用于細(xì)胞生物學(xué)研究的技術(shù)課件

1、 細(xì)胞生物學(xué)研究方法生命科學(xué)導(dǎo)論-細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ) 教 師: 曲鑫建 講師聯(lián)系方式:子信箱: 生命與醫(yī)藥學(xué)院 2014.06.21 用于細(xì)胞生物學(xué)研究的技術(shù)一、細(xì)胞融合二、單克隆抗體制備三、基因敲除技術(shù)四、動(dòng)物克隆技術(shù) 一、細(xì)胞融合1.定義 在自然或人工條件下，使二個(gè)或二個(gè)以上細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的過程。2. 促融方法 生物學(xué)方法：仙臺(tái)病毒 化學(xué)方法：PEG(聚乙二醇) 物理方法：電脈沖打孔儀細(xì)胞周期相關(guān)因子的發(fā)現(xiàn)B. 膜蛋白流動(dòng)性C. 基因定位制備過程：1984年Nobel獎(jiǎng) B淋巴細(xì)胞“不死的”小鼠骨髓瘤細(xì)胞 雜交細(xì)胞（雜交瘤） B淋巴細(xì)胞(產(chǎn)生特異性抗體) 腫瘤細(xì)胞(

2、在體外無限增殖)將每個(gè)雜交瘤細(xì)胞分別增殖，就得到很多單一細(xì)胞的克隆，一個(gè)克隆可以產(chǎn)生一種特異性單克隆抗體?；蚯贸峭ㄟ^一定的途徑使機(jī)體特定的基因失活或缺失的技術(shù)?；蚯贸饕菓?yīng)用DNA同源重組原理，用設(shè)計(jì)的同源片段替代靶基因片段，從而達(dá)到基因敲除的目的。除同源重組外，新技術(shù)也逐漸被應(yīng)用，成功的有基因的插入突變和miRNA，它們同樣可以達(dá)到基因敲除的目的。三、基因敲除技術(shù)例：基因敲除鼠Mario Capecchi (Late 1980s) (University of Utah)embryonic stem cells in inner cell mass as target cells1/

3、104 cells undergo a process of homologous recombination. 1.“克隆”的定義：是指由一個(gè)細(xì)胞或個(gè)體以無性繁殖（asexual reproduction）或孤雌生殖而產(chǎn)生方式產(chǎn)生遺傳物質(zhì)完全相同的一群細(xì)胞或一群個(gè)體。四、動(dòng)物克隆技術(shù) 廣義狹義胚胎分割細(xì)胞核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植克隆技術(shù)核移植技術(shù)：所謂核移植技術(shù)就是利用顯微操作技術(shù)將一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移植到另一個(gè)細(xì)胞中，或者將兩個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核（或細(xì)胞質(zhì)）進(jìn)行交換，從而可能創(chuàng)造無性雜交生物新品種的一項(xiàng)技術(shù)。人類皮膚細(xì)胞核移植到家兔的卵母細(xì)胞里（1）動(dòng)物資源的種質(zhì)保存包括地球上頻危動(dòng)物的挽救等。（2）生產(chǎn)移植器官，培育優(yōu)良品種，與轉(zhuǎn)基因技術(shù)相結(jié)合研制生物反應(yīng)器生產(chǎn)基因藥物。2. 動(dòng)物克隆