食用菌栽培24課件

1、食用菌栽培課件24第九章菌種的分離、提純、擴(kuò)大、培養(yǎng)與保第一節(jié)菌種的分離與提純進(jìn)入課文三、菌種的提純?nèi)绻蛛x的菌種已污染，可以使用相應(yīng)的辦法除掉。 (一)使用抑制培養(yǎng)基(二)排除細(xì)菌或酵母菌污染(三)排除霉菌污染(四)菌絲再提純(五)單根菌絲提純技術(shù)(六)菌絲生長速度、生長量的測試使用抑制培養(yǎng)基從腐朽嚴(yán)重的木材塊上分離菌絲時，新生菌常會伴隨著各種各樣的細(xì)菌、霉菌出現(xiàn)。在這種情況下，可向培養(yǎng)基中加入選擇性強(qiáng)的抗菌劑，如涕必靈(TBZ)或多菌靈(MBC)?？辜?xì)菌的如培養(yǎng)基加入30mg/L左右的四環(huán)素或氯霉素等，以抑制細(xì)菌的出現(xiàn)。此外，也可以在培養(yǎng)基內(nèi)添加鏈霉素3040mg/L或金霉素2030mg/

2、L或高錳酸鉀50mg/L。返回排除細(xì)菌或酵母菌污染 組織分離，基內(nèi)菌絲分離將分離物接種在無冷凝水、硬度較高的斜面培養(yǎng)基上，再降低培養(yǎng)溫度至1520。利用某些大型真菌在較低的溫度下，菌絲生長速度比細(xì)菌菌苔蔓延速度快的特點，用尖細(xì)的接種針切割菌絲的前端，轉(zhuǎn)接到新的試管斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，連續(xù)23次就能獲得所要的純菌絲。也可以用接種鏟將斜面污染的細(xì)菌菌苔鏟除掉，打破試管，挑取內(nèi)部有基內(nèi)菌絲的瓊脂塊，移入無冷凝水的培養(yǎng)基上。適合于菌齡較長、被好氣性細(xì)污染的試管。 返回排除霉菌污染分離培養(yǎng)后，若發(fā)現(xiàn)有色的霉菌小斑點污染，最好放棄。如由同一材料分離得來的，每支試管都是如此，那就要重新分離。如果霉菌菌落剛出現(xiàn)

3、孢子，孢子尚未成熟，尚未變色，則可采用前端菌絲切割法提純。如果霉菌菌落的顏色已加深，則意味著眾多的孢子已成熟，若采用前端菌絲切割法提純意義不大。可將1%多菌靈的濕濾紙蓋在霉菌的菌落上，以防止提純時，試管振動使孢子擴(kuò)散。然后，用火焰滅菌過的接種鏟將分離物表層鏟掉，隨之，用另一接種針鉤取分離物位置下的基內(nèi)菌絲。霉菌的污染還常見于棉塞上，這多是棉塞受潮所致。返回(四)菌絲再提純采用切割法或基內(nèi)菌絲挑取法提純后，一般都能獲得純菌絲，但也偶有提而不純的現(xiàn)象發(fā)生，這就必須對菌絲再提純。為了判斷提純后菌落的純度，將菌絲塊接入瓊脂培養(yǎng)皿平板培養(yǎng)基內(nèi)，如果純種菌絲，菌落會逐漸向四周輻射狀散開，外緣整齊，如果菌種

4、不純，混有其它絲狀真菌，菌絲生長速度不一，菌落外緣便參差不齊，培養(yǎng)皿內(nèi)產(chǎn)生的色素也分布不勻。再提純時，對菌落中生長速度較為一致的部分施行菌絲前端切割，移植至新的培養(yǎng)基。返回單根菌絲提純技術(shù)將懷疑混有雜菌的菌絲，用尖細(xì)的接種針切割帶有培養(yǎng)基的菌落前端23mm2的薄片，移接入PDA培養(yǎng)基，每支試管可移接數(shù)點，放在所分離的菌種的最隹溫度下培養(yǎng)，隔12小時后，在陽光下觀察各接種塊菌絲生長的狀態(tài)。選取菌絲顯現(xiàn)出分叉狀，用鋒利的接種針仔細(xì)地將貼在培養(yǎng)基面上的單根菌絲帶培養(yǎng)基切割下來，移入PDA培養(yǎng)基內(nèi)，塞上棉塞，再用放大鏡觀察判斷是否為單根菌絲，則應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)1224小時后，再重復(fù)上述過程。適合于菌絲生長速

