氨基酸序列測定

1、氨基酸序列*測定綜述【作者】【聯(lián)系方式】【摘要】氨基酸序列測定是一個較老的話題早在20世紀30年代Pauling和Corey x-射線衍射方法研 究氨基酸和肽?？墒墙鼛啄觋P(guān)于氨基酸序列的測定并不多，測定氨基酸序列要花很長時間， 到了較快捷分析DNA的方法試用成功后，直接分析蛋白質(zhì)的遺傳密碼比分析蛋白質(zhì)本身更 普遍。但該文仍然將對氨基酸序列測定相關(guān)研究進展作一綜述。【引文】氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，賦予蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)形態(tài)，使它的分子具有生 化活性。蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)重要的活性分子，包括催化新陳代謝的酶。兩個或兩個以上的氨 基酸化學聚合成肽，一個蛋白質(zhì)的原始片段，是蛋白質(zhì)生成的前體。氨基酸

2、廣義上是指既含 有一個堿性氨基又含有一個酸性羧基的有機化合物，正如它的名字所說的那樣。但一般的氨 基酸，則是指構(gòu)成蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)單位。在生物界中，構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的氨基酸具有其特定的 結(jié)構(gòu)特點，即其氨基直接連接在a -碳原子上，這種氨基酸被稱為a -氨基酸。在自然界中共 有300多種氨基酸，其中a -氨基酸21種。a -氨基酸是肽和蛋白質(zhì)的構(gòu)件分子，也是構(gòu)成 生命大廈的基本磚石之一。本文對相關(guān)研究進展作一綜述?！娟P(guān)鍵詞】氨基酸，序列;氨基酸序列測定【正文】歷史背景我們的頭發(fā)，指甲以及對生命活動有催化作用的酶的成分都有蛋白質(zhì)1。蛋白質(zhì) 稱為“生命活動的載體”，可見其對生命的重要性。于是科學家對其進行

3、研究，希望找到它 的本質(zhì)，從而對它展開對人類有益的利用。前人的工作及成果2.1 x-射線衍射方法20世紀30年代Pauling和Corey x-射線衍射方法研究氨基酸和肽1963年Kendrew及同事利用x-射線分析技術(shù)分析了肌紅蛋白結(jié)構(gòu)2.2高效液相層析法分析任勇等人應用高效液相層析法和微晶纖維素薄層指紋圖譜法分析分析一例稀有 P -鏈變異體:HbDOuledRabah 8 19(B1)AsnLys在我國人群中首次發(fā)現(xiàn)一例稀有p -鏈變異 體:HbDOuledRabah p 19(B1)Asnf Lys。先證者女,14歲，壯族，廣西靖西縣人。先證者母親及 其三個兄妹均為攜帶者，無明顯臨床癥狀

4、。22.3二維核磁共振譜測定譚寧華等人在植物新環(huán)肽太子參環(huán)肽A(HA)和B(HB)的結(jié)構(gòu)研究中，應用COL 譜較成功地解決了氨基酸序列32.4 SDS及蛋白質(zhì)電泳印跡技術(shù)周圓等人在直組人嗜中性白細胞活化蛋白-1/白細胞介素-8的純化與鑒定 確證該目標蛋白得到高效表達和正確加工。隨后采用Bio-Gel P30凝膠過濾層析和Mono-S 陽離子交換層析對重組人NAP-1/IL-8進行了分離純化純化產(chǎn)品達到SDS純。利用瓊脂 糖平板法測定了純化產(chǎn)品的嗜中性白細胞趨化活性,推算其比活為2.8X105U/mg蛋白。又 利用SDS測出重組NAP-1/IL-8的分子量約為8.5kD,但根據(jù)凝膠過濾層析的洗脫

5、時間推定, 在溶液中確實存在分子量稍大于14.4kD的NAP-1/IL-8二聚體。42.5蛋白質(zhì)自動測序儀用高效液相色譜技術(shù)(HPL。)自華支睪吸蟲粗抗原(Clonorchissinensis Adultwormantigens,CAA)中提純15 / 16 ku蛋白，用酶聯(lián)免疫吸附實驗(EL ISA)測定其抗 原活性，并使用蛋白質(zhì)自動測序儀測定其N端部分氨基酸順序。結(jié)果 3個具有抗原活性 的純化樣品(H3、H11及H13)中,H13的診斷效果接近CAA，敏感性達90 %，特異性 95 %。分別測獲3個純樣的N端15、14和2 0個氨基酸殘基(aa)，其中H11的N端14 個aa與H13的前1

