名詞解釋問(wèn)題：M13K0

54、7 help phage參照答案：M13KO7輔助噬菌體。M13單鏈絲狀噬菌體的衍生株，基因II帶有一種G-T的突變。M13KO7基因組雙鏈DNA可體現(xiàn)產(chǎn)生子代單 鏈DNA所必需的所有蛋白。M13K07中突變的基因II產(chǎn)物與自身攜帶的噬菌體復(fù)制起點(diǎn)的作用尚不如它與克隆于噬菌粒pUCll8和pUCll9中的病 毒復(fù)制起點(diǎn)的作用有效，可以保證在細(xì)胞所產(chǎn)生的病毒顆粒中來(lái)自噬菌粒的單鏈DNA可以占據(jù)優(yōu)勢(shì)。名詞解釋問(wèn)題：Yeast artificial chromosomes參照答案：酵母人工染色體載體。運(yùn)用釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）染色體的復(fù)制元件來(lái)驅(qū)動(dòng)外源DNA片段

55、復(fù)制的載體稱為酵母人工染色體載 體。由自主復(fù)制序列、著絲粒、復(fù)制子及選擇標(biāo)記等元件構(gòu)成。名詞解釋問(wèn)題： Bacterial artificial chromosomes參照答案：細(xì)菌人工染色體。是基于大腸桿菌的F質(zhì)粒構(gòu)建的高通量低拷貝質(zhì)粒載體。涉及嚴(yán)謹(jǐn)型控制的復(fù)制區(qū)oriS 、啟動(dòng)DNA復(fù)制的由ATP驅(qū) 動(dòng)的解旋酶（RepE），以及三個(gè)保證低拷貝并使質(zhì)粒精確分派至子代細(xì)胞的基因座（parA,parB和parC）等元件）。名詞解釋問(wèn)題：P1 artificial chromosomes參照答案：P1人工染色體載體。結(jié)合了 P1載體和BAC載體的特性，是P1噬菌體載體的改善載體。重組分子不能通過(guò)體

56、外包裝來(lái)感染宿主細(xì)胞， 而只能通過(guò)電轉(zhuǎn)化來(lái)將重組分子導(dǎo)入宿主細(xì)胞。名詞解釋問(wèn)題：Shuttle vector參照答案：穿梭載體?？梢栽趦深惒煌乃拗髦袕?fù)制、增殖和選擇的載體稱為穿梭載體。填空題問(wèn)題：載體（Vehicle）的類型有（），（），（），（）等。參照答案：質(zhì)粒載體；噬菌體載體；粘粒載體；噬菌粒載體填空題問(wèn)題：Gene cloning是指（），基因文庫(kù)（Gene library）是指（）。參照答案：運(yùn)用重組DNA技術(shù)分離目的基因；由大量的具有基因D NA （即某畢生物的所有DNA順序）的不同DNA片段的克隆所構(gòu)成的群體填空題問(wèn)題：Plasmid的定義是（），Plasmid能進(jìn)行自我復(fù)制，

57、大多數(shù)為（）鏈（）狀DNA分子，大小一般為（）kb。參照答案：染色體外的遺傳因子；雙；閉環(huán)；1200您的答案：填空題問(wèn)題：（）即為質(zhì)粒的拷貝數(shù)，按照質(zhì)粒拷貝數(shù)的多少，質(zhì)?？梢苑譃椋ǎ┖停ǎ?，（）質(zhì)粒多數(shù)是某些具有轉(zhuǎn)移能力的大質(zhì)粒；（）質(zhì)粒多數(shù)是某些不具有轉(zhuǎn)移能力的小質(zhì)粒。參照答案：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞中所具有的質(zhì)粒DNA分子數(shù)目；嚴(yán)謹(jǐn)型；松弛型；嚴(yán)謹(jǐn)型；松弛型填空題問(wèn)題：松弛型質(zhì)粒和嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒融合后來(lái)，雜合質(zhì)粒一般優(yōu)先使用（）的復(fù)制子。參照答案：松弛型參照答案：兩個(gè)質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象；相似填空題問(wèn)題：質(zhì)粒具有轉(zhuǎn)移性，它是指（），它需要（），（）和（）參照答案：在自然條件下，諸多質(zhì)?？梢酝ㄟ^(guò)稱為細(xì)菌接合的作用轉(zhuǎn)移到新宿主內(nèi)；移動(dòng)基因mob ；轉(zhuǎn)移基因tra ；轉(zhuǎn)移起始位點(diǎn)填空題問(wèn)題：根據(jù)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性可以將質(zhì)粒分為（）和（），一般大質(zhì)粒都是（），（）一般都是小質(zhì)粒，其上沒(méi)有（）參照答案：接合型質(zhì)粒；非接合型質(zhì)粒；