腫瘤壞死因子基因多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤的 臨床相關關系

1、腫瘤壞死因子基因多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤的 臨床相關關系【關鍵詞】多發(fā)性骨髓瘤腫瘤壞死因子基因多態(tài)性0引言1材料與方法1.1研究對象1組：32例，為2001年4月到2002年6月期間在中山大學第一附屬醫(yī)院、廣東省人民醫(yī)院住院確診的患者,年齡4472歲，中位年齡59歲；2對照組：72例，選自同期獻血員和中山大學第一附屬醫(yī)院教職工，其中男性43名、女性29名，中位年齡24歲。上述所有觀察對象均為廣東漢族,彼此間無親緣關系。1.2TNF、LT基因目的片段多態(tài)性的檢測1.2.1DNA提取兩組均取外周靜脈血1l,EDTA抗凝，NaI法抽提基因組DNA。-80保存。1.2.4N限制性內切酶消化擴增片段取PR擴

2、增產物10l，參加限制性內切酶N購自寶生物公司8U，依說明書參加BSA、10KBuffer兩種緩沖液各2l,37孵育5h，孵育完畢后加2l10LdingBuffer終止反響。兩基因酶切方法和過程一樣。1.2.5凝膠電泳TNF消化產物以8%聚丙烯酰胺凝膠電泳，恒壓450V，電泳2.5h，0.012l/l硝酸銀染色后在凝膠上呈現深棕色條帶，干膠保存。LT消化產物以2.5%瓊脂糖凝膠電泳，100V40in,溴化乙錠EB染色，在紫外燈下觀察結果，攝相保存。1.3診斷及隨訪搜集相關臨床資料，分期、腫瘤量分級按多發(fā)性骨髓瘤診斷標準，制定追蹤表，通過門診或 訪問的形式理解疾病轉歸。每隔半年隨訪一次，隨訪截止

3、時間是2022年4月。生存時間指從確診至隨訪完畢或死亡的時間。1.4統(tǒng)計學分析2結果2.1基因型確實定結果2.1.1TNF-308位點基因型確實定含TNF1等位基因的一條鏈上有NI的識別位點，含TNF2等位基因的一條鏈上無該酶識別位點。故酶切電泳圖譜顯示為：TNF1/1純合子的PR產物被內切酶NI完全切斷，形成87bp和20bp兩條片段，TNF1/2雜合子的PR產物僅局部切斷，形成107bp、87bp及20bp3條片段，TNF2/2純合子由于特異酶切位點的消失，其PR產物因不能被切斷僅形成107bp一個片段。2.1.2LT+252位點基因型確實定LT10.5等位基因的一條鏈上無NI的識別位點，

4、LT5.5等位基因的一條鏈上有該酶識別位點。故酶切電泳圖譜顯示為：LT10.5/10.5純合子的PR產物不能被內切酶NI切斷，僅形成368bp一個片段；LT10.5/5.5雜合子的PR產物僅局部切斷，形成368bp、235bp及133bp3條片段；LT5.5/5.5純合子能被內切酶NI完全切斷，形成235bp和133bp兩條片段。2.2研究樣本的群體代表性2.3兩位點基因多態(tài)性的分布及相關性2.3.1TNF-308位點基因型、等位基因在中的分布對正常對照組和組進展基因型頻率及等位基因頻率的組間比擬，結果顯示在廣東漢族對照組及病人人群中TNF-308位點基因型頻率及等位基因頻率的分布均無顯著性差

5、異。2.3.2LT+252位點基因型、等位基因在中的分布患者三種基因型的頻率與對照相比，差異無顯著性2=0.857,P=0.651,等位基因頻率較正常組差異也無統(tǒng)計學意義高2=0.285,P=0.593。2.3.3TNF-308/LT+252位點結合單倍體分型在和對照組中的分布用2檢驗分析發(fā)現TNF-308/LT+252兩位點各基因型在病人中有相關關系2=12.023，P=0.017。2.4TNF308/LT+252位點結合單倍體分型在組、對照組群中的分布因兩多態(tài)性位點相關且TNF2和LT5.5等位基因可能增加TNF的產量，這促使本研究采用兩位點結合單倍體分型而不是單位點來評估TNF基因多態(tài)性

6、在臨床和預后中的作用。將TNF2和LT5.5等位基因視為高產型等位基因，結合單倍體分析的方法將上述兩位點含兩個及以上高產等位基因的定義為高危型，反之那么為低危型。高危型包括TNF1/2和LT10.5/5.5,TNF2/2和LT10.5/10.5，TNF1/1和LT5.5/5.5，TNF1/2和LT5.5/5.5，TNF2/2和LT10.5/5.5，TNF2/2和LT5.5/5.5；低危型包括TNF1/1和LT10.5/5.5,TNF1/2和LT10.5/10.5，TNF1/1和LT10.5/10.5。對正常組和組進展TNF-308/LT+252位單倍體基因高危型、低危型組間比擬，結果顯示在廣東

7、漢族對照組及病人人群中單倍體基因高危型、低危型分布無顯著性差異。2.5TNF308位和/LT+252單倍體分型與的臨床與預后的相關關系分析3討論本研究分析比擬了結合單倍體分型與病人性別、分期、腫瘤負荷分級、血紅蛋白、血鈣、血肌酐中的分布，沒有發(fā)現單倍體分型與上述臨床指標有關，高危型組病人總生存時間與低危型組比擬無明顯差異，x回歸模型未能得出結合單倍體分型影響預后的結論。這說明病人機體對TNF釋放的遺傳調節(jié)才能在病情的開展演化中不起重要作用。這與最近Neben8的結果有類似之處，他們的研究發(fā)現德國難治性血清中TNF程度及治療預后與TNF基因啟動子-238位多態(tài)性而非-308位多態(tài)性有關。TNF基因有多個多態(tài)性位點，上述研究說明除考慮人種差異外，還應注意其它多態(tài)性位點在發(fā)病和病情開展中的作用。另外，一些研究顯示TNF和LT與HLA基因簇內的另一些等位基因存在連鎖不平衡。ilsn9曾提出308位的TNF2等位基因與HLA-DR3等位基因存在連鎖不平衡，對這些現象的機理還需作進