HPLC法測定菌毒清顆粒中丹酚酸B的含量

1、HPLC法測定菌毒清顆粒中丹酚酸B的含量【摘要】目的測定菌毒清顆粒中丹酚酸B的含量。方法采用反相高效液相色譜法，DiansidT18柱，甲醇-乙腈-0.5%甲酸體積比311059為流動相，流速為1.0Lin-1，檢測波長286n，柱溫為30。結(jié)果丹酚酸B平均回收率為101.5%，RSD為1.95%n=6。結(jié)論該法可用于菌毒清顆粒中丹酚酸B的含量測定?！娟P(guān)鍵詞】菌毒清顆粒；丹酚酸B；HPL；含量測定Abstrat:bjetiveTdeterinethententfSalvianliaidBinJunduqinggranules.ethdsARP-HPLethdasestablished.Theh

2、ratgraphilunasDiansil-18.Thebilephaseasethanl-aetnitrile-0.5%friaid311059Theflrateas1.0Lin-1,andthedetetinavelengthas286n.ResultsTheaveragereveryfrsalvianliaidBas101.5%,preisinftheethdas1.95%(RSD,n=6).nlusinTheethdanbeusedfrquantitativedeterinatinfJunduqinggranules.Keyrds:Junduqinggranules；salvianli

3、aidB；RP-HPL；Assay菌毒清顆粒是醫(yī)院制劑，由板藍(lán)根、穿心蓮、玄參、茜草、丹參、金銀花提取制成，具有清熱解毒、抗菌消炎、抗病毒作用。臨床用于治療細(xì)菌、病毒感染疾病，如呼吸道、胃腸道、泌尿系統(tǒng)的感染EB病毒陽性的患者。該產(chǎn)品現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)只收載了定性鑒別反響，有文獻(xiàn)報道采用HPL法測定其中穿心蓮內(nèi)酯、哈巴俄苷的含量1,2，但丹酚酸B含量測定未見文獻(xiàn)報道。為進(jìn)一步評價菌毒清顆粒的質(zhì)量，本文建立了菌毒清顆粒中丹酚酸B含量測定的反相高效液相色譜法，該法具有別離效果好、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。1儀器與試藥Agilent1100高效液相色譜儀安捷倫公司，Agilent1100系列雙

4、元泵，Agilent1100可變波長檢測器，Agilent1100/化學(xué)工作站。DL-360超聲波清洗器寧波石浦海天電子儀器廠，工作頻率(4.50.05)kHz，輸出功率240。丹酚酸B對照品中國藥品生物制品檢定所，111562-202204，菌毒清顆粒中山市人民醫(yī)院，甲醇、乙腈為色譜純，甲酸為分析純，水為雙蒸水。2方法與結(jié)果2.1樣品液制備2.1.1對照品溶液的制備精細(xì)稱取五氧化二磷減壓枯燥器中枯燥24h的丹酚酸B對照品10.00g，置50L棕色量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精細(xì)移取10L，置50L棕色量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備

5、液濃度為40gL-1。2.1.2供試品溶液的制備精細(xì)稱取菌毒清顆粒樣品約4g，置具塞錐型瓶中，精細(xì)參加體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇25L，稱定重量，超聲處理30in，放冷，稱重，用體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液0.45濾膜過濾，作為供試品溶液。2.1.3陰性對照液的制備取處方組成中除丹參外的其余成分制成不含丹參的陰性對照品，按“2.1.2項(xiàng)下的制備方法處理得陰性對照液。2.2色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱為Diansil-18柱2504.6，5，迪馬公司，甲醇-乙腈-0.5%甲酸體積比311059為流動相，流速為1.0Lin-1，檢測波長286n，柱溫為30。分

6、別取對照品溶液丹酚酸B濃度為12gL-1、供試品溶液和陰性對照溶液10L注入色譜儀，理論板數(shù)以丹酚酸B計算應(yīng)不低于5000；丹酚酸B的拖尾因子為0.94，保存時間約為25in，丹酚酸B與其他組分可基線別離；陰性樣品不干擾樣品測定圖1。1.丹酚酸BA.對照品B.樣品.陰性樣品圖1丹酚酸B對照品、樣品及陰性的高效液相色譜圖略Fig1HPLhratgrasfsalvianliaidB(A)andsaple(B)andnegative()2.3方法學(xué)考察2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別汲取一定量的丹酚酸B對照品貯備液，加體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇稀釋成丹酚酸B濃度為2、4、8、12、16、20、24gL-1的溶

