肝癌細(xì)胞HepG2與肝癌患者樹突狀細(xì)胞融合瘤苗的體外效應(yīng)

1、肝癌細(xì)胞HepG2與肝癌患者樹突狀細(xì)胞交融瘤苗的體外效應(yīng)張紅梅，張利旺，劉文超，潘伯榮，斯曉明，任軍【關(guān)鍵詞】細(xì)胞交融EffetfavainepreparedbyfusinfHepG2ellsithdendritiellsfrpatientsithhepatellulararinainvitr【Keyrds】dendritiells;ellfusin;arina,hepatellular;iuntherapy【摘要】目的：將肝細(xì)胞癌H患者樹突狀細(xì)胞(Ds)與肝癌細(xì)胞HepG2交融制備瘤苗，檢測其體外誘導(dǎo)同源T細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗HepG2的免疫效應(yīng).要領(lǐng)：以血細(xì)胞分散機(jī)分散富集H患者外周血單個核細(xì)

2、胞PBs，應(yīng)用重組人粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGSF)、白細(xì)胞介素4(rhlL4)體外誘導(dǎo)造就Ds；聚乙二醇交融Ds與肝癌細(xì)胞HepG2,TT法測定交融細(xì)胞(Ds/HepG2)刺激同源T淋巴細(xì)胞增殖分化本領(lǐng)，細(xì)胞毒性實(shí)行檢測DsHepG2誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(TL)對HepG2的特異性殺傷作用.結(jié)果：交融細(xì)胞Ds/HepG2高表告竣熟D外貌分子，此中D8390.4%,D8087.7%,D8684.4%,HLADR98.5%；其刺激同源T淋巴細(xì)胞增殖的本領(lǐng)明顯高于HepG2和Ds；Ds/HepG2活化的TL對HepG2具有明顯殺傷作用，其殺傷率為(63.54.6)%效靶比例為201.結(jié)

3、論：H患者外周血D交融HepG2細(xì)胞可有用誘導(dǎo)同源T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗H免疫效應(yīng)，大概成為H免疫治療的有用途徑.【關(guān)鍵詞】樹突細(xì)胞；細(xì)胞交融；癌，肝細(xì)胞；免疫療法0弁言肝細(xì)胞癌hepatellulararina,H因缺乏特異性腫瘤抗原且抗原性弱，其生物治療相對困難.樹突狀細(xì)胞(dendritiells,Ds)是體內(nèi)成效最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞，可攝娶加工處置懲罰和提呈抗原，并有用激活T細(xì)胞產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答1.將D與肝癌細(xì)胞交融，理論上可實(shí)現(xiàn)D對肝癌細(xì)胞抗原最充實(shí)的提呈，有望得到令人滿足的肝癌生物治療結(jié)果.我們使用細(xì)胞交融技能將D與肝癌細(xì)胞交融，制備交融細(xì)胞疫苗，探究其生物學(xué)特性及抗腫瘤活

4、性，為肝癌D疫苗臨床應(yīng)用提供實(shí)行底子及相干資料.1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料RPI1640造就液、T細(xì)胞尼龍毛柱購自美國Gib公司；Xviv15無血清造就液購自美國abrexBisiene公司；淋巴細(xì)胞分散液、細(xì)胞膜熒光染料PKH26，PKH67，500g/L聚乙二醇(plyethyleneglyl，PEG)為美國Siga公司產(chǎn)物；重組人GSF，IL4為美國PeprTeh公司產(chǎn)物；新型重組人腫瘤壞死因子nrhTNF購自第四軍醫(yī)大門生物技能中央；ELISA檢測試劑盒購自美國RD公司；抗人FITD80,HLADRAb與抗人PED86,D83Ab均為美國BDPharingen公司產(chǎn)物.1.2要領(lǐng)統(tǒng)計學(xué)要領(lǐng)

5、：結(jié)果以xs表現(xiàn)，接納t查驗(yàn)SPSS11.0,P0.05以為有統(tǒng)計學(xué)差異.2結(jié)果倒置顯微鏡下，Ds體積較大，可見典范樹枝狀突起；HepG2細(xì)胞略小，貼壁生長；交融后可見典范雙核細(xì)胞圖1.誘導(dǎo)d7,Ds表達(dá)D8022.6%,D8613.5%,HLADR32.4%,D83低表達(dá)，僅0.34%；與HepG2交融后，上述分子表達(dá)顯著升高，別離為D8087.7%,D8684.4%,HLADR98.5%,D8390.4%，提示交融細(xì)胞具有成熟D特性.熒光顯微鏡下檢測Ds/HepG2細(xì)胞交融率約為30%；流式細(xì)胞儀檢測交融細(xì)胞PKH26與PKH67雙陽性約占38.2%.2.1IL12排泄交融24h后，Ds/

6、HepG2交融細(xì)胞、單純Ds及單純HepG2細(xì)胞排泄IL12別離為386.231.8,71.138.6,13.25.2ng/L，交融細(xì)胞組排泄IL12顯著高于單純Ds及單純HepG2組n=6,P0.01.2.2T細(xì)胞增殖以未加刺激細(xì)胞組作為空缺比較，Ds/HepG2交融細(xì)胞致敏的T細(xì)胞增殖顯著，在各濃度的刺激指數(shù)SI均明顯高于Ds組及HepG2組(n=3,P0.01，圖2.2.3TL效應(yīng)ELISA結(jié)果表現(xiàn)Ds/HepG2，單純Ds及單純HepG2刺激的T細(xì)胞與HepG2共造就24h后，上清中INF含量別離為273.370.7,142.639.2,92.022.2ng/L,Ds/HepG2組顯著

