錳對(duì)小鼠精子數(shù)量、畸形率和活動(dòng)度影響

1、錳對(duì)小鼠精子數(shù)量、畸形率和活動(dòng)度影響【關(guān)鍵詞】小鼠精子近年來，隨著對(duì)錳的生殖毒理、生殖流行病學(xué)和生殖生化領(lǐng)域的研究進(jìn)展，錳對(duì)男性生殖系統(tǒng)的損害已漸漸受到重視，并提出以精子數(shù)量、精子形態(tài)構(gòu)造和精子運(yùn)動(dòng)才能等作為衡量環(huán)境有害因素對(duì)雄性生殖機(jī)能影響的重要觀察指標(biāo)1。為此，本文對(duì)小鼠精子數(shù)量、畸形率和活動(dòng)度進(jìn)展了研究。1材料與方法11實(shí)驗(yàn)動(dòng)物68周雄性昆明種小鼠100只，體重2328g(貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，合格證號(hào)為SXK2002-0001。隨機(jī)分為4組，即3個(gè)不同劑量nl2組(75，15，30g/kg)和對(duì)照組，分別給予腹腔注射nl2和等量生理鹽水，1次/d，每周5d,每組25只，每周測小鼠體

2、重，調(diào)整用錳量。12主要試劑nl24H2(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司)。13標(biāo)本搜集分別于染錳3，7，14，28，56d隨機(jī)每組取5只小鼠，脫臼處死，立即別離附睪。14精子計(jì)數(shù)參照文獻(xiàn)2。15精子活動(dòng)度參照文獻(xiàn)2。精子活動(dòng)度分級(jí)參照H推薦的方法，按精子游泳狀態(tài)將精子活動(dòng)度分為4級(jí)3。精子活動(dòng)度=(+)/(+)100%。16精子畸形率取上述精子懸液500l，參加2%伊紅溶液50l，染色1in，涂片，甲醇固定。油鏡下觀察1000個(gè)精子/只，用表示精子畸形率4。精子畸形分類參照文獻(xiàn)5的方法。17統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS110統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)展分析。所得計(jì)量資料用s表示，用F分析進(jìn)展檢驗(yàn)；精子活動(dòng)度采用2檢驗(yàn)

3、；精子畸形率用Pissn分布進(jìn)展檢驗(yàn)。2結(jié)果21氯化錳對(duì)小鼠精子數(shù)量的影響(表1)各組在染錳第3，7d精子計(jì)數(shù)與對(duì)照組比擬，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)；染錳14d，30g/kg組精子計(jì)數(shù)開場降低，與對(duì)照組比擬，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)；染錳28d，3個(gè)染錳組精子計(jì)數(shù)與對(duì)照組比擬，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005，P001，P001)；至染錳56d，3個(gè)染錳組精子計(jì)數(shù)均顯著降低，與對(duì)照組比擬，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)，精子數(shù)量隨染錳劑量增加和時(shí)間延長逐漸減少。表1染錳劑量和時(shí)間對(duì)小鼠精子數(shù)量的影響略注：與對(duì)照組比擬，aP005，bP001；與一樣劑量組染錳3d比擬，P005，dP001；與一

4、樣劑量組染錳28d比擬，eP005，fP00122氯化錳對(duì)小鼠精子畸形率的影響(表2)畸形精子的類型以無鉤、香蕉頭和不定形為主，在15與30g/kg組中偶見雙頭和雙尾的精子,染錳至28d，15，30g/kg組精子畸形率明顯增加，與對(duì)照組比擬差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)。染錳至56d，各染錳組精子畸形率與對(duì)照組比擬差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)。且隨染錳劑量的增加，精子畸形率升高，呈明顯正相關(guān)(r=0430,P001)。結(jié)果顯示精子畸形率隨染錳時(shí)間的延長而逐漸增高，亦呈明顯正相關(guān)(r=0592,P001)。23染錳劑量及時(shí)間對(duì)小鼠精子活動(dòng)度的影響(表3)隨染錳劑量的增加和染錳時(shí)間的延長，活動(dòng)精子

