生化反應(yīng)課件

1、生化反應(yīng)生化反應(yīng)生化反應(yīng) 用生化試驗的方法，檢測細(xì)菌對糖、蛋白質(zhì)等基質(zhì)的分解能力和代謝產(chǎn)物，用于鑒別細(xì)菌的反應(yīng)，統(tǒng)稱為生化反應(yīng)。糖醇類發(fā)酵試驗 細(xì)菌可發(fā)酵的基質(zhì) 糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖等） 醇（甘露醇） 糖苷（水楊苷）發(fā)酵后產(chǎn)生的有機酸 乳酸、醋酸、丙酸等發(fā)酵后產(chǎn)生的氣體 甲烷、氫、二氧化碳等糖發(fā)酵試驗原理 細(xì)菌分解糖丙酮酸酸性產(chǎn)物(或產(chǎn)酸產(chǎn)氣)pH 指示劑呈酸性變色(若產(chǎn)氣者有氣泡出現(xiàn))培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管、微量糖發(fā)酵管試劑：溴甲酚紫(6.85.2 紫黃)應(yīng)用：觀察細(xì)菌對糖的分解情況，常用于腸道桿菌的鑒定糖發(fā)酵試驗結(jié)果判斷反應(yīng)現(xiàn)象結(jié)果描述黃色、有氣泡分解糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣黃色、無氣泡+分解糖產(chǎn)酸培養(yǎng)基

2、不變色-不分解糖糖發(fā)酵試驗溴甲酚紫指示劑V.P.試驗甲基紅試驗（M.R.試驗）細(xì)菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖，所產(chǎn)生的丙酮酸，可被進(jìn)一步代謝。丙酮酸代謝途徑的不同，可通過V.P. 和M.R. 這一對實驗進(jìn)行鑒別。甲基紅試驗葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水試劑：甲基紅試劑(PH4.46.2 紅黃 )結(jié)果：培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+ 培養(yǎng)基不變色： 應(yīng)用：是腸道桿菌常用的生化反應(yīng)試驗，主要見于大腸肝菌與產(chǎn)氣桿菌的鑒別V-P試驗原理：細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中乙酰甲基甲醇被氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基結(jié)合，生成紅色化合物。培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨

3、水結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+ 培養(yǎng)基不變色： 應(yīng)用：主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌氧化/發(fā)酵（O/F）試驗原理：細(xì)菌對糖的代謝分有氧氧化和無氧酵解。糖在有氧環(huán)境下氧化完全，生成CO2和水。在無氧環(huán)境下，進(jìn)行不完全分解（發(fā)酵），生成酸類、醇類和氣體。 發(fā)酵型細(xì)菌在有氧和無氧的環(huán)境中，都可以分解糖。 氧化型（非發(fā)酵菌）細(xì)菌在無氧環(huán)境中，不能分解糖，應(yīng)用：1.葡萄球菌屬 鏈球菌屬的鑒別 O/F 發(fā)酵型 氧化型 2.革蘭陰性桿菌間的鑒別 非發(fā)酵菌 發(fā)酵菌幾類細(xì)菌O/F試驗結(jié)果細(xì)菌葡萄糖 有氧管葡萄糖無氧管糞產(chǎn)堿桿菌（產(chǎn)堿型）-非發(fā)酵菌（氧化型）+-腸桿菌科細(xì)菌（發(fā)酵型）+氧化發(fā)酵試驗（O/

4、F試驗）七葉苷水解試驗1.原理：某些細(xì)菌（如腸球菌）可水解七葉苷，生成葡萄糖和七葉素。七葉素可與培養(yǎng)基中的檸檬酸鐵試劑的二價鐵離子反應(yīng)生成黑色的化合物沉淀，使培養(yǎng)基變黑。2.方法：細(xì)菌接種培養(yǎng)基24h 結(jié)果3.結(jié)果：黑陽性 不變-陰性應(yīng)用應(yīng)用：主要用于腸球菌與其他鏈球菌的鑒別。也可用于革蘭陰性桿菌及厭氧菌的鑒別。 雙糖或三糖鐵試驗原理：用于觀察細(xì)菌對糖的發(fā)酵能力，以及是否產(chǎn)生硫化氫，可初步鑒定細(xì)菌的種屬。雙糖或三糖：葡萄糖、乳糖或葡、乳、蔗糖 葡萄糖:乳糖、蔗糖 1:10指示劑：酚紅(6.88.0 黃紅 )結(jié)果： K/A葡萄糖/乳糖(+/-)，產(chǎn)酸少，斜面因接觸空氣被氧化變紅，底層變酸變黃。