7、液。依次進(jìn)樣10L，每個濃度測定3次以上。以峰面積A對對照品溶液質(zhì)量濃度進(jìn)展回歸，得丹酚酸B回歸方程為A=9.85-1.25，r0.9997。說明丹酚酸B質(zhì)量濃度在224gL-1之間與峰面積線性關(guān)系良好。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3.2精細(xì)度試驗(yàn)取質(zhì)量濃度為12gL-1的丹酚酸B對照品溶液10L連續(xù)測定5次，其峰面積的平均值為115.9，RSD為1.97%，說明儀器精細(xì)度良好。2.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液20220809在0，2，4，6，8h分別進(jìn)樣10L，記錄峰面積，結(jié)果4h峰面積的RSD=2.79%，8h峰面積的RSD=7.86%，說明供試品溶液在4h內(nèi)穩(wěn)定，超過4h不穩(wěn)定，所以樣品配

8、制后應(yīng)盡快測定。2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號20220809樣品6份，照“2.1.2方法處理并測定，結(jié)果丹酚酸B平均含量為0.076gg-1，RSD為2.26%。說明分析方法精細(xì)度良好。2.3.5加樣回收試驗(yàn)精細(xì)稱取同一批號樣品20220809共6份，精細(xì)參加丹酚酸B對照品貯備液3.8L，照“2.1.2方法處理并測定，計算回收率，結(jié)果見表1。丹酚酸B平均回收率為101.5%，RSD=1.95%。結(jié)果說明本方法準(zhǔn)確可靠。表1丹酚酸B回收率試驗(yàn)結(jié)果略Tab.1Resultsfreverytest平均回收率=101.5%,RSD=1.95%2.4樣品測定取菌毒清顆粒3批，照“2.1.2方法制備供試

9、品溶液，分別精細(xì)汲取對照品溶液12gL-1與供試品溶液各10L，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中丹酚酸B的含量，結(jié)果見表2。表2樣品中丹酚酸B測定結(jié)果略Tab.2ResultsfdeterinatinfsalvianliaidBinsaple3討論3.1丹參中有效成分分有脂溶性和水溶性兩類，本品中丹參采用水提工藝，而丹酚酸B為丹參中主要水溶性活性成分3，且其含量較高，所以確定其為含量測定指標(biāo)。曾嘗試以甲醇-乙腈-甲酸-水體積比3010159452為流動相，但別離效果不好，且峰型不對稱，改用本文流動相，方得滿意結(jié)果。曾以水4394為溶劑提取，但含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于以體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇4為溶劑的提取率

10、。以體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇為溶劑，進(jìn)展了超聲提取與回流提取的比照研究，結(jié)果說明超聲提取30in含量達(dá)穩(wěn)定，且提取率高于回流提取，因此選擇體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇為溶劑，超聲提取30in。3.2文獻(xiàn)5報道丹酚酸B不穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)過程中，我們也發(fā)現(xiàn)丹酚酸B對照品及樣品溶液都很不穩(wěn)定，因此對照品最好低溫、避光保存，樣品溶液提取后最好立即測定，以保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確度。3.3從表2結(jié)果可知，不同批號樣品丹酚酸B含量有較大差異，可能原因有消費(fèi)時所投藥材質(zhì)量不穩(wěn)定，或消費(fèi)工藝提取時不夠合理，因此控制中成藥的質(zhì)量首先應(yīng)控制藥材質(zhì)量，同時要進(jìn)一步對消費(fèi)工藝進(jìn)展研究，才能消費(fèi)出質(zhì)量穩(wěn)定、可控的中成藥?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1潘惠萍.菌毒清顆粒劑的制備及質(zhì)量控制J.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2022，238：502-503.2宋粉云，張俊芳，鐘兆健，等.RP-HPL法測定菌毒清顆粒中哈巴俄苷的含量J.中國藥房，2022，1824：1874-1875.3葛志偉，賀慶，水文波，