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文檔簡介
1、核酸生成(一)名詞解釋.半保留復(fù)制(semiconservative replication.不對稱轉(zhuǎn)錄(asymmetric trancription :. 逆轉(zhuǎn)錄(reverse transcription ).岡崎片段(Okazaki fragment ).復(fù)制叉(replication fork ).領(lǐng)頭鏈(leading strand ).隨后鏈(lagging strand ).有意義鏈(sense strand ).光復(fù)活(photoreactivation ).重組修復(fù)(rebination repair ).內(nèi)含子(intron ).外顯子(exon).基因載體(genoni
2、c vector ).質(zhì)粒(plasmid )(二)填空題. DNA復(fù)制是定點(diǎn)雙向進(jìn)行的, 股的合成是,并且合成方向和復(fù)制 叉移動(dòng)方向相同; 股的合成是 的,合成方向與復(fù)制叉移動(dòng)的方向相反。每個(gè)岡崎片段是借助于連在它的 末端上的一小段 而合成的; 所有岡崎片段鏈的增長都是按 方向進(jìn)行。. DNA連接酶催化的連接反應(yīng)需要能量,大腸桿菌由 供能,動(dòng)物細(xì)胞由 供能。.大腸桿菌RNAIK合酶全酶由 組成;核心酶的組成是 。參與識別起 始信號的是 因子。.基因有兩條鏈,作為模板指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的那條鏈稱 鏈。.以RNAJ模板合成DNA爾,由 酶催化。. DNM UpGpCpAh另I經(jīng)0.3NKOHR NaseT
3、和牛胰RNaseI處理所得結(jié)果:DNA: 0.3NKOH ; RNaseT: ; RNase I:;UpGpCpA0.3NKOH ; RNaseT: ; RNase I : 。.基因突變形式分為: , , 和 四類。.亞硝酸是一個(gè)非常有效的誘變劑,因?yàn)樗芍苯幼饔糜贒NA使堿基中 基氧化成 基,造成堿基對的 o.所有岡崎片段的延伸都是按 方向進(jìn)行的。.前導(dǎo)鏈的合成是 的,其合成方向與復(fù)制叉移動(dòng)方向 ;隨后鏈的 合成是 的,其合成方向與復(fù)制叉移動(dòng)方向 。.引物酶與轉(zhuǎn)錄中的 RNA聚合酶之間的差別在于它對 不敏感,并可以作為底物。. DNAK合酶I的催化功能有、和。. DNAU旋酶又叫 ,它的功能
4、是 。.細(xì)菌的環(huán)狀DNA!常在一個(gè) 開始復(fù)制,而真核生物染色體中的線形 DNA可以在 起始復(fù)制。.大腸桿菌DNAi5合酶m的 活性使之具有 功能,極大地提高了 DNA復(fù)制的保真度。.大腸桿菌中已發(fā)現(xiàn) 種DNAIK合酶,其中 負(fù)責(zé)DNAM制,負(fù)責(zé)DNA傷修復(fù)。. DNAU除修復(fù)需要的酶有 、和。.在DNAM制中,可防止單鏈模板重新締合和核酸酶的攻擊。. DN*成時(shí),先由引物酶合成 ,再由 在其3端合成DNA鏈,然后由 切除引物并填補(bǔ)空隙,最后由 連接成完整的鏈。.原核細(xì)胞中各種RNA是催化生成的,而真核細(xì)胞核基因的轉(zhuǎn)錄分別由種RNA合酶催化,其中rRNA基因由 轉(zhuǎn)錄,hnRNAS因由 轉(zhuǎn)錄,各類
