哺乳動物雙雜交

1、CheckMate哺乳動物雙雜交系統(tǒng)PtomegaPrecisionDesign.forLife口產(chǎn)品包裝目錄號價格CheckMateMMammalianTwo-Hybrid1E2440SystemE2440的組分lx20uglx20uglx20uglx20ug2x20ugpBINDVectorpACTVectorpBIND-IdControlVectorpACT-MyoDControlVectorpG5lucVector描述：雙雜交系統(tǒng)是在體內(nèi)檢測蛋白-蛋白相互作用的極強有力方法。雙雜交系統(tǒng)的基礎(chǔ)是在一些轉(zhuǎn)錄因子上發(fā)現(xiàn)的模域(modulardomains):一個DNA結(jié)合域,它可以結(jié)合一段特

2、異的DNA序列，和一個轉(zhuǎn)錄激活域，這個轉(zhuǎn)錄激活域與基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄機制相作用(1)。一個轉(zhuǎn)錄激活域聯(lián)合一個DNA結(jié)合域可能在TATA盒啟動RNA聚合酶II復(fù)合體的裝配,同時增強轉(zhuǎn)錄。在CheckMateTM哺乳動物雙雜交系統(tǒng)中，DNA結(jié)合域和轉(zhuǎn)錄激活域分別由不同質(zhì)粒產(chǎn)生，融合于DNA結(jié)合域的一個蛋白質(zhì)(“X)與融合于轉(zhuǎn)錄激活域的第二個蛋白質(zhì)(“Y”)相互作用時，DNA結(jié)合域就與轉(zhuǎn)錄激活域緊密關(guān)聯(lián)。在這個系統(tǒng)中，蛋白X與Y的相互作用導(dǎo)致報告基因的轉(zhuǎn)錄。特點：哺乳動物系統(tǒng)：可在所選細胞系中研究相互作用，蛋白質(zhì)更可能處于其本來構(gòu)型。更好地保持了諸如糖基化、磷酸化和?；确g后的修飾。易于定量：Dual-L

3、uciferase?雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)被用于檢測。內(nèi)對照：海腎熒光素酶使轉(zhuǎn)染效率正態(tài)化?？焖偎矔r檢測：轉(zhuǎn)染后兩天即可得到結(jié)果，而酵母系統(tǒng)則需3-4天。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：pACT載體含有新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因，可用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的選擇。應(yīng)用：確認兩個蛋白質(zhì)有懷疑的相互作用關(guān)系，識別涉及蛋白：蛋白相互作用的域/殘基操作指南：技術(shù)手冊：TM049儲存：存于-20C。參考文獻1Sadowski，I.etal.(1998)Nature335,563Promega公司熒光素酶技術(shù)系列產(chǎn)品指南PtomegaPrecisionDesign.forLifeCheckMate哺乳動物雙雜交系統(tǒng)中蛋白：蛋白相互作用正對照反應(yīng)的概略圖示。在正對照反應(yīng)中，pBIND-Id和pACT-MyoD對照載體與pG5luc載體一起共同轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞。載體pG5luc的螢火蟲熒光素酶基因上游含有在基本TATA盒上游的5個GAL4結(jié)合位點。細胞溫育2-3天，裂解，然后用Dual-Luciferase報告基因檢測系統(tǒng)檢測螢火蟲和海腎熒光素酶。在正對照實驗中，在GAL-4Id和VP16-Myo