血清總膽固醇酶試劑法測定法

1、血清總膽固醇酶試劑法測定法實驗原理膽固醇酯酶(CHE)、膽固醇氧化酶(CHO)、過氧化物酶(POD)、Trinder反應(yīng)偶聯(lián)比色終點法。反應(yīng)式如下： CHE膽固醇酯 + H2O 膽固醇脂肪酸 CHO膽固醇 O2 4-膽甾烯酮H2O2 POD2H2O2 + 4-氨基安替比林 + 苯酚 醌亞胺(顯色) + 4H2O2. 標(biāo)本：2.1 病人準(zhǔn)備：12小時禁食。2.2 類型：血清，肝素或EDTA抗凝血漿。3. 標(biāo)本存放：血清穩(wěn)定性：2025保存可穩(wěn)定1周；48保存可穩(wěn)定1周；-20保存可穩(wěn)定3個月。4. 標(biāo)本運(yùn)輸：常溫條件下保存運(yùn)輸。5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染的標(biāo)本。6. 實驗材料6.1 試劑 威特

2、曼總膽固醇試劑盒 試劑1 試劑2 6.1.1 試劑準(zhǔn)備 試劑為即用式。6.1.2 試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑保存于28，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。6.1.3 變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見的微生物生長，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。6.1.4 注意事項：試劑中含疊氮鈉（0.95g/L）為防腐劑。不可入口！避免接觸皮膚及粘膜。應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑6.2 校準(zhǔn)品：使用奧林巴斯公司提供的校準(zhǔn)品對自動分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，具體參見生化檢驗校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3 質(zhì)控品：具體參見生化檢驗校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。7. 儀器：奧林巴斯AU2700生化分

3、析儀8. 操作步驟8.1 項目基本參數(shù)：參見AU2700生化分析儀項目測定參數(shù).SOP文件8.2儀器操作步驟：參見AU2700生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9. 檢驗結(jié)果的判斷與分析10. 質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11. 計算方法：以TruCal U復(fù)合校準(zhǔn)品總膽固醇校準(zhǔn)值校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報告范圍內(nèi)，儀器直接報告可靠檢測結(jié)果。12. 參考值范圍（mmol/L）合適范圍： 5.2mmol/L高度危險臨界值： 5.26.2mmol/L高

4、度危險范圍： 6.2mmol/L13. 臨床意義：膽固醇由體細(xì)胞合成和來自對食物的吸收1，是細(xì)胞膜的組分和類固醇激素、膽汁酸的前體。血液中的脂蛋白是脂肪和載脂蛋白的復(fù)合物，由它轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇。脂蛋白有四種形式：高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），極低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒。LDL參與將膽固醇運(yùn)送至外周細(xì)胞，而HDL負(fù)責(zé)從細(xì)胞中吸收膽固醇。四種形式的脂蛋白與冠狀動脈粥樣硬化有著明確的關(guān)系。低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）作用于動脈內(nèi)膜形成動脈粥樣硬化斑塊，與冠心病(CHD)以及相關(guān)的死亡率有著非常密切的關(guān)系。即使總膽固醇在正常范圍內(nèi)，LDL-C濃度的升高也預(yù)示了高度危險。HDL

5、-C 具有抵御斑塊形成的作用，它與冠心病的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)。事實上，低HDL-C值是獨立的危險因子。進(jìn)行個體總膽固醇的檢測只是起過篩作用，如果要對危險作較好的評估，必須另外進(jìn)行HDL-C和LDL-C檢測。近年來，通過控制飲食、改變生活方式的治療、和/或使用各種藥物治療(特別他汀類藥物HMG CoA還原酶抑制劑)臨床試驗，說明了降低總膽固醇和LDL-C水平可極大地減少CHD的危險。14. 操作性能14.1 線性范圍：0.0819.4mmol/L。14.2 精密度：精密度的評估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU2700批內(nèi)精密度小于3%，總精密度小于3%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCC

6、LS的規(guī)則。批內(nèi)精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)批間精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)樣品12.790.0461.65樣品12.690.0311.15樣品26.100.0370.61樣品25.460.0661.21樣品36.570.0410.62樣品36.340.0590.9314.3 方法學(xué)比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時對78個樣品進(jìn)行CHOL檢測，將檢測結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計結(jié)果如下：y=1.00 x+0.065mmol/L；r =0.995。14.4 靈敏度：本試劑的檢測限為0.08mmol/L。14.5 病人結(jié)

7、果可報告范圍：0.0819.4mmol/L。15. 超出范圍結(jié)果處理：本法對膽固醇的檢測范圍為0.0819.4mmol/L。當(dāng)樣品測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用9g/L氯化鈉溶液作1+4稀釋，重新測定，結(jié)果乘以5。16. 病危報警值的處理：高度危險范圍6.2mmol/L。17. 方法局限性17.1 本法對膽固醇的檢測范圍為0.0819.4mmol/L。當(dāng)樣品測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用9g/L氯化鈉溶液作1+4稀釋，重新測定，結(jié)果乘以5。17.2 干擾物質(zhì)：當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度2840mol/L，膽紅素濃度342mol/L，血紅蛋白濃度2.00g/L，甘油三酯濃度22.6mmol/L時沒有觀察到

8、干擾。18. 補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。19. 參考文獻(xiàn)1.Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.809-61.2.Recommendation of the Second Joint Task Forc

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