5、小分子量RAN則是 的產(chǎn)物。. 一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位一般應(yīng)包括 序列、序列和 順序。.真核細(xì)胞中編碼蛋白質(zhì)的基因多為 。編碼的序列還保留在成熟 mRNA 中的是,編碼的序列在前體分子轉(zhuǎn)錄后加工中被切除的是 。在基 因中被分隔,而在成熟的mRN府列被拼接起來。.染色質(zhì)中的 蛋白和 蛋白對轉(zhuǎn)錄均有調(diào)節(jié)作用,其中 的調(diào)節(jié)作用具有組織特異性。(三)選擇題. DNAR半保留方式復(fù)制。如果一個(gè)完全放射標(biāo)記的雙鏈 DNA分子,放在不含 有放射標(biāo)記物的溶液中,進(jìn)行兩輪復(fù)制,所產(chǎn)生的四個(gè) DN吩子的放射活性 將會怎樣:A.半數(shù)分子沒有放射性B .所有分子均有放射性C.半數(shù)分子的兩條鏈均有放射性D . 一個(gè)分子的兩條鏈均
6、有放射性E.四個(gè)分子均無放射性.參加DNAS制的酶類包括:(1) DN咪合酶田;(2)解鏈酶;(3) DN咪合酶I ; (4) RNAS合酶(引物酶);(5) DN啦接酶。其作用順序是:A. (4)、(3)、(1)、(2)、(5)B.(2)、(3)、(4)、(1)、(5)C. (4)、(2)、(1)、(5)、(3)D.(4)、(2)、(1)、(3)、(5)E. (2)、(4)、(1)、(3)、(5).如果15N標(biāo)記的大腸桿菌轉(zhuǎn)入14N培養(yǎng)基中生長了三代,其各種狀況的 DN的純15n純15n1514 ,NN一DNA雜種DNAA.1/81/86/8B.1/807/8C.01/87/8D.02/86
7、/8E.04/84/8子比例應(yīng)是下列哪一項(xiàng):純14n-DNA.下列關(guān)于DNAM制特點(diǎn)的敘述哪一項(xiàng)錯(cuò)誤的:A. RNAW DNAS共價(jià)相連B .新生DNAS7呂5一3方向合成C. DNAS的合成是不連續(xù)的D .復(fù)制總是定點(diǎn)雙向進(jìn)行的E. DNA&一條母鏈上沿5一3方向合成,而在另一條母鏈上則沿 3一5方 向合成5. DNAM制時(shí),5TpApGpA p 3序列產(chǎn)生的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)是下列哪一種:A. 5 TpCpTpAp3 B . 5 ApTpCpTp3C. 5 -UpCpUpAp3D . 5 GpCpGpAp3E. 3 TpCpTpAp56.下列關(guān)于DNA合酶I的敘述哪一項(xiàng)是正確的:A.它起DNA多復(fù)酶
8、的作用但不參加DNAM制過程B.它彳S化dNT腺合時(shí)需要模板和引物C.在DNAS制時(shí)把岡崎片段連接成完整的隨從鏈D.它催化產(chǎn)生白岡崎片段與 RN聞I物鏈相連E.有些細(xì)菌突變體其正常生長不需要它7,下列關(guān)于真核細(xì)胞DNAIK合酶活性的敘述哪一項(xiàng)是正確的:A.它僅有一種B它不具有核酸酶活性C.它的底物是二磷酸脫氧核甘D 它不需要引物E.它按3 -5 方向合成新生鏈.從正在進(jìn)行DNA制的細(xì)胞分離出的短鏈核酸一一岡崎片段,具有下列哪項(xiàng) 特性:A,它們是雙鏈的B.它們是一組短的單鏈DNAfr段C.它彳門是DNA-RNAfe化雙鏈 D .它們被核酸酶活性切除E.它們產(chǎn)生于親代DN頌白糖-磷酸骨架的缺口處.