7、高于比較組(n=3,P0.01).同時，Ds/HepG2交融瘤苗刺激的T細(xì)胞對HepG2細(xì)胞殺傷率均顯著高于比較組n=3,P0.05;Ds/HepG2,Ds或HepG2刺激的T細(xì)胞對非肝癌細(xì)胞K562均無顯著殺傷活性，提示Ds/HepG2交融瘤苗可有用誘導(dǎo)產(chǎn)生HepG2特異性TL.3討論原發(fā)性肝癌是我國常見惡性腫瘤之一，此中90%為H，手術(shù)切除是如今唯一大概根治的療法，但術(shù)后5a復(fù)發(fā)率高達(dá)40%60%，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移已成為H患者恒久保存的重要停滯2.腫瘤疫苗具有激活免疫體系、誘導(dǎo)特異性TL殺傷腫瘤細(xì)胞的成效，可用于防范H術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移.作為腫瘤疫苗研究熱門之一的D，是如今成效最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞，高程度

8、表達(dá)抗原提呈歷程必須的H抗原、共刺激分子，可獲娶加工腫瘤抗原，將其呈遞至T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤抗原特異性D4+和D8+效應(yīng)T細(xì)胞.如今已報道多種D疫苗制備計謀，重要包羅將腫瘤相干抗原基因?qū)隓3-4，應(yīng)用合成抗原肽、腫瘤抗原提取物、抗奇特型抗體或細(xì)胞性腫瘤抗原致敏D5-6等.但多數(shù)腫瘤的相干抗原并不明白，且有用的T細(xì)胞免疫應(yīng)答需針對差異腫瘤抗原的多個T細(xì)胞克隆協(xié)同作用.因此，以單一腫瘤抗原刺激D舉行免疫治療，一方面特異性腫瘤抗原難以獵取，另一方面未必激活有用的TL，且技能條件要求較高，不宜臨床推廣.而D與腫瘤細(xì)胞交融計謀7，理論上可將全部腫瘤抗原結(jié)合于D，使其既具有腫瘤細(xì)胞的全部抗原性，通過

9、D抗原提呈成效為HI類分子復(fù)合體提供一連的內(nèi)源性腫瘤抗原8，又具有激活T細(xì)胞的成效.我們以H患者外周血PB為泉源誘導(dǎo)D，經(jīng)rhGSF,rhIL4體外造就1k后，與肝癌細(xì)胞HepG2交融.流式細(xì)胞儀檢測表現(xiàn)D/HepG2交融細(xì)胞表達(dá)高程度HLADR,D83,D80,D86等成熟D成效分子，顯著高于交融前D表達(dá)上述分子的程度；同時，交融細(xì)胞IL12排泄量顯著增長，提示細(xì)胞交融計謀可促進(jìn)D成熟，使其得到強(qiáng)盛的抗原提呈成效和激活T細(xì)胞的本領(lǐng).混淆淋巴細(xì)胞反響證明交融細(xì)胞可有用刺激同源T淋巴細(xì)胞增殖，明顯高于單純D和HepG2的刺激本領(lǐng).活化T細(xì)胞排泄IFN的程度可作為細(xì)胞毒性效應(yīng)的檢測指標(biāo)之一，我們接

10、納ELISA法測定D/HepG2交融細(xì)胞致敏T細(xì)胞排泄的IFN，創(chuàng)造其排泄量明顯高于比較組；體外殺傷試驗(yàn)表現(xiàn)交融細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的TL對HepG2具有明顯的特異殺傷作用.我們的結(jié)果表白，H患者D與H細(xì)胞交融，可有用誘導(dǎo)特異性抗H免疫應(yīng)答，有望成為治療和防范H轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的新途徑，該要領(lǐng)對未明白特異抗原的腫瘤舉行D自動性免疫治療也具有很強(qiáng)的有用代價.【參考文獻(xiàn)】1YaV,Platell,HallJ.DendritiellsJ.ANZJSurg,2002,72(7):501-506.2aiRL,eng,LuHY,etal.Segregatinanalysisfhepatellulararinainader

11、atelyhighinideneareafEasthinaJ.rldJGastrenterl,2022,9(11):2428-2432.3ZhuY,BshL,SalgallerL.urrentethdsfrladingdendritiellsithturantigenfrtheindutinfantituriunityJ.JIunther,2002,25:289-303.4馬俊芬，黃幼田，趙明耀，等.轉(zhuǎn)染pDNA3hEA的人樹突狀細(xì)胞按捺G803裸鼠移植瘤的生長J.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2022,26(19):1802-1804.5KaJY,Zhang,hen,etal.Superireffiay

12、fdendritiellturfusinvaineparedithturlysatepulseddendritiellvaineinlnanerJ.IunlLett,2022,101(2):154-159.6KidS,hana,Liu,etal.Dendritiellsfusedithhuananerells:rphlgy,antigenexpressin,andTellstiulatinJ.linIunl,2022,113(3):261-269.7JantsheffP,SpagnliG,ZajaP,etal.ellfusin:Anapprahtgeneratingnstitutivelyprliferatinghuanturantigenpresentingells