奧美沙坦通過延髓腹外側(cè)區(qū)AT1受體減弱自發(fā)高血壓大鼠血管緊張素

1、奧美沙坦通過延髓腹外側(cè)區(qū)AT1受體減弱自發(fā)高血壓大鼠血管緊張素【關(guān)鍵詞】延髓腹外側(cè)頭端;自發(fā)性高血壓大鼠;血管緊張素1型受體;奧美沙坦延髓腹外側(cè)頭端區(qū)(RVL區(qū))是交感輸出和血壓調(diào)節(jié)的重要腦區(qū)，承受延髓以上心血管中樞和外周傳入的多種心血管活動信息，起到維持交感緊張性和穩(wěn)定血壓的作用。RVL區(qū)存在多種神經(jīng)遞質(zhì)及其相應(yīng)受體，其中血管緊張素(Ang)及其AT1受體在該區(qū)含量豐富1。AT1受體與Ang結(jié)合興奮該區(qū)血管運(yùn)動神經(jīng)元引起交感活動增加，血壓升高。因此，AT1受體在RVL區(qū)血壓調(diào)節(jié)中起到關(guān)鍵作用。近幾年研究發(fā)現(xiàn)高血壓動物模型和高血壓患者的RVL區(qū)AT1受體密度顯著增加，神經(jīng)元自發(fā)活動也增加2。猜

2、想RVL區(qū)高度表達(dá)的AT1受體在高血壓的形成和維持中起到重要作用3，4。又有研究報(bào)道，自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的RVL區(qū)微量注入AT1受體拮抗劑氯沙坦可以減弱靜注苯腎上腺素引起的升壓反響5，6，說明氯沙坦可能通過阻斷RVL區(qū)AT1受體降低血壓。本課題組曾研究發(fā)現(xiàn)奧美沙坦可以有效減弱RVL區(qū)微量注射谷氨酸引起的升壓反響。因此，設(shè)想長期口服奧美沙坦可以通過抑制腦干心血管中樞AT1受體表達(dá)，減弱RVL區(qū)注射Ang引發(fā)的升壓反響。1材料與方法1.1藥品和儀器奧美沙坦(日本Sanky公司)，Ang(美國Siga公司)，多道生理記錄儀(日本Nihnkhden公司)，立體定位儀(日本Narishige公司

3、)，微操縱儀、微量注射儀(日本Narishige公司)，微電極放大器示波儀(日本Natinal公司)。1.2動物SHR40只，KY大鼠20只(均雄性，1012齡，北京維通利華動物中心)。SHR隨機(jī)分成對照組和奧美沙坦組。奧美沙坦組大鼠飲用水中加有奧美沙坦(30gkg-1d-1)。對照組和KY組大鼠正常飲水。各組大鼠均喂養(yǎng)4，每周測2次鼠尾動脈壓。1.3一般手術(shù)處理隨機(jī)取SHR、奧美沙坦、KY組大鼠各10只，烏拉坦(1.5g/kg)腹腔麻醉。行氣管插管和股動脈、股靜脈插管，動脈導(dǎo)管連接記錄平均動脈壓(AP)及心率(HR)。靜脈補(bǔ)充20%氨基甲酸乙酯(1g/kg)維持麻醉。大鼠取俯臥位，頭部固定于

4、腦立體定位儀上，沿中線切開顱頂至背正中皮膚，去除局部顱骨、硬腦膜及小腦，充分暴露延髓反面。通過電熱毯使肛溫維持在37左右。1.4RVL定位和給藥充分暴露延髓后，根據(jù)Paxins和atsn鼠腦解剖圖譜定位RVL(以延髓閂部為參考點(diǎn)，RVL在頭端1.51.8，中線旁開1.62.0，延髓背側(cè)外表下3.03.4處)。將3根外徑2535的注射微電極安裝在注射用的微操縱儀上，尖端放置到RVL區(qū)，經(jīng)微量注射儀分別向三組大鼠單側(cè)RVL微量注射Ang(100pl/50nl)，注藥速度為1.5nl/in，觀察注藥前后大鼠AP、HR的變化。實(shí)驗(yàn)完畢后，2%偶氮藍(lán)染劑0.1l注入到顯微注射部位，經(jīng)左心室依次快速灌流生

5、理鹽水150l和4%多聚甲醛溶液250l，灌注完畢迅速取腦并放置于4%多聚甲醛溶液中。用冰凍切片機(jī)將延髓作50的冠狀切片，中性紅染色，在顯微鏡下尋找染點(diǎn)，根據(jù)Paxins和atsn鼠腦解剖圖譜驗(yàn)證注射部位。Ang和定位染劑均用人工腦脊液配制。1.5測定RVL內(nèi)AT1受體RNA程度標(biāo)本留置：取SHR、奧美沙坦、KY組大鼠各10只，將其斷頭處死。對照Paxins和atsn圖譜取RVL區(qū)腦組織，液氮速凍。總RNA提取：取200g腦組織，按Trizl(Invitrgen公司，美國)試劑盒說明書操作。用754紫外分光光度計(jì)測定RNA含量。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以xs表示，應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，