9、切除修復(fù)可以糾正下列哪一項(xiàng)引起的 DNA傷:A.堿基缺失B .堿基插入C .堿基甲基化D.胸腺喀呢二聚體形成 E .堿基烷基化.大腸桿菌DNA!接酶需要下列哪一種輔助因子?A. FAD乍為電子受體B . NADP乍為磷酸供體C. NAD成活性腺甘酰酶D . NAD為電子受體E.以上都不是.下列關(guān)于RNAf口 DN咪合酶的敘述哪一項(xiàng)是正確的:RNAK合酶用二磷酸核甘合成多核甘酸鏈RNAK合酶需要引物,并在延長鏈的 5端加接堿基DNAS合酶可在鏈的兩端加接核甘酸DNAX能以RNAJ模板合成DNAE.所有RN咪合酶和DN臊合酶只能在生長中的多核甘酸鏈的3端加接核甘酸.紫外線照射引起DNAt常見的損傷
10、形式是生成胸腺喀呢二聚體。在下列關(guān)于DN砌子結(jié)構(gòu)這種變化的敘述中,哪項(xiàng)是正確的:A.不會終止DNAfi制B,可由包括連接酶在內(nèi)的有關(guān)酶系統(tǒng)進(jìn)行修復(fù)C.可看作是一種移碼突變D.是由胸腺喀呢二聚體酶催化生成的E.引起相對的核甘酸鏈上胸腺喀呢間的共價(jià)聯(lián)結(jié).下列哪種突變最可能是致死的:A.腺喋吟取代胞喀呢B.胞喀呢取代鳥喋吟C.甲基胞喀噬取代胞喀呢D .缺失三個(gè)核甘酸E.插入一個(gè)核甘酸.鐮刀形紅細(xì)胞貧血病是異常血紅蛋白純合子基因的臨床表現(xiàn)。B -鏈變異是 由下列哪種突變造成的:A.交換B .插入 C .缺失 D .染色體不分離E .點(diǎn)突變.在培養(yǎng)大腸桿菌時(shí),自發(fā)點(diǎn)突變的引起多半是由于:A.氫原子的互變
11、異構(gòu)移位B . DNA-磷酸骨架的斷裂C.插入一個(gè)堿基對D .鏈間交聯(lián) E .脫氧核糖的變旋.插入或缺失堿基對會引起移碼突變,下列哪種化合物最容易造成這種突變:A. 口丫噬衍生物 B . 5-澳尿喀噬C.氮雜絲氨酸D .乙基乙磺酸E .咪唾硫喋吟.在對細(xì)菌DNAS制機(jī)制的研究中,常常用到胸腺喀噬的類似物 5-澳尿喀噬, 其目的在于:A.引起特異性移碼突變以作為順序研究用B.在胸腺喀呢參入部位中止DNA&成C.在DNAS和載體中提供一個(gè)反應(yīng)基D.合成一種密度較高的DNA便用離心分離法予以鑒別E.在DNA中造成一個(gè)能被溫和化學(xué)方法裂解的特異部位18 .關(guān)于DNA旨導(dǎo)的RN*成,下列敘述哪一項(xiàng)是錯(cuò)誤
12、的:A.只有在DN的在時(shí),RN臊合酶才能催化磷酸二酯鍵的生成B.轉(zhuǎn)錄過程中,RN臊合酶需要引物C. RNAg的合成是從5-3端D.大多數(shù)情況下只有一股DNASS作為模板E.合成的RNAS從來沒有環(huán)狀的19.下列關(guān)于6因子的敘述哪一項(xiàng)是正確的:A.是RNA合酶的亞基,起辨認(rèn)轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的作用B.是DNA合酶的亞基,容許按 53和3-5雙向合成C.是50S核蛋白體亞基,催化肽鏈生成D.是30S核蛋白體亞基,促進(jìn) mRNAf之結(jié)合E.在30S亞基和50S亞基之間起搭橋作用,構(gòu)成 70S核蛋白體20.真核生物RN咪合酶I催化轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是:A. mRNA B . 45S-rRNAC. 5S-rRNA D
13、. tRNA E . SnRNA.下列關(guān)于真核細(xì)胞DNAM制的敘述哪一項(xiàng)是錯(cuò)誤的:A,是半保留式復(fù)制B .有多個(gè)復(fù)制叉C.有幾種不同的DN咪合酶 D ,復(fù)制前組蛋白從雙鏈DNA兌出E.真核DN咪合酶不表現(xiàn)核酸酶活性.下列關(guān)于原核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄終止的敘述哪一項(xiàng)是正確的:A.是隨機(jī)進(jìn)行的B .需要全酶的p亞基參加C.如果基因的末端含G-C豐富的回文結(jié)構(gòu)則不需要p亞基參加D.如果基因的末端含A-T豐富的片段則對轉(zhuǎn)錄終止最為有效E.需要p因子以外的ATP酶.下列關(guān)于大腸桿菌DNA!接酶的敘述哪些是正確的:A.催化DNW螺旋結(jié)構(gòu)之?dāng)嚅_的DNAg間形成磷酸二酯鍵B.催化兩條防離的單鏈DN6子間形成磷酸二酯鍵C.