5、度快，密度不高的菌類，如草菇 返回第二節(jié)菌種的擴(kuò)大、培養(yǎng)一、菌種的擴(kuò)大 經(jīng)分離、提純、出菇試驗確定為生產(chǎn)用種后，為了適應(yīng)生產(chǎn)栽培需要，要進(jìn)行菌種的擴(kuò)大、繁殖。二、貼標(biāo)簽 無論是菌種分離、提純，還是一級、二級或三級種的擴(kuò)大，無菌操作后應(yīng)馬上貼標(biāo)簽。三.菌種培養(yǎng) 培養(yǎng)室內(nèi)溫度、濕度、光照、空氣等條件彼此聯(lián)系，互相影響。 (一)一級菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)1.單一菌絲類型一級菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)(1)單一菌絲類型一級菌種接種無菌操作要點a在無菌箱內(nèi)，將待接的斜面試管(無冷凝水)、購來或自行培養(yǎng)好的一級原始種，酒精燈、火柴盒、接種針等放入接菌箱內(nèi)。下一頁單一菌絲類型一級菌種接種無菌操作要點b按接種箱操作規(guī)程進(jìn)行消毒。

6、c打開工作燈，用75%的酒精棉球擦雙手，伸入接種箱內(nèi)，再擦接種工具。d點燃酒精燈。5右手持接種針，將頂端燒紅，并將整支接種針過火幾次。6用左手手指和手掌托持兩支試管，食指與中指與中指夾持一級原始種，無名指和小指夾持空白斜面培養(yǎng)基試管。用右手無名指和小指夾持原始種棉塞，小指和魚際夾持空白試管棉塞?；鹧娣饪陔p管。下一頁(二)二級菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)1.單一菌絲類型二級菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)將滅菌好的二級菌種培養(yǎng)瓶數(shù)十瓶(視接種箱的大小)連同接種工具、一級菌種放入接菌箱內(nèi)，按常規(guī)進(jìn)行熏蒸消毒。按無菌操作要求，在接種箱內(nèi)將接種針進(jìn)行火焰滅菌、冷卻。將一級菌塊劃成1大小的接種塊，用接種鉤鉤住，彎鉤朝上，左手持二級菌種

7、瓶橫放，用右手小指和魚際抓住棉塞，左手將二級種瓶反時針旋轉(zhuǎn)后退，撥脫棉塞，火焰封口。 下一頁二級菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)將已鉤取的菌種塊抖入二級菌種瓶，塞上棉塞。經(jīng)搖二級菌種瓶，使菌種塊滾至培養(yǎng)基面中央。按此法每支試管可接二級菌種瓶810瓶。操作時注意：不能將二級種瓶口朝上，同時注意撥出棉塞后，不能碰到其它器具及接種箱壁。若接種塊掉在箱底上，應(yīng)棄之不用。每接完一支一級種，接種工具應(yīng)重新火焰滅菌。待整箱二級菌種瓶全部接完后，開啟箱蓋。下一頁2.混合型二級菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)混合型原種的接種和單一型二級種接種的方法大同小異。顯著不同的是：銀耳一級種培養(yǎng)基的前后端應(yīng)棄之不用，僅要繡球狀銀耳純白菌絲及附近長有黑灰色羽

8、毛狀菌絲的菌塊。按上述方法，連同培養(yǎng)基整塊鉤取出，移入菌種瓶內(nèi)，每支試管僅能接一瓶二級菌種，不能貪多。接完二級菌種，用手拍打，振動瓶，使一級菌種塊純白菌絲面朝上，千萬不能朝下，否則報廢。 下一頁混合型二級菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)培養(yǎng)溫度初期2728，促使羽毛狀菌絲蔓延，56天之后馬上降至2223，這是純白菌絲生長適宜的溫度。接種后培養(yǎng)2025天，接種塊逐漸形成膠質(zhì)化的原基團(tuán)，并吐出水珠，適合作為段木銀耳種，菌齡控制在4045天。若在同樣的溫度下，1213天膠化，并逐漸開片，吐黃水，則適合作為代料棒栽銀耳種，菌齡控制在1518天內(nèi)使用。 下一頁混合型三級種的擴(kuò)大培養(yǎng)接種匙鏟接量只需蠶豆大小，移入三級種瓶內(nèi)

