人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述

1、人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述中山大學(xué)從屬第一醫(yī)院徐艷文人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第1頁(yè)人工授精夫精人工授精贈(zèng)精人工授精常規(guī)體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）常規(guī)體外受精單精子卵胞質(zhì)內(nèi)注射（intracytoplasmic sperm injection, ICSI）射出精睪丸/附睪精植入前遺傳學(xué)診療（preimplantation genetic diagnsosi, PGD）人類輔助生殖技術(shù)人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第2頁(yè)適應(yīng)證男方原因?qū)m頸原因免疫原因女方排卵障礙不明原因性不孕步驟夫精人工授精臨床妊娠率10-15%人類輔

2、助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第3頁(yè)-5-15中山大學(xué)從屬第一醫(yī)院促排卵治療誘發(fā)排卵有排卵障礙情況下以誘發(fā)單個(gè)卵泡或少數(shù)卵泡發(fā)育為目標(biāo)超排卵在可控制范圍內(nèi)誘發(fā)多卵泡發(fā)育和成熟為ART奠定基礎(chǔ)治療對(duì)象很多本身有正常排卵功效人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第4頁(yè)-5-15中山大學(xué)從屬第一醫(yī)院IUI中促排卵作用授精時(shí)間更準(zhǔn)確糾正排卵障礙提供更多可用卵子人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第5頁(yè)適應(yīng)證輸卵管盆腔原因子宮內(nèi)膜異位癥排卵障礙經(jīng)促排卵治療無(wú)效嚴(yán)重少弱畸精癥無(wú)精癥重復(fù)IUI失敗免疫性不孕常規(guī)體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概

3、述第6頁(yè)步驟藥品促排卵經(jīng)陰道穿刺取卵體外授精胚胎培養(yǎng)胚胎移植胚胎冷凍新鮮周期失敗后解凍胚胎移植常規(guī)體外受精-胚胎移植in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第7頁(yè)GnRH激動(dòng)劑：達(dá)必佳，達(dá)菲林GnRH拮抗劑：加尼瑞克，思則凱Gn：重組FSH：果納芬，普麗康尿源性FSH：麗申寶，福特蒙尿源性FSH和LH：賀美奇，HMG主要藥品人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第8頁(yè)促排卵方案-短效長(zhǎng)方案GnRH-a 0.1mg qd月經(jīng)第二十天黃體中期GnRH-a 0.05mg qdGn14-21天垂體達(dá)降調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時(shí)注射HCG，

4、36hr后取卵人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第9頁(yè)促排卵方案-長(zhǎng)期有效長(zhǎng)方案月經(jīng)第二十天黃體中期GnRH-a 1.3mg單次注射Gn14-21天垂體達(dá)降調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時(shí)注射HCG，36hr后取卵人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第10頁(yè)促排卵方案-拮抗劑方案Gn主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時(shí)注射HCG，36hr后取卵月經(jīng)第2-3天開(kāi)啟促排5-6天加拮抗劑人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第11頁(yè)ART臨床治療風(fēng)險(xiǎn) 穿刺并發(fā)癥 血栓栓塞 妊娠相關(guān)并發(fā)癥 其它風(fēng)險(xiǎn)人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第12頁(yè)經(jīng)陰道穿刺取卵術(shù)并發(fā)癥嚴(yán)重并發(fā)癥（0.5%-1.5%）陰道出血100ml 0.8%盆腔感染 0.6%盆腔膿腫卵巢扭轉(zhuǎn)盆腔出血卵巢

5、過(guò)分刺激綜合征人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第13頁(yè)取卵術(shù)后卵巢改變非常脆輕易撕裂經(jīng)過(guò)測(cè)定Hb和Hct改變，推測(cè)通常取卵術(shù)后平均出血量232130 mL防止在卵巢內(nèi)橫向擺動(dòng)人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第14頁(yè)卵巢過(guò)分刺激綜合征（ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS） -促排卵最嚴(yán)重醫(yī)源性并發(fā)癥 -正常妊娠中罕見(jiàn) *發(fā)生率: - 輕度： 8 23% - 重度： 3.5-8% COH - 輕中度：7.3% - 重度： 4.2% 人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第15頁(yè)病理及臨床表現(xiàn)體液外滲毛細(xì)血管通透性增加胸水、腹水、心包積液、全身水腫低血容量血液濃縮高凝狀態(tài)腎灌注降低少尿

