中藥制劑分析第四章含量測(cè)定課件

1、中藥制劑分析第四章含量測(cè)定中藥制劑分析第四章含量測(cè)定【目的要求】掌握中藥制劑含量測(cè)定的樣品前處理方法及測(cè)定方法的效能指標(biāo)。掌握可見-紫外分光光度法、TLCS、HPLC、 GC在中藥制劑分析中的應(yīng)用。熟悉熒光分光光度法及原子吸收光度法在中藥制劑分析中的應(yīng)用。了解雙波長(zhǎng)、三波長(zhǎng)、差示、導(dǎo)數(shù)光譜法在中藥制劑分析中的應(yīng)用。藥物分析學(xué)科【目的要求】藥物分析學(xué)科1 樣品的處理樣品處理的主要作用釋放被測(cè)組分，制成穩(wěn)定試樣除去雜質(zhì)，純化濃縮試樣形式符合測(cè)定的要求一、樣品的粉碎目的取樣均勻，提取完全粉碎設(shè)備粉碎機(jī)、研缽、勻漿機(jī) 粒度大小合適，全部過篩 防止污染或損失藥物分析學(xué)科1 樣品的處理樣品處理的主要作用藥

2、物分析學(xué)科1 樣品的處理樣品處理的主要作用釋放被測(cè)組分，制成穩(wěn)定試樣除去雜質(zhì)，純化濃縮試樣形式符合測(cè)定的要求一、樣品的粉碎目的取樣均勻，提取完全粉碎設(shè)備粉碎機(jī)、研缽、勻漿機(jī) 粒度大小合適，全部過篩 防止污染或損失藥物分析學(xué)科1 樣品的處理樣品處理的主要作用藥物分析學(xué)科1 樣品的處理二、樣品的提取（一）冷浸法操作：樣品精密稱定置容器內(nèi)精密加入溶劑稱定重量 浸泡（1224h）稱重補(bǔ)足重量測(cè)定測(cè)定方法：全部測(cè)定法：過濾濾液蒸干定容測(cè)定（低濃）部分測(cè)定法：過濾濾液取若干體積進(jìn)行測(cè)定（高濃）優(yōu)缺點(diǎn)及適用范圍：操作簡(jiǎn)便，適用于熱不穩(wěn)定的樣品，提取雜質(zhì)較少，但是費(fèi)時(shí)，費(fèi)溶劑藥物分析學(xué)科掌握每種提取方法的操作

3、、優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用范圍1 樣品的處理二、樣品的提取藥物分析學(xué)科掌握每種提取方法的1 樣品的處理二、樣品的提?。ǘ┗亓魈崛》ú捎没亓餮b置，用單一溶劑或混合溶劑于水浴上加熱提取優(yōu)缺點(diǎn)及適用范圍：提取效率高，提取時(shí)間短，為0.52小時(shí)；提取雜質(zhì)較多，不適用于熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的成分（三）連續(xù)回流提取用索氏提取裝置，少用混合溶劑，其余操作同回流提取法。 優(yōu)缺點(diǎn)及適用范圍：提取效率高，所需溶劑少，提取雜質(zhì)較少操作簡(jiǎn)便；不適用于受熱易分解的成分。藥物分析學(xué)科1 樣品的處理二、樣品的提取藥物分析學(xué)科1 樣品的處理二、樣品的提?。ㄋ模┏曁崛》悠分萌萜髦校尤胩崛∪軇?，放入超聲振蕩器中進(jìn)行提取 優(yōu)缺點(diǎn)及適用

4、范圍：提取效率高，速度快30min；超聲波可引起化學(xué)成分的改變 （五）超臨界流體提取法（SFE）優(yōu)點(diǎn)：速度快、萃取效率高、方法準(zhǔn)確度高、選擇性高、節(jié)省溶劑、易于自動(dòng)化，而且可避免使用易燃，有毒的有機(jī)溶劑，能與色譜和光譜等分析儀器直接聯(lián)用 藥物分析學(xué)科1 樣品的處理二、樣品的提取藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化（1）沉淀法樣品+沉淀劑 沉淀過濾濾液測(cè)定 沉淀重量法或溶解后測(cè)定藥物分析學(xué)科處理樣品的核心復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測(cè)定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部分有機(jī)堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。 1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科處理樣品

