河北科技大學(xué)藥物檢驗工第06講 典型藥物檢驗課件

1、第一部分維生素類藥物的分析維生素： 是維持人體正常代謝機能所必需的 微量營養(yǎng)物資。 人體不能合成維生素。第一節(jié) 概 述1920年-發(fā)現(xiàn)人體可將胡蘿卜轉(zhuǎn)化為維生素A。1922年-維E被發(fā)現(xiàn)。1928年-科學(xué)家發(fā)現(xiàn)維B至少有兩種類型。1933年-維E首次用于治療。1948年-大劑量維C用于治療炎癥。1949年-維B3與維C用于治療精神分裂癥。1954年-自由基與人體老化的關(guān)系被揭開。1957年-Q10多酶被發(fā)現(xiàn)。1969年-體內(nèi)超級抗氧化酶被發(fā)現(xiàn)。1970年-維C被用于治療感冒。1993年-哈佛大學(xué)發(fā)表維生素E與心臟病關(guān)系的研究結(jié)果。返 回 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 Vi

2、tB族(B1、B2、B6、B12) VitC、葉酸、煙酸、泛酸等。分類按溶解性分L抗壞血酸第二節(jié) 維生素C維生素C的分析結(jié)構(gòu)特點二烯醇結(jié)構(gòu)，有強還原性C3顯酸性，可成鈉鹽具共軛雙鍵，有紫外吸收兩個手性碳，有旋光性水中易溶，有糖類性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）溶解性1、易溶于水有活性有活性無活性C3OH的pKa = 4.17C2OH的pKa = 11.57（四）酸性（一元酸）與堿反應(yīng)（六）水解性單鈉鹽酮酸鹽（一）與氧化劑的反應(yīng)二、鑒別試驗去氫抗壞血酸OVitC1、與AgNO3反應(yīng)(ChP2005)維生素C被氧化，硝酸銀被還原成黑色銀沉淀2、與2，6 - 二氯靛酚反應(yīng)(ChP2005)二氯靛酚被還原成無

3、色氧化型玫瑰紅色還原型藍色OH（玫瑰色：酸性）（無色）（二）利用糖類性質(zhì)或鹽酸50吡咯藍色糠醛戊糖脫水三氯醋酸VitC（三）UV法（BP）溶于0.01mol/L HCl（四）IR法（ChP2005）指示劑：淀粉指示液1、原理維生素C分子中的烯二醇基具有還原性，能被I2定量的氧化成二酮基（一）碘量法四、含量測定H+（1）酸性環(huán)境：HCl （2）新沸冷H2O：趕走水中O2減慢VitC被O2氧化速度3、討論（3）立即滴定：減少O2的干擾（二）2，6 - 二氯靛酚鈉滴定法法（USP、JP）原理酚亞胺2，6 - 二氯靛酚Vit C1、碘量法測定維生素C 的含量是利用維生素C 的( D ) A堿性 B酸性

4、 C氧化性 D還原性 E水溶性Vc與氧化劑的典型鑒別反應(yīng)碘量法測定維生素C要點（1）酸性環(huán)境：HCl ，減慢VitC被O2氧化速度（2）新沸冷H2O：趕走水中O2 （3）立即滴定：減少O2的干擾羧酸芳酸常見的芳酸及其酯類藥物水楊酸類 貝諾酯苯甲酸類 氨甲苯酸羥苯乙酯丙磺舒（pKa3.4）布美他尼其他芳酸類藥物 氯貝丁酯酚磺乙胺阿司匹林Acetyl Salicylic Acid副產(chǎn)物SAASA一、Aspirin生產(chǎn)工藝二、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1、結(jié)構(gòu)2、性質(zhì) （1）物理性質(zhì) 為固體，具有一定的熔點 分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán)和特征官能團，均具有紫外和紅外特征吸收光譜 溶解性：微溶或幾乎不溶于水，而溶于有機溶劑。（