9、，每瓶二級菌種可接34瓶三級種，其余棄之不用。因銀耳是混合型的，純白菌絲僅生長在表面淺層培養(yǎng)基內(nèi)，又由于羽毛狀菌絲繁殖十分迅速，所以銀耳培養(yǎng)基裝料只需裝1/4瓶即可。移接中注意防止?fàn)C傷菌絲。返回二、貼標(biāo)簽一級種試管標(biāo)簽應(yīng)貼在前端，既不能遮住棉塞，又不遮住培養(yǎng)基斜面的部位，以免在檢查棉塞和斜面是否污染時千萬不便；二級、三級種標(biāo)簽多貼在瓶上部側(cè)壁；塑料袋難貼標(biāo)簽，可將標(biāo)簽貼在塑料套環(huán)上。出可用記號筆將標(biāo)簽內(nèi)容寫在塑料袋外。標(biāo)簽內(nèi)容 注明菌種名稱、菌株號、接種者或單位接種日期四項。菌種名可用中文注明，也常用拉丁文學(xué)名的縮寫注明。習(xí)慣上常用的縮寫字母。 下一頁貼標(biāo)簽菌種名 多寫在標(biāo)簽的第一行，字體較大

10、。菌株號 是某一菌種特定菌株代號，更多的是用有一定代表意義的數(shù)字表示，它一般要求用較小號的字符寫在菌種之后。購買一級菌種代號不宜自行更改。接種者或單位 是注明該菌種制作責(zé)任人。接種日期 菌種使用時作為推算菌齡的依據(jù)?？蒲猩?，育種上的標(biāo)簽一般較復(fù)雜，內(nèi)容較多，除上述內(nèi)容外，還要注明分離方法如孢子分離(S)、組織分離(T)、基內(nèi)菌絲分離(M)等。 返回菌種培養(yǎng)培養(yǎng)室內(nèi)溫度、濕度、光照、空氣等條件彼此聯(lián)系，互相影響。 1.溫度控制 培養(yǎng)室內(nèi)溫度應(yīng)根據(jù)季節(jié)變化進(jìn)行控制，并結(jié)合培養(yǎng)階段確定培養(yǎng)溫度。(1)冬季保溫、夏季降溫 冬季氣溫低，菌種培養(yǎng)室要有保溫措施，使培養(yǎng)室溫度保持在25左右，不保溫浪費(fèi)然。夏

11、季菌種呼吸產(chǎn)生熱量，使培養(yǎng)室溫度升高，可達(dá)45，在這個溫度下培養(yǎng)的菌種，菌絲弱，有時還能造成菌種死亡，所以要有降溫措施。(2)變溫培養(yǎng) 大多數(shù)的菌種菌絲體生長階段25生長最快，20以下菌絲最壯。我們目前大多培養(yǎng)菌種采用初期培養(yǎng)溫度2628，這時氣溫雖然2628，但菌種瓶或袋內(nèi)溫度低，有利于瓶或袋內(nèi)栽培料吸溫，菌種恢復(fù)的快；菌種培養(yǎng)中期(菌種恢復(fù)已封面并向下生長幾厘米)培養(yǎng)溫度控制23，這時袋內(nèi)溫度比氣溫高23，袋內(nèi)溫度則25，菌絲生長最快；培養(yǎng)后期溫度控制在20以下，菌絲生長最壯。下一頁菌種培養(yǎng)2.濕度控制 培養(yǎng)室濕度最好控制在RH50%，不宜太濕，濕度過大，霉菌易繁殖。3.通風(fēng)換氣 食用菌是

