生物毒性檢測作業(yè)指導(dǎo)書

1、生物毒性檢測作業(yè)指導(dǎo)書1.受試生物受試生物的選擇應(yīng)遵循以下原則：棲息于非污染區(qū)、生長良好、健康無病的個體；對污染反應(yīng)較敏感的種類；地理分布較廣、數(shù)量較大，全年在某一實(shí)際海區(qū)容易采到的，并對其生活習(xí)性清楚，易在實(shí)驗(yàn)室條件下培養(yǎng)的種類；受試生物來源于同一地點(diǎn)、同一種群，力求個體大小基本一致；選用受試生物的早期發(fā)育階段（受精卵、幼體）。2.污染水樣采集和致毒實(shí)驗(yàn)液的配制2.1污染水樣采集及處理2.1.1采樣應(yīng)用無毒容器，水樣應(yīng)裝滿，以免運(yùn)輸過程劇烈搖蕩而改變某些水質(zhì)特性。采集的水樣量，應(yīng)按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和次數(shù)備足。同一系列試驗(yàn)，應(yīng)用同時同地采的污水。2.1.2采水時應(yīng)記錄采樣時間、地點(diǎn)，現(xiàn)場測量水溫，并觀

2、察記錄污染的表觀現(xiàn)象。2.1.3采回的水樣最好立即用于實(shí)驗(yàn)，若需放置，應(yīng)低溫保存。水樣應(yīng)進(jìn)行化學(xué)分析，測定其鹽度、PH、水溫、溶解氧、化學(xué)耗氧量、營養(yǎng)鹽及主要污染物含量，為配制致毒試液提供參考。2.2致毒試液的配制2.2.1毒性試驗(yàn)的濃度范圍的確定一般應(yīng)做預(yù)實(shí)驗(yàn)。預(yù)實(shí)驗(yàn)可用較大濃度間隔按比級數(shù)配制污水稀釋液，如：按污水體積比配制出如下濃度組：0.01%、0.1%、1.0%、10%、100%。2.2.2正式試驗(yàn)可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)所提供的濃度范圍，按相等的濃度對數(shù)間隔安排5個以上的試驗(yàn)濃度組。2.2.3配制不同濃度的致毒試液時，應(yīng)先將污水輕輕搖勻，再按需要量取一定體積用清潔海水稀釋，注意yoga海鹽或除

3、氯自來水調(diào)節(jié)其鹽度，使與受試生物的適鹽范圍基本一致。2.2.4若要試驗(yàn)?zāi)程囟ㄎ廴疚锏亩拘孕?yīng)，可人工配制該種污染物的儲備液，然后，參照化學(xué)分析測得的污水中該污染物的含量，酌情按上述方法，用潔凈海水配制試液。石油類污染物，可單獨(dú)試驗(yàn)水溶性組分或用少量低毒性的分散劑制備乳濁液后再行配制。3.試驗(yàn)步驟a)備好若干洗凈的試驗(yàn)容器，并按對照組和各不同濃度組分別編號；b）將上述配好的致毒試液，按濃度順序分別倒入各相應(yīng)的試驗(yàn)容器中，對照組可依試驗(yàn)?zāi)康模尤霛崈舻暮Ｋ蚴芗{水體的海水；c）按從低濃度至高濃度順序，移入受試生物。若受試生物是成體，每組放入10個以上；若受試生物屬受精卵，密度約2000030000

4、個/L；若為貝類幼蟲，密度1000015000個/L；甲宙類無節(jié)幼體200500只/L左右。受試生物移入試液前，需經(jīng)必要檢查，受精卵、幼小個體應(yīng)在解剖鏡下觀察，除去死亡和異常個體；d）記錄試驗(yàn)起始時間，檢查時間是2h、4h、8h、10h、12h、16h、20h、24h、32h、40h、48h、60h、72h、96h，發(fā)現(xiàn)死亡個體，應(yīng)及時檢出，統(tǒng)計(jì)記錄24h、48h、72h、96h各時間內(nèi)的死亡或異常的總個體數(shù)。受精卵和微小個體可用顯微鏡或解剖鏡觀察；e）試驗(yàn)期間，每隔24h更換一次試液，注意勿改變各組試液濃度。換新試液時，微小個體和受精卵可用孔徑小于受試個體的篩子濾出，再放回相應(yīng)的新試液中；f

5、）試驗(yàn)結(jié)束，為統(tǒng)計(jì)各組個體差異，應(yīng)及時測量各組個體大小。微小個體可進(jìn)行顯微測量若干數(shù)量，以比較各組生長發(fā)育受抑制情況。必要時，還可取水樣和受試生物樣分析，比較試驗(yàn)前后污染物質(zhì)在水體和生物體內(nèi)的變化；g）每一試驗(yàn)應(yīng)有兩個平行試驗(yàn)，并按上述步驟和條件，重復(fù)試驗(yàn)兩次以上。4.記錄與計(jì)算4.1按各致毒事件，把觀察到的受試生物死亡或異常的個體數(shù)記入表中，依據(jù)表中數(shù)據(jù)，計(jì)算死亡百分率。由死亡百分率，查出對應(yīng)的概率單位記入表中。4.2半致死濃度的求法概率單位法求算某一試驗(yàn)事件的半致死濃度，可以死亡率的概率單位為縱坐標(biāo)，試液濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，在對數(shù)坐標(biāo)紙上標(biāo)出各數(shù)據(jù)點(diǎn)，擬合各數(shù)據(jù)數(shù)繪出一直線，在直線上查出概率單位為5的點(diǎn)所對應(yīng)的濃度對數(shù)值，其反對數(shù)即為LC50.由此法得出的lgLC50的95%可置信限，其計(jì)算如式（14）： 可置信限= lgLC501.9