5、2）化學(xué)性質(zhì) 酸性：具游離羧基，屬中等強度的酸或弱酸；（酚羥基：與FeCl3顯色反應(yīng)）酯鍵：阿司匹林有酯鍵，可在堿性條件下水解，產(chǎn)生對人體有害的水楊酸二、鑒別試驗 （一）FeCl3反應(yīng) 具酚羥基或水解后能產(chǎn)生酚羥基的藥物 直接：水楊酸 間接（堿水解后）：阿司匹林（二）水解反應(yīng) （四）UV、IR苯環(huán)和特征官能團三、特殊雜質(zhì)檢查 1、阿司匹林中特殊雜質(zhì)檢查（1）溶液的澄清度：檢查碳酸鈉試液中不溶物，主要是生產(chǎn)過程可能引入的苯酚類和酯類。（2）游離水楊酸： 雜質(zhì)來源：原料殘存（生產(chǎn)過程中乙酰化不完全）；水解產(chǎn)生（貯存過程中水解產(chǎn)生）檢查方法：對照法 反應(yīng)原理：三氯化鐵反應(yīng) 限量： 原料藥：0.1%；

6、 阿司匹林片：0.3%； 阿司匹林腸溶片：1.5%； 阿司匹林栓劑：1.0%（HPLC法） （3）易炭化物：檢查被硫酸炭化呈色的低分子有機雜質(zhì)。四、含量測定（一）酸堿滴定法1、直接滴定法 溶劑：中性乙醇 指示劑：酚酞指示劑 滴定液：0.1mol/ml NaOH滴定液中性乙醇：對指示劑(酚酞)而言為中性， 可消除滴定誤差乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶 液中滴定過程易水解本法特點：簡單注意點：1、若SA不合格，不宜采用本法2、方法1簡單快速，但是終點會不太明確 Aspirin 丙磺舒(Ch.P. BP. JP等) 苯甲酸(Ch.P等)均采用本法2、水解后剩余滴定法 USP23方法：取本品約

7、1.5g，精密稱定，準(zhǔn)確加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞為指示劑，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相當(dāng)于45.04mg的C9H9O43、兩步滴定法Two-step titration重點適用于Aspirin片測定片劑中有穩(wěn)定劑水解產(chǎn)物水楊酸SAHAc枸櫞酸Citric acid酒石酸Trataric acid為了避免這些酸類的干擾，采用兩步滴定法兩步滴定法 適用范圍：阿司匹林片、阿司匹林腸溶片、氯貝丁酯 反應(yīng)步驟： 第一步 中和所有酸第二步水解，滴定（四）H

8、PLC阿司匹林栓劑的RP-HPLC ChP（2005）： 色譜條件：固定相ODS；流動相甲醇-0.1%二乙胺水溶液-冰醋酸（40：60：4）；檢測280nm；內(nèi)標(biāo)咖啡因；理論塔板數(shù)2000以上。4、雙相滴定法 Titrimetry in two phases（重點） Ch.P 2005用于苯甲酸鈉的測定 苯甲酸鈉為芳酸堿金屬鹽，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于終點的正確判斷。 因此，利用苯甲酸能溶于有機溶劑的性質(zhì)，采用雙相滴定法?？稍谒屑尤肱c水不相容的有機溶劑在分液漏斗中滴定，這樣滴定中產(chǎn)生的苯甲酸轉(zhuǎn)入有機相中，使滴定終點明顯，清晰 HClHCl乙醚(苯甲酸)H2O(苯甲酸鈉)0.5mol/

9、L25ml1.5g50ml2d甲基橙 橙紅色利用苯甲酸溶于有機溶劑（如乙醚）這一性質(zhì)，在水相中加入與水不相混溶的有機溶劑，在滴定過程中將生成的苯甲酸不斷萃取入有機相，減小苯甲酸在水相中的濃度，提除反應(yīng)生成物苯甲酸，并減少苯甲酸的解離，使滴定反應(yīng)進行完全，同時也避免了苯甲酸在瓶中析出影響終點的觀察。終點清晰。 苯甲酸鈉雙相滴定法測定含量：取本品1.4500g，精密稱定，置分液漏斗中，加水25ml、乙醚50m1及甲基橙指示液2滴，用鹽酸滴定液（0.5050mol/L）滴定，邊滴定邊振搖，至水層顯橙紅色。分取水層，置具塞錐形瓶中，乙醚層用水5ml洗滌，洗液并入錐形瓶中，加乙醚20ml，繼續(xù)用鹽酸滴定