5、的核心1 樣品的處理三、樣品的分離純化（2）蒸餾法適用于具揮發(fā)性的待測(cè)組分，如揮發(fā)油、小分子的生物堿、丹皮酚等最常用的水蒸氣蒸餾法：共水蒸餾法通水蒸氣蒸餾法水上蒸餾法利用鹽析作用，提高蒸餾效果藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化（3）液-液萃取法直接萃取法萃取劑的選擇：親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚； 弱親脂性的溶劑，如乙酸乙酯、正丁醇等多次萃取（3-4次）調(diào)整水相酸度，提取有機(jī)酸、有機(jī)堿利用鹽析作用，提高提取率藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化（3）液-液萃取法離子對(duì)萃取法 BH+ I

6、n- BH+In-（水相） BH+In-（有機(jī)相） 適合于高度電離的有機(jī)酸、堿化合物的萃水相酸度的控制離子對(duì)試劑的選擇有機(jī)溶劑的選擇藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化（4）色譜法（層析法）分離原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱操作程序：柱的活化；上樣；清洗；洗脫。微柱色譜（固相萃?。┲盍希汗枘z、氧化鋁、氧化鎂、活性炭、聚酰胺、大孔硅 藻土、離子交換樹脂、鍵合相硅膠C8、C18等 藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純

7、化（4）色譜法（層析法）硅膠：酸性吸附劑，適用于中性或酸性成分的層析，強(qiáng)烈保留堿性化合物洗脫順序：極性小大氧化鋁：弱堿性，分離一些堿性中草藥成分，不宜用于醛、酮、酸、內(nèi)酯等類型的化合物分離中性氧化鋁、酸性氧化鋁：適用于中性、酸性成分的分離鍵合相硅膠（C18或ODS）：分開脂溶性和水溶性成分洗脫順序：極性大小藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化（4）色譜法（層析法）大孔樹脂：分為極性（丙烯酰胺聚合物 ）和非極性（苯乙烯和二乙烯苯的共聚物）型非極性型（XAD-2等）：分開脂溶性和水溶性成分 使用前需要用有機(jī)溶劑除去雜質(zhì)，有時(shí)還需用酸、堿清洗 聚酰

8、胺：與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用于含酚、酸、醌類藥物樣品液的凈化分離硅藻土、纖維素：以水基質(zhì)液作為固定相，與水不混溶的有機(jī)溶劑為流動(dòng)相的分配色譜藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化（4）色譜法（層析法）離子交換樹脂：用于除去樣品中的離子及萃取可離解化合物(弱酸、弱堿藥物)（5）固相微萃取（SPME）集萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體的樣品前處理新方法藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化（6）消化法-測(cè)定中藥制劑中的無機(jī)元素目的：破壞有機(jī)物，使無機(jī)物游離濕法消化：硝酸-高氯酸法：適用于血，尿、組織

9、等生物樣品和含動(dòng)植物藥制劑的破壞，無機(jī)金屬離子均為高價(jià)態(tài)。 對(duì)含氮雜環(huán)類有機(jī)物破壞不夠完全。 硝酸-硫酸法：適用于大多數(shù)有機(jī)物的破壞。 與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測(cè)定，不宜采有此法。 硫酸-硫酸鹽法：常用于含砷或銻的有機(jī)樣品的破壞，破壞后得到三價(jià)砷或銻。藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科1 樣品的處理三、樣品的分離純化（6）消化法-測(cè)定中藥制劑中的無機(jī)元素目的：破壞有機(jī)物，使無機(jī)物游離干法消化：供試品 灰分 控制溫度在420以下不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等，）有機(jī)樣品的破壞。如果灰化不完全，可以加入硝酸-水（1：3）或稀鹽酸-水（1：3）水浴上蒸干后，繼續(xù)小

10、火灰化藥物分析學(xué)科灼燒灰化(+NaCO3/MgO)1 樣品的處理三、樣品的分離純化藥物分析學(xué)科灼燒灰化(+N2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目1. 鑒別試驗(yàn)；2. 雜質(zhì)定量或限度檢查；3. 原料或制劑中有效成分含量測(cè)定；4. 制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測(cè)定；5. 溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測(cè)試方法。藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度是指以測(cè)得結(jié)果與真實(shí)值之間的接近程度。由于真實(shí)值是未知的，故常用回收率試驗(yàn)來表示。二、精密度是指一種均勻樣品經(jīng)多次取樣重復(fù)分析后，各次結(jié)果之間的符合程度。常用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏

