糖尿病大鼠心肌組織中bcl

1、糖尿病大鼠心肌組織中bcl【關(guān)鍵詞】糖尿?。?心肌細(xì)胞；,bl摘要：目的：討論糖尿病大鼠心肌組織中bl2的表達(dá)及對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法：按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組(10只)和實(shí)驗(yàn)組(10只),各組大鼠禁食12h后,實(shí)驗(yàn)組大鼠以60g/kg的劑量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1l/L、pH=4.4的構(gòu)櫞酸鹽緩沖液在冰浴下配制成11g/l的STZ溶液),正常對(duì)照組大鼠(N)注射等體積的枸櫞酸鹽緩沖液。觀察動(dòng)物飲水、進(jìn)食及尿量變化等情況。一周后,采尾血測血糖,以血糖濃度16.6l/L、飲水量40l/d、尿糖強(qiáng)陽性(+)的大鼠作為糖尿病大鼠。將糖尿病模型組和對(duì)照組大鼠處死,切取心室肌組織,進(jìn)展組織

2、切片和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察。結(jié)果：糖尿病模型組心肌細(xì)胞Bl2表達(dá)的平均光密度及陽性面積率與對(duì)照組心肌細(xì)胞比擬有顯著性差異P0.01)。結(jié)論：糖尿病導(dǎo)致的心肌病與心肌細(xì)胞凋亡等有關(guān)。關(guān)鍵詞：糖尿病；心肌細(xì)胞；bl2；細(xì)胞凋亡糖尿病性心肌病是糖尿病的慢性并發(fā)癥之一,是糖尿病發(fā)病過程中特異性的心肌受損和心臟功能改變,糖尿病性心肌病的出現(xiàn)可以不伴有缺血性病變、血管病變及高血壓等并發(fā)癥。目前糖尿病性心肌病確實(shí)切病因還不清楚,但目前認(rèn)為糖尿病性心肌病的發(fā)生主要與心肌能量代謝紊亂、a2+超載、血管動(dòng)脈硬化、氧化應(yīng)激、高血壓及高血糖導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡等有關(guān)。本研究采用免疫組織化學(xué)方法，研究了糖尿病心肌組織中b

3、l2及bax蛋白表達(dá)情況，旨在討論糖尿病所致心肌細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。1材料與方法11材料昆明種SD大鼠20只,雄性,體重180200g,由武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,適應(yīng)飼養(yǎng)1周后進(jìn)展實(shí)驗(yàn)。12方法121糖尿病模型制備及分組按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組(10只)和實(shí)驗(yàn)組(10只),各組大鼠禁食12h后,實(shí)驗(yàn)組大鼠以60g/kg的劑量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1l/L、pH=4.4的構(gòu)櫞酸鹽緩沖液在冰浴下配制成11g/l的STZ溶液),正常對(duì)照組大鼠(N)注射等體積的枸櫞酸鹽緩沖液。觀察動(dòng)物飲水、進(jìn)食及尿量變化等情況。一周后,采尾血測血糖,以血糖濃度16.6l/L、飲水量40l/d、尿糖強(qiáng)陽性(

4、+)的大鼠作為糖尿病大鼠。將糖尿病模型組和對(duì)照組大鼠處死,切取心室肌組織,進(jìn)展組織切片和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察。122主要試劑和儀器濃縮型鼠抗人Bl2單克隆抗體美國Santaruz公司；超敏即用型SP通用型免疫組織化學(xué)試劑盒福州邁新公司；DAB顯色試盒及多聚賴氨酸北京中山生物技術(shù)。YY781型醫(yī)用微波儀(浙江臨安電子器材廠消費(fèi))；家用高壓鍋。123方法免疫組織化學(xué)SP法檢測Bl2抗原，其主要步驟如下：組織切片5，常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水洗；3%過氧化氫，37孵育10in以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS洗45in；Bl2采用微波抗原修復(fù)3檔，10in，PBS洗45in；正常羊血清37孵育10in以減

5、少非特異性反響；一抗Bl2，1:50)37孵育1h，PBS洗45in；生物素標(biāo)記的二抗，37孵育10in，PBS洗45in；鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶復(fù)合物37孵育10in，PBS洗45in；DAB顯色液顯色，自來水沖洗終止反響；蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照組，人扁桃體作為Bl2陽性對(duì)照組。124免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷Bl2相關(guān)抗原以胞膜或胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反響。陰性對(duì)照組除細(xì)胞核染成藍(lán)色外，胞核和胞漿內(nèi)無棕黃色反響物。采用HPIAS2000高明晰度彩色病理圖文報(bào)告管理系統(tǒng)同濟(jì)千屏影像公司對(duì)Bl2的表達(dá)進(jìn)展定量分析，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)完好而不重疊的高倍鏡視