6、三組間均數(shù)比擬采用方差分析，兩兩比擬采用q檢驗(yàn)。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1各組血壓狀況奧美沙坦治療46d后，奧美沙坦組大鼠收縮壓逐漸降至110120Hg，隨后血壓始終保持在這個程度。SHR對照組和KY組血壓無明顯變化。見圖1。2.2RVL微量注射Ang后AP和HR的變化單側(cè)RVL微量注射Ang后，AP不同程度升高。2in時(shí)達(dá)頂峰，給藥后15in時(shí)根本恢復(fù)至基線程度。奧美沙坦組AP增幅低于SHR對照組(26.30.75)vs(47.21.41)Hg，P0.01，但高于KY組(26.30.75)Hg，P0.05。注射Ang后三組HR均有升高，增幅分別為SHR對照組(29.30.94)、奧美

7、沙坦組(39.51.66)、KY組(38.72.24)次/in，經(jīng)方差分析，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.3AT1受體RNA的表達(dá)各組AT1受體RNA擴(kuò)增產(chǎn)物平均光密度為：SHR組2.410.37，奧美沙坦組0.940.41，KY組0.810.22。SHR組與奧美沙坦組相比，差異有非常顯著意義(P0.01)，奧美沙坦組與KY組相比，有顯著性差異(P0.05)，見圖2。2.4AT1受體蛋白的表達(dá)各組AT1受體蛋白平均光密度為：SHR組0.930.07，奧美沙坦組0.510.09，KY組0.430.03。SHR組與奧美沙坦組相比，差異有非常顯著意義(P0.01)，奧美沙坦組與KY組相比有

8、顯著性差異(P0.05)，見圖2。3討論近年研究發(fā)現(xiàn)高血壓動物模型RVL區(qū)的血壓調(diào)節(jié)功能和微觀分子明顯受損。RVL區(qū)明顯增強(qiáng)的交感縮血管功能使該區(qū)對細(xì)微興奮性刺激就可引起強(qiáng)烈而持久的血壓波動7，8。正如本實(shí)驗(yàn)中在SHR的RVL區(qū)微量注射Ang即可引起比KY大鼠明顯高的血壓波動。因此，控制RVL區(qū)亢進(jìn)的交感縮血管功就有可能減弱過度的血壓波動。本文觀察到口服奧美沙坦可以明顯減弱Ang在SHR的RVL引發(fā)的升壓反響，說明奧美沙坦不僅可以阻斷外周AT1受體，而且可以作用于心血管調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)元外表的AT1受體，減弱中樞升壓反響。本實(shí)驗(yàn)又發(fā)現(xiàn)給予奧美沙坦4后SHR的RVL區(qū)AT1受體蛋白和RNA和程度均明

9、顯降低。這些研究結(jié)果說明口服奧美沙坦可以通過降低SHR的RVL組織中AT1受體程度，從而減弱該區(qū)微量注射Ang引起的升壓反響。奧美沙坦是特異性咪唑類Ang受體阻斷劑，對AT1受體具有高選擇性和高親和性，臨床降壓作用穩(wěn)定、持久。本實(shí)驗(yàn)顯示它可以作用于RVL區(qū)神經(jīng)元AT1受體，從而減弱該區(qū)注射Ang引起的升壓反響。但是，在正常生理情況下，奧美沙坦不易透過血腦屏障,它是通過何種途徑作用于RVL區(qū)AT1受體，進(jìn)而影響中樞升壓反響的機(jī)制尚不清楚。可能通過有效降低動脈血壓，再通過某種反響機(jī)制減少高血壓動物RVL區(qū)AT1受體表達(dá)。一個受體的阻斷劑長期應(yīng)用往往引起該受體的表達(dá)增加，本實(shí)驗(yàn)觀察到長期應(yīng)用奧美沙坦可以降低SHR的RVL組織中AT1受體程度。這可能與RVL區(qū)AT1受體為組織型AT1受體和其過度表達(dá)狀態(tài)有關(guān)。這些有待進(jìn)一步研究來證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)觀察到SHR的RVL區(qū)AT1受體程度明顯高于正常血壓的KY大鼠，這為RVL區(qū)AT1受體的過度表達(dá)在高血壓的形成和維持中起到重要作用的觀點(diǎn)提供了理論根據(jù)9，1