14、產(chǎn)物中不含AMPD.需要ATP作能源24.下列關(guān)于真核細(xì)胞 mRNA勺敘述不正確的是:A.它是從細(xì)胞核的RNA1體一核不均RNAf成的B.在其鏈的3端有7-甲基鳥音,在其5端連有多聚腺甘酸的PolyA尾巴C.它是從前RNA!過剪接酶切除內(nèi)含子連接外顯子而形成的D.是單順反子的(四)是非判斷題()1.中心法則概括了 DNAS信息代謝中的主導(dǎo)作用。()2.原核細(xì)胞DNAM制是在特定部位起始的,真核細(xì)胞則在多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)起 始進(jìn)行復(fù)制。()3.逆轉(zhuǎn)錄酶催化RNA旨導(dǎo)的DNA成不需要RNA引物。()4.原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中許多 mRNAB是多順反子轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。()5.因?yàn)镈NA兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?,在雙向復(fù)
15、制中一條鏈按5一3的方向合成,另一條鏈按3一5的方向合成。()6.限制性內(nèi)切酶切割的DNAt段都具有粘性末端。()7.已發(fā)現(xiàn)一些RNAfff體分子具有催化活性,可以準(zhǔn)確地自我剪接,被稱為 核糖酶(ribozyme ),或稱核酶。()8.重組修復(fù)可把DNA傷部位徹底修復(fù)。()9.原核生物中mRNAr股不需要轉(zhuǎn)錄后加工。()10. RNAK合酶對弱終止子的識別需要專一的終止因子 (如P蛋白)。()11.原核細(xì)胞啟動(dòng)子中 RNA聚合酶牢固結(jié)合并打開 DNA雙鏈的部分稱為 Pribnow box,真核細(xì)胞啟動(dòng)子中相應(yīng)的順序稱為Hogness box,因?yàn)楦缓珹-T,又稱 TATA box。()12.增
16、強(qiáng)子(endancer)是真核細(xì)胞DNAk一類重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件,它 們自己并沒有啟動(dòng)子活性,卻具有增強(qiáng)啟動(dòng)子活性轉(zhuǎn)錄起始的效能。(五)問答題.簡述中心法則。.DNA復(fù)制的基本規(guī)律?.簡述DNAM制的過程?.簡述DNAM制時(shí)酶系。.簡述原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的RNA合酶有何不同?.簡述RNA專錄的過程?.簡述基因工程過程。參考答案(一)名詞解釋.半保留復(fù)制:雙鏈DNA勺復(fù)制方式,其中親代鏈分離,每一子代 DNA子由 一條親代鏈和一條新合成的鏈組成。.不對稱轉(zhuǎn)錄:轉(zhuǎn)錄通常只在 DNA勺任一條鏈上進(jìn)行,這稱為不對稱轉(zhuǎn)錄。.逆轉(zhuǎn)錄:Temin Baltimore各自發(fā)現(xiàn)在RN內(nèi)中瘤病毒中含有RNA旨導(dǎo)的