10、液（0.5050mol/L）滴定，邊滴定邊振搖，至水層顯持續(xù)的橙紅色。消耗鹽酸滴定液18.98ml。已知每1ml鹽酸滴定液（0.5mol/L）相當(dāng)于72.06mg的苯甲酸鈉（C7H5NaO2）。計算百分含量？消耗鹽酸滴定液（0.5050mol/L）共1898ml已知每1ml鹽酸滴定液（0.5mol/L）相當(dāng)于72.06mg的苯甲酸鈉（C7H5NaO2），1898ml 0.5050mol/L折合為0.5mol/L相當(dāng)于：18.98*0.5050/0.5=19.1698ml相當(dāng)于苯甲酸鈉：19.1698*72.06=1381.376mg=1.381376g=1.381本品1.4500g,含量為：1

11、.381/1.4500=95.2%維生素C鑒別阿司匹林兩步法測定苯甲酸鈉雙相測定:原理、步驟、儀器、計算例1. 鑒別水楊酸及其鹽類，最常用的試液是（ ）A. 碘化鉀 B. 碘化汞鉀C. 三氯化鐵 D. 硫酸亞鐵E. 亞鐵氰化鉀 C例4. 兩步滴定法測定阿司匹林片或阿司匹林腸溶片時，第一步滴定反應(yīng)的作用是（ ）A. 測定阿司匹林含量B. 消除共存酸性物質(zhì)的干擾C. 使阿司匹林反應(yīng)完全D. 便于觀測終點 E. 有利于第二步滴定 B1、阿司匹林在生產(chǎn)中，由于乙?；煌耆蛸A藏中水解產(chǎn)生對人體有害的物質(zhì) 。水楊酸 測定阿司匹林片及腸溶片含量時，為了避免枸櫞（元）酸、水楊酸、醋酸等干擾應(yīng)選用（ D ）。

12、 A.直接酸堿滴定法 B.水解酸堿滴定法 C.雙相酸堿滴定法 D.二步酸堿滴定法例3. 苯甲酸鈉的含量測定，中國藥典（2005年版）采用雙相滴定法，其所用的溶劑體系為（ ）A. 水乙醇 B. 水冰醋酸C. 水氯仿 D. 水乙醚E. 水丙酮 D例2. 雙相滴定法可適用的藥物為（ ）A. 阿司匹林 B. 對乙酰氨基酚C. 水楊酸 D. 苯甲酸E. 苯甲酸鈉 例3.采用雙相滴定法測定苯甲酸鈉含量時，加入乙醚的目的是（A ）防止反應(yīng)產(chǎn)物的干擾 乙醚層在水上面，防止樣品被氧化C. 消除酸堿性雜質(zhì)的干擾 D. 防止樣品水解 E第三部分雜環(huán)類藥物的分析 雜環(huán)化合物：指環(huán)狀有機化合物的碳環(huán)中夾雜有非碳元素原子

13、（如O、S、N等）的化合物第一節(jié) 吡啶類藥物的分析異煙肼（isoniazid）吡啶（pyridine）尼可剎米（nikethamide）異煙腙（ftivazide）以異煙肼為例一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 1. 吡啶環(huán) 弱堿性 pKb8.8， 吡啶環(huán)可發(fā)生開環(huán)反應(yīng)，可用于吡啶類藥物的鑒別 2. 取代基 位上酰肼基： 弱酸性：非水酸量法 還原性：鑒別或氧化還原滴定法含量測定 可與某些羰基試劑發(fā)生縮合反應(yīng)： 鑒別或比色法含量測定 酰胺鍵易水解引入特殊雜質(zhì)游離肼 二、鑒別試驗 （一）吡啶環(huán)的反應(yīng) 1. 沉淀反應(yīng) 與氯化汞的反應(yīng) 2. 吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng) 適用于吡啶 、未取代，以及 、 為烷基或羧基的衍生物（1）戊烯

14、二醛反應(yīng)（Knig反應(yīng)）吡啶環(huán)的特性： 吡啶環(huán)開環(huán) 戊烯二醛反應(yīng)（kning反應(yīng)） 適用于、位無取代的異煙肼、尼克剎米 Chp2005尼克剎米鑒別反應(yīng)：取本品1 滴，加水50ml，搖勻，分取2ml ，加溴化氰試液2ml 與2.5苯胺溶 液3ml ，搖勻，溶液漸顯黃色。 異煙肼不經(jīng)處理的反應(yīng)：（二）酰肼基團的反應(yīng) 還原反應(yīng) 異煙肼吡啶環(huán)位被酰肼所取代，有較強的還原性，可被不同的氧化劑氧化異煙肼與硝酸銀銀鏡反應(yīng) 異煙肼 ChP（2005） 【鑒別】 （2）取異煙肼約10 mg，置試管中，加水2 ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1 m1，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。 異煙肼： 溴酸鉀2.