6、4個完全相同。結(jié)論 進一步證明了 Cs15 / 16為有效的診斷抗原， 測獲的部分氨基酸順序可為更深入的研究提供參考。52.6 SDS- PAGE 和 IEF 測定用制備型聚丙烯酰胺凝膠電泳和制備型等電聚焦純化了曾報道的光敏核不育 水稻(Oryza sativa)農(nóng)墾58S葉綠體的特異性蛋白質(zhì)P2，得到SDS- PAGE和等電聚焦 (IEF )純的P2。經(jīng)SDS- PAGE和IEF測定，該純蛋白質(zhì)的分子量是61 k D,等電點是 5.8。現(xiàn)稱P2為P61。氨基酸序列分析表明P61的N-端氨基酸序列與水稻和大麥葉綠體 ATPasep亞基的N-端氨基酸序列同源。62.7特異性的蛋白酶endopro

7、teinaseLysC和漠化氰對該酶 蛋白進行了裂解作者對已報道的稻瘟菌誘導稻葉脂氧合酶CML0X1和CML0X2的純 化方法作了進一步改進和完善。改進后的純化方法可縮短該脂氧合酶的純化時間，并提高純 化倍數(shù)。利用改進的方法，作者從2 0g非親和性稻瘟菌小種接種稻葉中獲得了電泳純的酶 蛋白CML0X113 3 pg和CML 0 X 2 2 0 8 pg。在此基礎上，采用特異性的 蛋白酶endoproteinaseLysC和漠化氰對該酶蛋白進行了裂解，回收其 肽段，得到了CML0X1的3個不同肽段共3 0個氨基酸和CML0X2的7個不同 肽段共8 7個氨基酸的序列，為最終克隆這2個酶的基因奠定了

8、基礎72.8液質(zhì)聯(lián)用、兩種串聯(lián)質(zhì)譜運用液質(zhì)聯(lián)用、兩種串聯(lián)質(zhì)譜對融合蛋白FP3的氨基酸全序列測定，確證其一級 結(jié)構(gòu)。將樣品還原烷基化后，通過胰蛋白酶酶解蛋白,PNGase F去除多肽混合物中糖肽的糖 基化,將去糖后的總肽用于液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，通過液相分離后，運用Q-TOF和線性離子阱兩種串 聯(lián)質(zhì)譜測定各個肽段的b,y碎片離子，分析測定融合蛋白FP3的氨基酸全序列。8研究現(xiàn)狀和問題測定氨基酸序列要花很長時間，尤其是現(xiàn)在科學家更偏愛快速且更本質(zhì)性的基因 測定，因此現(xiàn)在測定氨基酸序列的研究并不多。目前我國最近的對氨基酸的測定是2012年 LC-MS/MS法對融合蛋白FP3的氨基酸全序列測定8未來前景隨著生

9、物分子化學的研究，可能對氨基酸序列測定的方法和儀器會得到完善和突 破，那么科學家會繼續(xù)對氨基酸直接測定。但就當今趨勢，科學家們更愿意測定基因序列， 在有對應的密碼子翻譯成氨基酸。9【參考文獻】.趙贛，.從酶的專一性看植酸酶與酸性磷酸酶的關(guān)系J.生物學雜志,2010,(3).任勇，陳松森,梁植權(quán)，張慕潔,黃明學，張桂蓮,曾憲生中國醫(yī)學科學院學報.高效液相層析 法分析一例稀有8 -鏈變異體:HbDOuledRabah甲19(B1)AsnLys.譚寧華，趙守訓,王德祖，張宏杰,陳昌祥，周俊波譜學雜志：二維核磁共振譜測定植物新環(huán)肽 太子參環(huán)肽A和B中氨基酸序列.周圓，金冬雁,徐榮輝，侯云德生物化學雜志

10、:直組人嗜中性白細胞活化蛋白-1/白細胞介素-8 的純化與鑒定. Tan Ninghua , Wang Dezu , Zhang Hongjie Chen Changxiang , Zhou Jun and ZhaoShouxun( Department of Phyrochemistr China Pharmaceutical University, Nanjing, 210009; b Laboratory of Phytochcmistry, Kunming Institute of Botany, Academia Sinica, Kunming , 650204). Wang Tai

11、,TongZhe, Kuang Ting yun and Ting Pei song WT6BZ(WT6BXInstitute of Botany,AcademiaSinica,WT6BZBeijing ST6BZ100093).HouZhanjunPengYouliang (China Agricultural University, Beijing 100094) RandeepRakwalOsamu Kodama (Ibaraki University, Ibaraki 300-03 Japan). LI Xiang1,GAO Xiang-dong2,TAO Lei1,PEI De-ning1,GUO Ying1,RAO Chun-ming1*,WANG Jun-zhi1* (1.Department of Recombinant Product,National Institutes for Food and Drug Control,Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on Quality and Standardization