17、DNA 聚合酶,才證明發(fā)生逆向轉(zhuǎn)錄,即以 RNA模板合成DNA.岡崎片段:一組短的DN*段,是在DNAM制的起始階段產(chǎn)生的,隨后又被 連接酶連接形成較長的片段。在大腸桿菌生長期間,將細(xì)胞短時(shí)間地暴露在 瓶標(biāo)記的胸腺喀呢中,就可證明岡崎片段的存在。岡崎片段的發(fā)現(xiàn)為DNAM制的科恩伯格機(jī)理提供了依據(jù)。.復(fù)制叉:復(fù)制DNA分子的Y形區(qū)域。在此區(qū)域發(fā)生鏈的分離及新鏈的合成。.領(lǐng)頭鏈:DNA勺雙股鏈?zhǔn)欠聪蚱结躎的,一條鏈?zhǔn)?5,-3/方向,另一條是 65 方向,上述的起點(diǎn)處合成的領(lǐng)頭鏈,沿著親代 DNA單鏈的g-5/方向(亦即 新合成的DNAft S-3/方向)不斷延長。所以領(lǐng)頭鏈?zhǔn)沁B續(xù)的。.隨后鏈:已
18、知的DN咪合酶不能催化DNASS朝3,-5/方向延長,在兩條親代 鏈起點(diǎn)的3/端一側(cè)的DNAS復(fù)制是不連續(xù)的,而分為多個(gè)片段,每段是朝 5/ -3/方向進(jìn)行,所以隨后鏈?zhǔn)遣贿B續(xù)的。.有意義鏈:即華森鏈,華森一一克里格型 DNA中,在體內(nèi)被轉(zhuǎn)錄的那股 DNA 鏈。簡寫為W strand。.光復(fù)活:將受紫外線照射而引起損傷的細(xì)菌用可見光照射,大部分損傷細(xì)胞 可以恢復(fù),這種可見光引起的修復(fù)過程就是光復(fù)活作用。.重組修復(fù):這個(gè)過程是先進(jìn)行復(fù)制,再進(jìn)行修復(fù),復(fù)制時(shí),子代DNAg損傷的對應(yīng)部位出現(xiàn)缺口,這可通過分子重組從完整的母鏈上, 將一段相應(yīng)的多 核甘酸片段移至子鏈的缺口處,然后再合成一段多核昔酸鍵來
19、填補(bǔ)母鏈的缺 口,這個(gè)過程稱為重組修復(fù)。.內(nèi)含子:真核生物的mRNAf體中,除了貯存遺傳序列外,還存在非編碼序 歹I,稱為內(nèi)含子。.外顯子:真核生物的 mRN蒯體中,編碼序列稱為外顯子。.基因載體:外源DNAt段(目的基因)要進(jìn)入受體細(xì)胞,必須有一個(gè)適當(dāng)?shù)?運(yùn)載工具將帶入細(xì)胞內(nèi),并載著外源DN起進(jìn)行復(fù)制與表達(dá),這種運(yùn)載工 具稱為載體。.質(zhì)粒:是一種在細(xì)菌染色體以外的遺傳單元,一般由環(huán)形雙鏈DNA與成,其大小從1200Kb(二)、填空題答案.領(lǐng)頭鏈;連續(xù)的;隨從鏈;不連續(xù)的;5;RNA 5-3。. NAD; ATR.。2Pp。; 2P1;仃.有意義鏈。.反向轉(zhuǎn)錄;逆轉(zhuǎn)錄酶。.不作用;不作用;不作
20、用; Up+Gp+Cp+AUpGp+CpAGpCp+Up+ A.轉(zhuǎn)換;顛換;插入;缺失。.氨基;酮基;轉(zhuǎn)換。. 5 -3.連續(xù)相同不連續(xù)相反.利福平dNTP. 5 一3聚合3 5外切5 -3外切 焦磷酸解作用,焦磷酸交換 作用.拓樸異構(gòu)酶 使超螺旋DN較為松馳狀.復(fù)制位點(diǎn) 多位點(diǎn). 3 一5核酸外切酶 校對. 3 DNA聚合酶田 DNA聚合酶H.專一的核酸內(nèi)切酶解鏈酶 DNA聚合酶I DNA連接酶. SSB(單鏈結(jié)合蛋白). RNASI物 DNA聚合酶田 DNA聚合酶I DNA連接酶.同一 RNA合酶 3 RNA 聚合酶I RNA聚合酶H RNA聚合酶田.啟動(dòng)子 編碼 終止子.隔裂基因外顯子內(nèi)