6、野400)，測定每個(gè)視野下陽性反響的平均光密度、陽性反響面積和所有細(xì)胞總面積，計(jì)算陽性面積率。以每例5個(gè)視野的平均光密度、陽性面積率的平均值作為該例的測量值陽性面積率單位面積中陽性反響的總面積/單位面積中細(xì)胞的總面積100。125統(tǒng)計(jì)學(xué)處理對(duì)各組免疫組織化學(xué)反響陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率作單因素方差分析和SNKq檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。2結(jié)果對(duì)照組心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)可見較多棕黃色顆粒，糖尿病模型組心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)無棕黃色顆粒沉積。圖像分析結(jié)果顯示：對(duì)照組心肌細(xì)胞Bl2表達(dá)的平均光密度為0.1535，糖尿病模型組心肌細(xì)胞Bl2表達(dá)的平均光密度為0.0594；對(duì)照組心肌細(xì)胞Bl2表達(dá)的陽性面積率

7、為0.2589，糖尿病模型組Bl2表達(dá)的陽性面積率為0.1363。經(jīng)單因素方差分析，組間有顯著性差異P0.01)。經(jīng)q檢驗(yàn)，糖尿病模型組與對(duì)照組之間，Bl2的平均光密度及陽性面積率有顯著性差異P0.01)，見表1。表1略注：*糖尿病模型組與對(duì)照組比擬，P0.01。3討論糖尿病是目前臨床學(xué)科中進(jìn)展最迅速的學(xué)科之一。糖尿病患者在中國及世界范圍內(nèi)均呈迅速增多的趨勢,目前全世界有糖尿病患者1.125億,我國糖尿病的患病率為2.51%15。糖尿病患病率最高地區(qū)為新疆自治區(qū)克拉瑪依市,其次是北京地區(qū)。據(jù)報(bào)道，西藏糖尿病的患病率也呈上升趨勢。重度糖尿病及合并多臟器嚴(yán)重病變的患者治療尤為困難,假設(shè)不積極防治,

8、常常需截肢而致殘,甚至導(dǎo)致死亡。因此防止糖尿病越來越引起廣闊醫(yī)護(hù)人員及患者的關(guān)注。糖尿病是一組由于多種原因引起的胰島素分泌缺陷,或胰島素作用缺陷,或兩者兼而有之引起的以高血糖為特征的代謝疾玻胰島素是由胰腺中細(xì)胞分泌的,是葡萄糖代謝中不可缺少的一種激素。當(dāng)胰島素分泌缺乏,葡萄糖利用及貯存受阻,血液中葡萄糖濃度(血糖濃度)就會(huì)升高。血糖濃度超過一定程度,多余的葡萄糖便通過腎臟排出體外,這時(shí)化驗(yàn)小便會(huì)發(fā)現(xiàn)尿糖陽性,故稱糖尿玻糖尿病的根本特征是長期高血糖,慢性高血糖可引起多臟器的長期損害、功能減退和衰竭，尤其是眼、腎臟、神經(jīng)、心臟和血管68。病情嚴(yán)重或應(yīng)激時(shí)可發(fā)生急性代謝紊亂,例如:糖尿病酮癥酸中毒、

9、糖尿病高滲性昏迷等。隨著經(jīng)濟(jì)開展,人民生活程度不斷進(jìn)步,老齡化社會(huì)的到來,糖尿病(diabetesellitus,D)在中老年人群中的發(fā)生率日益增高。D及其并發(fā)癥對(duì)患者的安康和生命造成嚴(yán)重威脅,甚至導(dǎo)致殘廢和死亡。血管病變是糖尿病主要慢性并發(fā)癥,其中大血管病變是糖尿病死亡的主要原因。ai等9研究發(fā)現(xiàn),高血糖可直接導(dǎo)致活體心肌細(xì)胞凋亡,高血糖導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡至少局部是通過細(xì)胞色素激活的aspase3途徑的激活而控制。ai等報(bào)道在糖尿病患者和動(dòng)物模型中都可觀察到心肌細(xì)胞死亡,通過抗氧化劑或凋亡信號(hào)途徑的特異性抑制劑抑制心肌細(xì)胞死亡,可以明顯的阻止糖尿病的心臟毒性,因此心肌細(xì)胞死亡在糖尿病性心肌病

10、變中有重要作用。bl2原癌基因家族是一組存在于線粒體膜及核膜的蛋白質(zhì),與細(xì)胞凋亡關(guān)系親密,其中bl2高表達(dá)可抑制凋亡，bax那么為促凋亡因子。當(dāng)觸發(fā)因素存在時(shí),bl2與bax的比值決定著細(xì)胞是存活或是死亡。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比擬,心肌中促凋亡因子bax的表達(dá)增加,而抑凋亡因子bl2的表達(dá)略有下降，同時(shí)發(fā)生心肌細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，提示凋亡相關(guān)基因可能參與調(diào)控心肌損傷過程。參考文獻(xiàn)1Karnafel.Diabetiardiypathy.Pathphysilgyandlinialipliatins.PrzeglLek,2000,57:9211.2nteagudPT,isesVA.Influenefa

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