11、差表示。重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證1. 重復(fù)性 在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次；或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)。2. 中間精密度 同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機(jī)變動(dòng)因素的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。3. 重現(xiàn)性 不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如建立藥典分析方法時(shí)通過協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)

12、同檢驗(yàn)的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證1. 重復(fù)性 在相同條件下，由同一2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證三、專屬性是指在樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確，專一地測(cè)定分析物的能力。四、檢測(cè)限檢測(cè)限是指在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下，分析方法能夠檢測(cè)（但不需要定量）樣品中分析物的最低濃度。1非儀器分析目視法用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。2. 信噪比法藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證三、專屬性藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證五、定量限是指在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下和具有可接受的精密度和準(zhǔn)確度前提下，分析方法能夠測(cè)定樣品中分析物的最低濃度。六、線

13、性七、范圍八耐用性是指測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的程度為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。衡量方法不受參數(shù)微小變差影響的能力。藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證五、定量限藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證分析方法效能指標(biāo)的要求1、用于鑒別試驗(yàn)：只對(duì)專屬性、耐用性二項(xiàng)指標(biāo)有所要求，其余均無須要求2、雜質(zhì)測(cè)定或制劑中降解物測(cè)定：當(dāng)用于定量除檢測(cè)限不必要求外，其余七項(xiàng)指標(biāo)均應(yīng)有所要求；用于限度檢查只對(duì)專屬性、檢測(cè)限、和耐用性有要求。3、用于原料藥中主成分或制劑中有效成分含量測(cè)定及溶出度測(cè)定，除了檢測(cè)限和定量限外，其余均要求。藥物分析學(xué)科2 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證分析方法效能指標(biāo)的要求藥物分析學(xué)科3 常用定量

14、分析方法一、化學(xué)分析法適用于含量較高的成分及無機(jī)成分的測(cè)定（一）重量分析揮發(fā)法：如水分測(cè)定萃取法：如冰片散中冰片的含量測(cè)定沉淀法：如苦參片中苦參總堿的含量測(cè)定3 常用定量分析方法一、化學(xué)分析法3 常用定量分析方法一、化學(xué)分析法（二）滴定分析酸堿滴定法：、內(nèi)酯類 沉淀滴定法測(cè)定生物堿、有機(jī)酸銀量法：生物堿的氫鹵酸鹽及有機(jī)鹵化物四苯硼鈉法：+生物堿白色沉淀配位滴定法（EDTA法和硫氰酸銨法）：測(cè)定鞣質(zhì)、生物堿及Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等礦物類制劑的含量氧化還原滴定法：酚類、糖類及礦物藥中Fe、As等3 常用定量分析方法一、化學(xué)分析法3 常用定量分析方法二、可見-紫外分光光度法（一）單

15、波長(zhǎng)分光光度法1、吸收系數(shù)法（CHP最為常用）例題左金丸的含測(cè) A=ECL（百分吸收系數(shù)，單位g/100ml） 朗伯-比爾定律：物質(zhì)對(duì)單色光吸收特性與濃度、液層厚度關(guān)系定律 2、對(duì)照品比較法 對(duì)照品溶液濃度應(yīng)與供試品濃度接近（10010）3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法3 常用定量分析方法二、可見-紫外分光光度法3 常用定量分析方法二、可見-紫外分光光度法（二）計(jì)算分光光度法1、雙波長(zhǎng)分光光度法系數(shù)倍率法等吸收點(diǎn)法2、三波長(zhǎng)分光光度法討論：計(jì)算分光光度法在中藥及其制劑中的應(yīng)用前景3 常用定量分析方法二、可見-紫外分光光度法雙波長(zhǎng)分光光度法 在單位時(shí)間內(nèi)有兩條波長(zhǎng)不同的光束1和2交替照射同一個(gè)溶液，由檢測(cè)器測(cè)出的