5、紅/黃 A/A葡萄糖/乳糖(+/+) ，產(chǎn)酸大，斜面和底層均成酸性而變黃。 黃/黃 細(xì)菌分解含硫氨基酸，生成硫化氫，遇鐵離子形成黑色的硫化鐵沉淀物。黑 蛋白質(zhì)類代謝試驗靛基質(zhì)試驗硫化氫試驗?zāi)蛩孛冈囼炶蹤此猁}利用試驗氨基酸脫羧酶試驗（賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸）靛基質(zhì)試驗原理：某些細(xì)菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），當(dāng)加入吲哚試劑（對位二甲氨基苯甲醛）后則形成紅色的玫瑰吲哚。培養(yǎng)基：蛋白胨水或半固體（3）方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，于35培養(yǎng)2448h，沿試管壁慢慢加入吲哚試劑。 （4）結(jié)果：于兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽性，無色為陰性。 （5）應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌

6、的鑒定。如ECO、產(chǎn)酸克雷伯菌、普通變形桿菌等靛基質(zhì)試驗硫化氫試驗原理：細(xì)菌分解蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鐵鹽或鉛鹽結(jié)合生成黑色絡(luò)合物。培養(yǎng)基：含硫酸亞鐵或醋酸鉛的培養(yǎng)基結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不變黑為陰性應(yīng)用：常用于腸道桿菌的鑒定 沙門菌屬、愛德華菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬細(xì)菌，絕大多數(shù)硫化氫陽性 尿素酶試驗原理：產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培養(yǎng)基呈堿性變色。培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基試劑：酚紅指示劑(6.88.0 黃紅) 結(jié)果：培養(yǎng)基變紅：+ 培養(yǎng)基不變色應(yīng)用：腸桿菌科屬間鑒定奇異變形桿菌和普通變形桿菌脲酶陽性、雷氏普羅威登菌和摩根菌為陽性 、布氏桿

7、菌等尿素酶試驗原理尿素尿素酶氨+CO2培養(yǎng)基pH升高酚紅呈堿性變色尿素酶試驗枸櫞酸鹽利用試驗原理枸櫞酸鹽銨鹽碳酸鹽氨鹽培養(yǎng)基PH上升溴麝香草酚藍(lán) 呈堿性變色培養(yǎng)基變藍(lán) 培養(yǎng)基枸櫞酸鹽利用試驗氨基酸脫羧酶試驗（賴aa、鳥aa、精aa水解）原理：細(xì)菌產(chǎn)生的脫羧酶可使氨基酸脫掉羧基，生成胺和CO2，胺可使培養(yǎng)基PH升高，指示劑變色。（1）賴氨酸：脫羧生成尸胺和CO2（2）鳥氨酸：脫羧產(chǎn)生腐胺和CO2（3）精氨酸：脫羧形成精胺和CO2指示劑：溴甲酚紫 （5.26.8 黃紫紅 )結(jié)果：紫：陽性 黃陰性應(yīng)用：沙門菌屬中除傷寒和雞沙門菌外，其余沙門菌的賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶均為陽性。志賀菌屬除宋內(nèi)和鮑氏志賀菌

8、外，其他志賀菌均為陰性。 氨基酸脫羧酶試驗（賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸）腸桿菌科作為推測性鑒定的重要生化反應(yīng)I M Vi C TSI動力 脲酶 賴鳥精H2S 疑 似 菌+ + - - A/A +-+大腸桿菌- - + +A/A +產(chǎn)氣桿菌- - + +A/A +陰溝桿菌- - + +A/A -+-肺炎克雷伯- +-+/-K/A /+-+沙門菌屬+ + - -K/A +-志賀菌屬- - + +K/A+粘質(zhì)沙雷菌I M Vi C + + - -不活潑大腸桿菌與痢疾志賀氏的鑒別菌 名乳糖動力賴甘露醇不活潑大腸艾希氏遲緩-+痢疾志賀氏-i - - + +肺炎克雷伯與陰溝桿菌、產(chǎn)氣桿菌、粘質(zhì)沙雷菌的鑒別菌 名TSI賴鳥精動力肺炎克雷伯A/A-產(chǎn)氣桿菌A/A陰溝桿菌A/A粘質(zhì)沙雷K/A 克雷伯菌屬鑒別的關(guān)鍵性試驗菌 名IC丙二酸鹽肺炎克雷伯-+產(chǎn)酸克雷伯+鼻硬結(jié)克雷伯-+臭鼻克雷伯-沙雷氏菌屬間鑒別阿拉伯糖木 糖鳥 氨 酸粘質(zhì)沙雷-+液化沙雷+紅色沙雷+-變形桿菌屬的關(guān)鍵性生化試驗菌名I鳥VP奇異變形桿菌-+普通變形桿菌+-潘氏變形桿菌-產(chǎn)粘變形桿菌-+洋蔥、嗜麥芽生化反應(yīng)菌名甘露醇氧化酶DNA 洋蔥伯克+-嗜麥芽-+不動桿菌屬鑒別的關(guān)鍵性試驗菌 名精氨酸枸櫞酸鹽丙