21、含子外顯子內(nèi)含子.組非組 非組(三)選擇題(A) DNA半保留復(fù)制需要來自親代的每一條標(biāo)記鏈作模板合成互補(bǔ)鏈,以保 持與親代相同的完整結(jié)構(gòu)。因此,在無記溶液中進(jìn)行第一輪復(fù)制將產(chǎn)生兩個(gè) 半標(biāo)記分子。第二輪復(fù)制將產(chǎn)生兩個(gè)半標(biāo)記分子和兩個(gè)不帶標(biāo)記的雙鏈DNA分子。(E)在DNAt正能夠開始復(fù)制之前,必須由解鏈酶使DNW鏈結(jié)構(gòu)局部解鏈。 在每股單鏈DNA模板上,由RN咪合酶(引物酶)催化合成一小段(大約 1050個(gè)核甘酸)互補(bǔ)RN聞|物。然后由DN咪合酶出向引物3端加入脫 氧核昔一5三磷酸,從5 -3方向合成DNA片段(岡崎片段),直至 另一 RN聞I物的5末端。接著在DNAi5合酶I的作用下將RN聞
22、I物從5 端逐步降解除去與之相鄰的DNAfr段由3端延長,以填補(bǔ)RNA!去后留下 的空隙。最后由DNA!接酶將DNAt段連接成完整連續(xù)的DNAS。(D) DNAg制三代后,每八個(gè)完整 DNA雙鏈中將有兩個(gè)雙鏈分子含有一股親 代鏈。(E) DNA由DNA聚合酶田復(fù)合體復(fù)制的。該酶催化脫氧三磷酸核甘以核甘 酸的形式加到RN聞I物鏈上,選擇只能與親鏈DNA1基互補(bǔ)配對的核甘酸參 入。參入的第一個(gè)脫氧核甘酸以共價(jià)的磷酸二酯鍵與引物核甘酸相連。鏈的生長總是從5向3延伸的。DNAM制開始于特異起始點(diǎn),定點(diǎn)雙向進(jìn)行。(A) DNAS制必需胸腺喀噬(T)與腺口g吟(A)配對,鳥喋吟(G)與胞喀呢 (C)配對,
23、從而使雙螺旋兩鏈之間部分地靠氨基與酮基間形成的氫鍵維系 起來。鏈本身是反向平行方向合成的,即題中所述之磷酸二酯鍵的5 -3 順序決定其沿3 -5方向互補(bǔ)。(B) DNA聚合酶I在起聚合酶作用時(shí)必需要有模板和引物。這個(gè)一條肽鏈的 蛋白質(zhì)除聚合酶活性外還具有 3和5外切核酸酶活性。在正常 DNAS制 時(shí),它的作用是水解RNASI物鏈(5 -3外切核酸酶活性)并用模板指導(dǎo) 的脫氧核甘酸取代它們(聚合功能)。DNAIK合酶I也參與DNA修復(fù)。例如 在切除胸腺喀呢二聚體中起 5 -3外切核酸酶的作用。在正常 DNA復(fù)制 時(shí),DN咪合酶I表現(xiàn)3外切核酸酶活性,切除錯(cuò)誤參入的脫氧核甘酸殘 基。岡崎片段是由D
24、N臊合酶田復(fù)合體產(chǎn)生的,而不是DN咪合酶I。在除 去RN聞|物鏈后,DNAt段通過DNA1接酶連接。DN咪合酶H,其功能目 前還不清楚,一些細(xì)菌突變體,雖無 DN咪合酶H,但卻能正常生長。DNA 聚合酶I則是正常生長所必需的。(B)真核生物中有三種 DNA05合酶,a B及丫。 DNApola在細(xì)胞核DNAM制 中起作用;DNApolB在細(xì)胞核DNA修復(fù)中起彳用;而 DNApola則在線粒體 DNAS制中起作用。它們都需要引物,都用脫氧三磷酸核甘作底物,都按5 -3方向合成新生DNAo真核生物DNA合酶任何一種均不表現(xiàn)核酸酶 活性。(B) DNAM制時(shí),如果兩股鏈按5 -3方向先合成短的DNA