5、數(shù)明顯降低，與劑量和時(shí)間呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0571,P001；r=-0381,P001)。表2染錳劑量和時(shí)間對(duì)小鼠睪丸精子畸形率的影響略注：與對(duì)照組比擬，aP005，bP001；與一樣劑量組染錳3d比擬，P005，dP001；與一樣劑量組染錳28d比擬，eP005，fP001表3染錳劑量與時(shí)間對(duì)小鼠精子活動(dòng)度的影響略注：與對(duì)照組比擬，aP005，bP001；與一樣劑量組染錳3d比擬，P005，dP001；與一樣劑量組染錳28d比擬，eP005，fP0013討論本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),隨染錳劑量的增加和時(shí)間的延長，各劑量組小鼠精子數(shù)量逐漸減少。提示錳可以通過血睪屏障，干擾生精細(xì)胞分裂、分化的過程。研究發(fā)現(xiàn)

6、，錳能使多巴胺(DA)和5-羥色胺(5-HT)含量減少，從而降低了DA和5-HT對(duì)垂體促性腺激素(LH、FSH)的抑制，導(dǎo)致FSH和LH程度升高6。下丘腦受循環(huán)中性激素程度的負(fù)反應(yīng)調(diào)節(jié)作用而使睪酮濃度下降。精子的生成是一個(gè)極其復(fù)雜的過程，有多種因素共同參與調(diào)節(jié)，其中睪酮是人們所熟知的一個(gè)重要因素7。睪酮的主要生理作用之一是促進(jìn)精子發(fā)生，錳可間接導(dǎo)致睪酮濃度下降，從而使精子數(shù)量減少。錳可抑制乳酸脫氫酶(LDH)，阻礙精子能量來源，干擾粗線期初級(jí)精母細(xì)胞的減數(shù)分裂及分化為精子的過程，從而影響精子的數(shù)量和活動(dòng)力8。染錳14d，30g/kg組即出現(xiàn)精子數(shù)量的減少，提示錳可通過血睪屏障，直接殺傷精子。本

7、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，染錳28d，15，30g/kg組小鼠的精子畸形率均顯著高于對(duì)照組，且存在著劑量-效應(yīng)關(guān)系和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系。推斷染錳4周即可引起精子畸形率增高。目前認(rèn)為精子形態(tài)是由多基因控制。化學(xué)物質(zhì)可使精子頭部畸形，而精子頭部損傷又與生殖細(xì)胞突變高度相關(guān)。研究證實(shí)，錳可導(dǎo)致早期精細(xì)胞微核率明顯升高，提示錳具有生殖細(xì)胞遺傳學(xué)效應(yīng)，是較強(qiáng)的染色體斷裂劑9。氯化錳可使生精細(xì)胞發(fā)生基因突變和染色體畸變，從而導(dǎo)致小鼠精子畸形率升高。參考文獻(xiàn)1朱仁慈，陳龍，高偉.大鼠慢性鎘染毒后精子生成量和精子運(yùn)動(dòng)才能的研究J.生殖與避孕，2002，22(1)：14-17.2黃勤，黃幸紓.工業(yè)品六六六對(duì)小鼠精子影響的研究J

8、.浙江醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1987，16(1)：9.3rldHealthrganizatin.HLabratryanualfrtheExainatinfhuanseenandsper-ervialuusinterati.4thed.abridge,UnitedKingd:abridgeUniversityPress，1999.4周純先，肖棣，王幫霞，等.小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)方法的改良J.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，24(4)：223-224.5黃幸紓，陳星假設(shè).環(huán)境化學(xué)物致突變、致畸、致癌試驗(yàn)方法.杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1985：264.6姜岳明,陸繼培,謝佩意,等.錳對(duì)接觸男工性腺激素程度的影響J.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，17(1)：20-22.7才秀蓮，李興升，李季蓉，等.染錳鼠睪丸增殖細(xì)胞核抗原與熱休克蛋白表達(dá)J.中國