6、、無(wú)尿電解質(zhì)紊亂血栓形成氮質(zhì)血癥腹脹、惡心、嘔吐咳嗽、氣促人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第16頁(yè)卵巢過(guò)分刺激綜合征（ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS）臨床表現(xiàn)卵巢體積顯著增大血液濃縮，腹腔積液，胸腔積液少尿電解質(zhì)紊亂血栓形成、ARDS及多器官功效衰竭 人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第17頁(yè)OHSS分度分類卵巢大小癥狀輕度5-10cm1級(jí)：腹脹不適 2級(jí)：1級(jí)癥狀+惡心、嘔吐及/或腹瀉 中度10cm3級(jí)：2級(jí)癥狀+超聲確定腹水4級(jí)：3級(jí)癥狀+腹水、胸水臨床表現(xiàn)和呼吸困難 重度12cm5級(jí)：4級(jí)癥狀+血液濃縮，血粘度增加、低血容量，腎灌注降低及少尿 人類輔助生殖技

7、術(shù)應(yīng)用概述第18頁(yè)OHSS分度依據(jù)OHSS發(fā)生時(shí)間，又分為早發(fā)型OHSS和晚發(fā)型OHSS早發(fā)型發(fā)生在HCG后37天，其發(fā)生與卵巢對(duì)促性腺激素反應(yīng)性相關(guān)，而且被外源性HCG激發(fā)晚發(fā)型HCG后1217天，多伴有多胎妊娠，系內(nèi)源性HCG所致晚發(fā)型OHSS程度往往比早發(fā)型嚴(yán)重 人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第19頁(yè)體外授精-胚胎移植試驗(yàn)室步驟人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第20頁(yè)試驗(yàn)室儀器設(shè)備試驗(yàn)室質(zhì)控體外授精胚胎培養(yǎng)胚胎移植胚胎冷凍胚胎解凍體外授精-胚胎移植試驗(yàn)室步驟人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第21頁(yè)A、顯微操作系統(tǒng)B、程序冷凍儀及液氮罐C、CO2濃度測(cè)試儀和溫度測(cè)試儀D、電子天平，超純水儀和滲透壓儀E、冰箱F、

8、空氣凈化設(shè)備G、CO2和N2，混合氣體氣瓶試驗(yàn)室儀器和設(shè)備人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第22頁(yè)1、顯微鏡A、相差顯微鏡B、體視鏡C、倒置顯微鏡D、熒光顯微鏡試驗(yàn)室儀器和設(shè)備人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第23頁(yè)IVF工作站試驗(yàn)室儀器和設(shè)備人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第24頁(yè)CO2培養(yǎng)箱：試驗(yàn)室儀器和設(shè)備ThermoK-system G-185Cook MINC Benchtop Incubator人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第25頁(yè)1、質(zhì)量控制：溫度：233 濕度：30 60%氣壓： 10Pa塵埃：百級(jí)（配子操作區(qū)），萬(wàn)級(jí)（胚胎試驗(yàn)室），十萬(wàn)級(jí)（更衣室，取精室）可揮發(fā)有機(jī)物（VOC）： 0.5ppm振動(dòng)，光照及

9、噪音：胚胎培養(yǎng)試驗(yàn)室質(zhì)量控制和管理人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第26頁(yè)2、管理：A、按功效和清潔度分區(qū)B、試驗(yàn)室禁止吃，喝，抽煙以及使用化裝品C、培養(yǎng)箱和溫臺(tái)監(jiān)測(cè)D、冰箱監(jiān)測(cè)E、液氮罐監(jiān)測(cè)胚胎培養(yǎng)環(huán)境質(zhì)量控制和管理人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第27頁(yè)試驗(yàn)室禁止使用酒精等可揮發(fā)性有機(jī)物和紫外照射可用蒸餾水擦拭臺(tái)面可用專用洗滌劑擦拭可能會(huì)被污染臺(tái)面或者區(qū)域可使用吸塵器吸走灰塵培養(yǎng)箱清潔和消毒試驗(yàn)室清潔人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第28頁(yè)1、溫度和濕度：37.00.1，90%2、pH：7.1 pHi 7.2， 7.2 pHe 7.43、氣體：CO2和O24、滲透壓：270 290mOsm/kg胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)人類輔