15、 縮合反應(yīng) 異煙肼 ChP（2005） 【鑒別】 （1）取本品約0.1 g，加水5 ml溶解后，加10香草醛的乙醇溶液1 m1，搖勻，微熱，放冷，即析出黃色結(jié)晶，濾過，用稀乙醇重結(jié)晶，在105干燥后，測定熔點，其熔點為228231，熔融時同時分解。 異煙肼的其他鑒別反應(yīng)與亞硒酸作用，可將其還原為紅色硒的沉淀與1,2-萘醌-4-磺酸在堿性介質(zhì)中，可縮合呈紅色。紅色紫外吸收光譜鑒別芳雜環(huán)在紫外光區(qū)有特征吸收藥物溶劑max (nm)max (nm)異煙肼HCl (0.01mol/L)265約420水266234 378尼克剎米HCl (0.01mol/L)263 285NaOH (0.01mol/L

16、)255 840260 860硝苯地平無水乙醇333 140（五）IR【鑒別】（4）本品的紅外吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜一致。三、雜質(zhì)檢查 雜質(zhì)來源 原料引入、降解產(chǎn)生 （一）異煙肼中游離肼(誘變劑和致癌物質(zhì))的檢查 1. 薄層色譜法（TLC） ChP（2005） 雜質(zhì)對照品法檢查方法：取本品，加水制成每1ml 中含50mg的溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼 加水制成每1ml 中含0.20mg（相當(dāng)于游離肼50g ）的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法（附錄B）試驗，吸取供試品溶液10l 與對照溶液2l，分別點于同一硅膠薄層板（用羧甲基纖維素鈉溶液制備）上，以異丙醇丙醇(3:2) 為展開劑，展開后，

17、晾干，噴以乙醇制對二甲氨基苯甲醛試液，15分鐘后檢視。在供試品主斑點前方與硫酸肼斑點相應(yīng)的位置上，不得顯黃色斑點。 限度：0.02%。2、比濁法JP(14)采用樣品中加水楊酸的乙醇溶液觀察渾濁的方法專屬性差3、差示分光光度法原理：肼對-二甲氨基苯甲醛黃色縮合物（對-二甲氨基苯甲醛連氮）465nm波長有最大吸收異煙肼對-二甲氨基苯甲醛縮合物（對-二甲氨基芐叉） 465nm波長無吸收加入3%丙酮，可使得黃色縮合物（對-二甲氨基苯甲醛連氮）變?yōu)闊o色的二甲基甲酮連氮，繼而作為參比，用于測定A456nm，并以對照品比較法計算游離肼的含量。專屬、準(zhǔn)確、靈敏，最低檢測限可達0.1g/ml。四、含量測定 （一

18、）異煙肼的含量測定 1. 氧化還原滴定法（1）溴酸鉀法 （重點） ChP（2005）原料及制劑反應(yīng)摩爾比 32 原理：異煙肼在強酸性介質(zhì)中可被溴酸鉀氧化為異煙酸，而溴酸鉀被還原為溴化鉀。終點時微過量的溴酸鉀可將粉紅色甲基橙指示劑氧化褪色，以指示終點的到達取標(biāo)示量為100mg的異煙肼片20片，稱得質(zhì)量為2.422g，研細后，精密稱取片粉0.2560g，置100ml量瓶中，加水適量，振搖使異煙肼溶解并稀釋到刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加水50ml，鹽酸20ml與甲基橙指示劑1滴，用溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）滴定，至粉紅色消失，消耗16.10ml。每1ml的溴酸鉀滴定液（0.01000mol/L）相當(dāng)于2.057mg的異煙肼。計算異煙肼的標(biāo)示量百分含量。溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）滴定，至粉紅色消失，消耗16.10ml,實驗中取取續(xù)濾液25ml，實際所有液體為100ml,故應(yīng)用溴酸鉀滴定液：16.10/25*100=64.40ml相