12、好氣性真菌，菌絲體生長階段需要充足的氧氣。通風(fēng)換氣消除呼吸過程產(chǎn)生的二氧化碳，通過氣體擴(kuò)散得到氧氣。同時通過通風(fēng)換氣排除呼吸過程產(chǎn)生的熱量。4.光 菌絲體生長階段不需要光線。培養(yǎng)室盡可能暗。5.污染的檢查 培養(yǎng)過程中塑料袋制種最好不要經(jīng)常檢查是否有污染，檢查菌種時常常手提袋口，袋 內(nèi)吸氣造成污染。檢查用工作燈照射，發(fā)現(xiàn)有污染的提出。下一頁第三節(jié) 菌種質(zhì)量的鑒定菌種質(zhì)量的優(yōu)劣是一個非常嚴(yán)肅的問題。菌種生產(chǎn)必須首先保證質(zhì)量。一.一級菌種鑒定 一是鑒定所分離得到的菌株或從外地引進(jìn)的菌株是不是我們所需要栽培的菌株。二是判別所得到的菌種是否優(yōu)良。常見幾種食用菌一級菌種主要特征(見附表)香菇、木耳、蘑菇、

13、草菇、金針菇。下一頁二.二級或三級種的鑒定(一)木腐菌類的鑒定除銀耳外，以木屑作培養(yǎng)基的菌種，外觀上，菌絲潔白，濃密，木屑被分解后，逐漸從棕褐色轉(zhuǎn)為淡黃色，若瓶內(nèi)的菌絲柱和瓶壁脫離，說明培養(yǎng)基偏干，培養(yǎng)室內(nèi)空氣相對濕度偏低或菌種老化。有時瓶底出現(xiàn)黃色分泌液，說明菌種已完全老化。若瓶袋內(nèi)下半部木屑未分解，仍為棕褐色，說明培養(yǎng)時間不足，需在培養(yǎng)，如菌種瓶或袋底份量較重，菌絲前端密集，生長停滯，形成抑制線，這是由配料過濕所致。下一頁(二)草腐生菌類二、三級菌種的鑒定蘑菇和草菇均屬于草腐生菌類。其二、三級菌種形態(tài)差異較大，蘑菇又因菌株不同，出現(xiàn)較大的差別。蘑菇氣生型菌株菌絲旺盛，雪白，蔓延過程菌絲前端

14、呈扇形展開，當(dāng)培養(yǎng)基過濕時，極易形成塊狀的菌皮。貼生型的菌株菌絲極為纖細(xì)，呈藍(lán)灰色，不易形成菌被。草菇菌種的菌絲為透明狀，銀灰色，生長迅速，后期出現(xiàn)紅褐色的厚垣孢子。厚垣孢子少的，一般出菇的子實體大，反之則小。下一頁(三)菌種的選購具體的選購方法歸納起來就是“提、聞、看”提 用手提棉塞，看棉塞松緊是否適度，過松過緊都不行。聞 聞菌種的氣味，若菌種散發(fā)出酸、霉、臭味，則說明菌種已污染，不是純培養(yǎng)菌絲。純培養(yǎng)菌種具有特殊香味?？?看菌種的外觀，看是否破管、破瓶、破袋，再看菌種是否否“純、正、壯、潤”具體來說純度高，不能有雜菌；菌絲體色澤正，多數(shù)種類的菌絲應(yīng)純白、原種、栽培種菌絲連結(jié)成塊，無老化、變

15、色、吐黃水、長子實體原基等現(xiàn)象，菌絲粗壯，長勢強(qiáng)；培養(yǎng)體要濕潤，含水量適宜，不干縮脫壁。下一頁三、礦物油法此法是將液體石蠟油加入欲保存的菌株斜面上。液體石蠟油先經(jīng)1211小時高壓滅菌。為了除去高壓滅菌時混入的水分 ，再經(jīng)150170干熱1小時，待水分完全蒸發(fā)，石蠟呈透明狀為止。從干燥箱中取出，冷卻至室溫。使用時將無菌液體石蠟油倒入保存菌種的試管，至離瓊脂上部1處豎立保存。注入過多時，保存后成活率低，反之，瓊脂易干燥。使用時用接種鏟從斜面上鏟取一小塊菌絲塊，原管仍可以重新封蠟繼續(xù)保存。剛從液體石蠟油中移出的菌種菌絲體常沾有石蠟油，生長較弱，要重新移植一次恢復(fù)正常生長。保存溫度10以上室溫。下一頁四、安瓿瓶保存孢子法國外用安瓿代替試管，在室溫下，將蘑菇孢子典藏在真空干燥的安瓿瓶中3年，還具有活力。也可以用1060指形管或用10安瓿瓶作為容器收藏香菇孢子。本方