10、助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第29頁(yè)培養(yǎng)基基本組成水：99%無(wú)機(jī)鹽：維持培養(yǎng)基滲透壓和酸堿度碳水化合物：提供胚胎發(fā)育能量氨基酸：促進(jìn)胚胎體內(nèi)外發(fā)育維生素：調(diào)控細(xì)胞代謝激素和生長(zhǎng)因子：促進(jìn)胚胎發(fā)育大分子物質(zhì)：維持膠體滲透壓，中和毒素抗氧化劑：降低氧自由基對(duì)胚胎損傷螯合劑：螯合重金屬離子抗生素：預(yù)防污染胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第30頁(yè)培養(yǎng)液配制和平衡胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第31頁(yè)人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第32頁(yè)單氣培養(yǎng)：CO2(5-6%)，O2(21%) 和N2(74%)三氣培養(yǎng)：CO2(5-6%)，O2(5%) 和N2(90%)優(yōu)勢(shì)：更靠近生理狀態(tài)（2-8% O2）單氣培養(yǎng)和三氣

11、培養(yǎng)人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第33頁(yè)1、精子形態(tài)結(jié)構(gòu)精子和卵子精子形態(tài)精子變態(tài)示意圖人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第34頁(yè)2、卵子形態(tài)結(jié)構(gòu)卵母細(xì)胞顆粒細(xì)胞復(fù)合體GV 期MI 期MII 期人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第35頁(yè)異常卵母細(xì)胞人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第36頁(yè)1、常規(guī)體外授精體外授精精卵混合精卵結(jié)合人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第37頁(yè)2、卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射（ICSI）人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第38頁(yè)人胚胎體外發(fā)育人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第39頁(yè)異常受精單原核多原核三原核無(wú)原核人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第40頁(yè)胚胎發(fā)育階段：卵裂球數(shù)目胚胎形態(tài)學(xué)評(píng)分：胚胎碎片評(píng)分：卵裂期評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)8-1-18-2-18-2-

12、3人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第41頁(yè)1期：囊胚腔小于胚胎體積二分之一2期：囊胚腔大于胚胎體積二分之一3期：完全囊胚，囊胚腔與胚胎體積相等囊胚發(fā)育階段1期2期3期人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第42頁(yè)4期5期6期4期：擴(kuò)張囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明帶變薄5期：孵化囊胚，胚胎部分孵出6期：完全孵化囊胚人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第43頁(yè)胚胎移植數(shù)目：35歲以下第一周期：2個(gè)35歲以上或者第二周期以上：3個(gè)單胚胎移植：胚胎移植人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第44頁(yè)胚胎移植管裝載胚胎移植管空氣空氣胚胎培養(yǎng)基人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第45頁(yè)1、精子冷凍：2、卵子冷凍：3、胚胎冷凍：4、生殖組織冷凍：配子和胚胎冷凍及復(fù)蘇人

13、類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第46頁(yè)程序化冷凍（慢速冷凍）玻璃化冷凍（快速冷凍）冷凍方法人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第47頁(yè)Slow cooling- 0.3C/min慢速冷凍法將胚胎放入含有一定濃度冷凍保護(hù)劑處理后，慢速降溫（0.23/min ）,在這個(gè)過(guò)程中，伴隨細(xì)胞外溫度逐步降低和細(xì)胞外冰晶形成，細(xì)胞以一個(gè)平衡方式逐步脫水。直到溫度降至-150 ，至于液氮保留。人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第48頁(yè)Vitrification- 50.000C/min1 sec.玻璃化冷凍法采取更高濃度冷凍保護(hù)劑處理細(xì)胞，快速降溫，使細(xì)胞內(nèi)外液體均到達(dá)玻璃化狀態(tài)人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第49頁(yè)玻璃化冷凍過(guò)程（兩步平衡法）

14、在不一樣濃度冷凍液中進(jìn)行平衡ESVS人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第50頁(yè)2.裝管3. 投入液氮，在液氮罐中保留。人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第51頁(yè)冷凍前置入冷凍液后0min置入冷凍液后4min置入冷凍液后8min人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第52頁(yè)囊胚冷凍前人工皺縮皺縮前皺縮后人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第53頁(yè)控制性超排卵B超監(jiān)測(cè)下取卵體外受精和胚胎培養(yǎng)胚胎活檢對(duì)活檢細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)選擇胚胎移植入宮腔植入前遺傳學(xué)診療(PGD)人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述第54頁(yè)常染色體隱性遺傳病-thalassaemiaCystic fibrosisSpinal muscular atrophySickle cell disease常染色體顯性遺傳病Huntingtons diseaseMyotonic dystrophyCharcot-Marie-Tooth disease性染色體遺傳病Fragile X syndromeDMDHaemophiliaPGD適應(yīng)證-單基因性疾病