16、吸收度是這兩個(gè)波長(zhǎng)下吸收度的差值A(chǔ)。A與被測(cè)定物質(zhì)的濃度成正比，這個(gè)方法稱雙波長(zhǎng)分光光度法。雙波長(zhǎng)分光光度法的關(guān)鍵是正確選擇兩波長(zhǎng)1、2，要求被測(cè)組分D在兩波長(zhǎng)處的A足夠大，而干擾組分G和背景在兩波長(zhǎng)應(yīng)有相同的吸光度(A=0)。為滿足上述要求，一般是將2選在待測(cè)組分的最大吸收波長(zhǎng)，1是選在干擾組分等吸收波長(zhǎng)。此法可測(cè)定渾濁樣品，也可測(cè)定吸收光譜相互重疊的混合物樣品，也是當(dāng)雜質(zhì)使主峰產(chǎn)生肩峰時(shí)測(cè)定主峰物質(zhì)的較好定量方法。雙波長(zhǎng)分光光度法 在單位時(shí)間內(nèi)有兩條波長(zhǎng)不同的光束三波長(zhǎng)分光光度法選定的三個(gè)波長(zhǎng)在干擾物質(zhì)的吸收光譜上應(yīng)為一條直線。在三波長(zhǎng)處分別測(cè)定混合物的吸光度A1、A2、A3，根據(jù)相似三角

17、形的等比特性，可得下式：E1、E2、E3分別為待測(cè)組分在三個(gè)波長(zhǎng)處的吸光系數(shù)，L為光程，Cx為待測(cè)組分濃度。m=2-3，n=1-2，可見A只與待測(cè)組分濃度有關(guān)。本法可有效消除干擾組分對(duì)待測(cè)組分測(cè)定的干擾，尤其適用于渾濁樣品分析。但三波長(zhǎng)選擇及結(jié)果計(jì)算較為費(fèi)時(shí)。目前已有些紫外儀器裝備了專用程序，自動(dòng)完成三波長(zhǎng)法的運(yùn)算。A=A1-K（A2+A3)三波長(zhǎng)分光光度法選定的三個(gè)波長(zhǎng)在干擾物質(zhì)的吸收光譜上應(yīng)為一條3 常用定量分析方法三、薄層掃描法TLCS（一）薄層吸收掃描法光源：氘燈(190-340nm)和W燈(340-900nm 薄層板引起的散射現(xiàn)象（散射系數(shù)SX）標(biāo)準(zhǔn)曲線（Kubella-Munk曲線

18、）彎曲校正（曲線校直法和計(jì)算機(jī)回歸法）（二）薄層熒光掃描法光源：汞燈(250-580nm)直線式掃描，無需曲線校直藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法三、薄層掃描法TLCS藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法三、薄層掃描法TLCS（三）定量分析方法1、方法學(xué)考察工作曲線：檢查所選散射參數(shù)SX是否適宜；考察工作曲線是否過原點(diǎn)，以便確定是用外標(biāo)一點(diǎn)法還是二點(diǎn)法測(cè)定；確定點(diǎn)樣量的線性范圍。 分離度：R1.0重復(fù)性考察：RSD3%準(zhǔn)確度考察：95%105%2、定量方法（討論常用定量方法）外標(biāo)法：一點(diǎn)法、兩點(diǎn)法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法內(nèi)標(biāo)法藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法三、薄層掃描法TLCS藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方

19、法三、薄層掃描法TLCS健脾丸中熊果酸的含量測(cè)定含量測(cè)定 取小蜜丸或重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約4g，精密稱定，加水30ml，放置使溶散，濾過，殘?jiān)盟?0ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟粉末狀或低溫干燥后研細(xì)，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔眩?060）浸泡兩次，每次10ml（浸泡約2分鐘），傾去石油醚，殘?jiān)舆m量三氯甲烷-無水乙醇（2:3）混合液使溶解，轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄VI B）

20、試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液4ul與6ul，對(duì)照品溶液2ul與4ul，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（20:5:8:0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)S=540nm，R=700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。本品含山楂以熊果酸（C30H48O3）計(jì)，小蜜丸每1g不得少于0.10mg；大蜜丸每丸不得少于0.90mg。藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法三、薄層掃描法TLCS藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜

21、法GC（一）應(yīng)用范圍揮發(fā)油及其它揮發(fā)性組分：冰片、桉葉素、樟腦、丁香酚、龍腦等中藥制劑含水量、含醇量（二）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)理論塔板數(shù) n5.54(tR/W1/2)2 最小理論塔板數(shù)，柱長(zhǎng)，柱填充、載體性能等有影響分離度 R=2(tR1-tR2)/(W1+W2) R1.5（兩峰完全分離）重復(fù)性，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD2.0 (n=5)拖尾因子T=W0.05h/2d1 (d1峰極大至峰前沿之間的距離) 1.05T0.95藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜法GC藥物分析學(xué)科樣品沸點(diǎn)范圍柱溫固定相配比300400 200250 15% 200300 150180 510% 100200 各組分的平

22、均沸點(diǎn)2/3左右 1015% 氣體等低沸點(diǎn)樣品 室溫或50下 1525% 3 常用定量分析方法四、氣相色譜法GC（三）實(shí)驗(yàn)條件的選擇1、固定相的選擇氣固色譜硅膠、石墨、化學(xué)鍵合相、高分子多孔微球等氣液色譜烴類、硅氧烷類、醇類、酯類，特殊固定液（手性）2、柱溫的選擇藥物分析學(xué)科寬沸程樣品：程序升溫法樣品沸點(diǎn)范圍柱溫固定相配比300400 2002503 常用定量分析方法四、氣相色譜法GC（三）實(shí)驗(yàn)條件的選擇3、載氣的選擇H2、He：流速大，柱長(zhǎng)，熱導(dǎo)檢測(cè)器N2：流速小，氫焰檢測(cè)器，電子捕獲檢測(cè)器 流速：2080ml/min4、其它條件的選擇進(jìn)樣方式：直接進(jìn)樣、頂空進(jìn)樣（兼有分離分析作用）進(jìn)樣口（

23、汽化室）溫度：樣品的沸點(diǎn)或稍高于沸點(diǎn)，30/ 50+T柱T汽 50+T沸點(diǎn)檢測(cè)室溫度：30+T柱T檢T汽藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜法GC藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜法GC（三）實(shí)驗(yàn)條件的選擇4、其它條件的選擇進(jìn)樣時(shí)間：1秒以內(nèi)進(jìn)樣量：理論允許最大進(jìn)樣量使下降的塔板數(shù)不超過10。氣體：0.11ml；液體：0.1-1l分流器分流進(jìn)樣：1/101/100檢測(cè)器：TCD, FID, NPD, ECD藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜法GC藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜法GC（四）含量測(cè)定方法（例題見P84）1、內(nèi)標(biāo)法加校正因子 求算校正因子 待

24、測(cè)組分含量測(cè)定2、外標(biāo)法3、面積歸一化法4、標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法四、氣相色譜法GC藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法五、高效液相色譜法HPLC（一）特點(diǎn)分離效能高、分析速度快及應(yīng)用范圍廣（二）適用范圍揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物及離子型化合物，如蛋白質(zhì)、氨基酸、生物堿、甾體、類脂、核酸、維生素及無機(jī)鹽類 （三）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法五、高效液相色譜法HPLC藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法五、高效液相色譜法HPLC（四）實(shí)驗(yàn)條件的選擇色譜柱的選擇（固定相的選擇） 流動(dòng)相的選擇優(yōu)級(jí)純或色譜純，脫氣，過濾（0.45m）部分含水溶劑：適

25、用于分離中等極性、弱極性藥物非水溶劑：分離疏水性物質(zhì) 緩沖溶液：適用于可溶于水并具可解離特性的化合物，如蛋白質(zhì)、肽及弱酸、弱堿類化合物。 洗脫方式：等度洗脫與梯度洗脫檢測(cè)器：UVD, FD, ELSD, ECD,RID 藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法五、高效液相色譜法HPLC藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法五、高效液相色譜法HPLC（五）含量測(cè)定方法1、外標(biāo)法2、內(nèi)標(biāo)法3、內(nèi)加法4、歸一化法 例題P90藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法五、高效液相色譜法HPLC藥物分析學(xué)科3 常用定量分析方法六、熒光分析法（一）基本原理（二）適用范圍胺類、甾體、蛋白質(zhì)、氨基酸、酶（三）測(cè)定方法直接熒光法、制備熒光法、化學(xué)引導(dǎo)熒光法、熒光淬滅法、膠束增敏熒光法（四）優(yōu)缺點(diǎn)靈敏度高（10101012g/ml）選擇