同濟醫(yī)院檢驗科ISO15189體系文件07解脲及人型支原體檢測

1、同濟大學(xué)附屬同濟醫(yī)院檢驗科微生物組性病檢驗操作指導(dǎo)書TJYYJYKWSW/XBZ406第2版標(biāo)題：解脲及人型支原體檢測第4章 第06號第 PAGE 4 頁 共 NUMPAGES 4 頁1 目的:培養(yǎng)檢測生殖道分泌物及尿液等標(biāo)本中的支抗原、進行藥物敏感試驗。2 適用范圍：同濟醫(yī)院檢驗科微生物實驗室。3 項目名稱：解脲及人型支原體分離鑒定、計數(shù)、藥敏試驗。4 檢測方法：液體培養(yǎng)基培養(yǎng)及藥敏。5 檢測原理：利用人型支原體和解脲支原體在選擇性分離培養(yǎng)基生長并分解特定底物，支培養(yǎng)基的顏色由黃色轉(zhuǎn)變成紅色或紅紫色，檢測Uu和Mh生長與否，并根據(jù)生長出現(xiàn)的快慢估算菌落數(shù)量。6 試劑6.1 品牌：美國安氏。6

2、.2 包裝規(guī)格：20人份。6.3 內(nèi)含物 稀釋液10ml7瓶、冷凍干燥培養(yǎng)基20瓶、無菌石蠟油10ml2瓶、試劑條20條、報告單20張等7 標(biāo)本采集 參見“性病檢驗標(biāo)本采集驗收(拒收)及保存指導(dǎo)”。7 操作步驟： 7.1 標(biāo)本接種與培養(yǎng)7.1.1 取出所需數(shù)量的冷凍干燥培養(yǎng)基，滴加稀釋液到培養(yǎng)瓶中，充分搖勻，培養(yǎng)基完全溶解后液面至標(biāo)簽2.9 標(biāo)線處。7.1.2 將50ul培養(yǎng)基加入C-空白孔中。7.1.3 接種分泌物標(biāo)本 將無菌拭子采集的標(biāo)本插入培養(yǎng)基中，擠壓旋轉(zhuǎn)拭子數(shù)次，使拭子中標(biāo)本滲入，棄拭子。7.1.4 接種液體標(biāo)本 尿液經(jīng)每分鐘2000轉(zhuǎn)離心10分鐘，取沉渣約0.2ml； 其他體液標(biāo)本

3、取0.2ml，用無菌滴管或定量加樣器接種。7.1.5 充分混勻接種了標(biāo)本的培養(yǎng)液，用加樣器接種50ul至余下各孔中；每孔家石蠟油約50ul ,蓋上蓋子。7.1.6 將剩余培養(yǎng)基及試劑條一起置CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)（5% CO2 ,351）,分別于24和48小時觀察結(jié)果。7.3 結(jié)果觀察 7.3.1 C-孔（空白孔）陰性（-），試驗有效，判斷余下各孔結(jié)果。C-孔（空白孔）陽性（+），表示污染，試驗無效。7.3.2 C孔（對照孔）陽性（+），有Uu或（和）Mh生長，判斷余下各孔結(jié)果，見結(jié)果判讀表。7.3.3 C孔（對照孔）陰性（-），報告Uu和Mh陰性。試劑孔編號陽性陰性結(jié)果判斷質(zhì)控孔1.C-空白孔紅黃

4、陽性：試驗無效； 陰性：判斷余下各孔結(jié)果2.C 對照孔陽性：判斷余下各孔結(jié)果試驗； 陰性：報告Uu和Mh培養(yǎng)陰性分離鑒定與半定量計數(shù)3.Uu紅黃陽性：解脲脲原體生長；根據(jù)臨床情況決定是否治療4.Uu104陽性：Uu104CCU。需進行臨床干預(yù)治療（結(jié)果必須在24小時判斷）5.Mh陽性：人型支原體生長6.Mh104陽性：Mh104CCU, 結(jié)果必須在48小時判斷注：尿液、精液及其它正常無菌部位采集的標(biāo)本，Uu培養(yǎng)陽性，即使小于104CCU，結(jié)果仍然具臨床意義。藥敏：DOX等紅黃敏感（S）：L、H均不生長；耐藥（R）：L、H均生長；中敏：僅L生長 報告方式：解脲支原體或人型支原體：陽性（陰性）；培

5、養(yǎng)陽性時，報告計數(shù)及藥敏結(jié) 果。菌落計數(shù)104cfu/ml時，報告陰性。 注意事項 試劑盒應(yīng)在2-8冰箱內(nèi)，有效期18個月。不同批號的試劑不能混用。 培養(yǎng)基復(fù)溶后和接種試劑條前均須充分混勻。結(jié)果判斷以試劑條為準(zhǔn)。 支原體生長應(yīng)保持培養(yǎng)基透明清亮，遇雜菌污染引起渾濁變紅不得報告支原體陽性（但 部分含分泌物較多的樣本，接種到培養(yǎng)基中可能引起培養(yǎng)基澄清度降低，請注意區(qū)別）。 另外培養(yǎng)瓶變紅，而試劑條分離孔無支原體生長，多為標(biāo)本中支原體含量很低引起。 Uu的計數(shù)結(jié)果必須在24小時判斷，Mh的計數(shù)結(jié)果必須在48小時判斷。 試劑開封后，如保存不當(dāng)受潮或長期放置室溫會出現(xiàn)變色和渾濁，則該部分拭子不得 再用。 因為大部分標(biāo)本是不均一分泌物，可能導(dǎo)致試劑條微孔接種量不均一，藥物敏感性結(jié) 果不和理（如：H孔生長，L不長?。Ｈ绯霈F(xiàn)這種情況，請重做藥物敏感試驗或棄用此藥物。10 臨床意義 支原體培養(yǎng)是檢測支原體最好的