25、t段,然后再 連接成連續(xù)的鏈,這就能使 DNA的兩條反向互補(bǔ)鏈能夠同時(shí)按 5 -3方 向的聚合機(jī)制進(jìn)行復(fù)制。岡崎首先從大腸桿菌中分離出正在復(fù)制的新生 DNA并發(fā)現(xiàn)這新生DNA由一些不連續(xù)片段(岡崎片段)所組成。在大腸 桿菌生長期間,將細(xì)胞短時(shí)間地暴露在瓶標(biāo)記的胸腺喀呢中,在將細(xì)胞DNA變性處理(也就是解鏈)之后,岡崎分離得到了標(biāo)記的DNAt段。它們是單鏈的,并且由于DNAIK合酶田復(fù)合體用RNA乍引物,因此新生岡崎片段以共 價(jià)鍵連著小段RNAiS,但它們既不是堿基互補(bǔ)的 RNA-DNA鏈雜合體,也 不是來自親鏈的片段。新生岡崎片段決不會被核酸酶切除。(D) DNA鏈內(nèi)胸腺喀呢二聚體可因紫外線(
26、US照射而形成。專一的修復(fù)系 統(tǒng)依賴UV-特異的內(nèi)切核酸酶,它能識別胸腺嚅呢二聚體,并且通常在二 聚體5側(cè)切斷磷酸二酯鍵從而在 DNAS內(nèi)造成一個(gè)缺口。損傷序列的切除 以及用完整的互補(bǔ)鏈作為模板重新合成切去的片段都是由DNA聚合酶I來完成的。主鏈與新合成片段之間的裂口則由 DNA!接酶接合。堿基缺失、插 入、甲基化,或烷基化均不能作為切除修復(fù)體系靶子而為UV-特異性內(nèi)切核酸酶所識別。(C)DNA1接酶能夠連接留有缺口的 DNA!或閉合單股DNAS以形成環(huán)狀DNA 分子。該酶需要一股鏈末端的游離 31OH和另一股鏈末端的5:磷酸,并且 要求這兩股鏈?zhǔn)请p鏈DNA勺一部分。反應(yīng)是吸能的,因此需要能源
27、。在大腸 桿菌和其它細(xì)菌中,能源是NAD子中的焦磷酸鍵。NAD5fc與酶形成酶一AMP 復(fù)合物,同時(shí)釋放叮 NAD的尼克酰胺單核甘酸;酶一 AMP復(fù)合物上的AMP 再轉(zhuǎn)移到DNA!的5。磷酸基上,使其活化,然后形成磷酸二酯鍵并釋放 AMP(E) RNAK合酶和DN咪合酶都是以三磷酸核甘(NTP或dNTP為其底物, 這兩種聚合酶都是在生長中的多核甘酸鏈的 3端加接核甘酸單位。DNM 合酶合成與DNAS補(bǔ)的DNA合成與RNAS補(bǔ)的DNA勺酶稱作逆轉(zhuǎn)錄酶。(B)紫外線(260nn)照射可引起DNA子中同一條鏈相鄰胸腺喀呢之間形 成二聚體,并從該點(diǎn)終止復(fù)制。該二聚體可由包括連接酶在內(nèi)的酶系切除和 修復(fù)
28、,或在光復(fù)合過程中,用較長(330450nn)或較短(230nm波長的 光照射將其分解。(E) DN頌中插入一個(gè)額外核甘酸會引起移碼突變并使突變點(diǎn)以后轉(zhuǎn)錄的全 部mRNAfe生翻譯錯(cuò)誤。題中列出的所有其它突變通常僅引起一個(gè)氨基酸的 錯(cuò)誤(如題中的A或B),或從氨基酸序列中刪除一個(gè)氨基酸(D),或在氨 基酸順序中完全沒有錯(cuò)誤。需要指出的是,如果A或B突變導(dǎo)致生成“無意 義”或鏈終止密碼子,則這種突變所造成的后果也會象移碼突變那樣是致死 的。(E)在Hbs中,B鏈上一個(gè)繳氨酸殘基替換了谷氨酸,這是由于一個(gè)核甘酸 堿基的點(diǎn)突變所造成的后果。即位于三聯(lián)體第二位的胸腺喀呢轉(zhuǎn)換為腺喋 吟。(A)自發(fā)點(diǎn)突變
29、多半是由于喋吟或喀呢堿中氫原子的互變異構(gòu)移位而引起的。 在DNAM制中,這種移位會引起堿基配對的改變。某些誘變劑如5澳尿喀噬和2氨基喋吟可促進(jìn)DNAM基的互變異構(gòu)。(A) 口丫噬衍生物可導(dǎo)致一個(gè)堿基對的插入或缺失,從而引起移碼突變。5-澳尿喀呢可引起轉(zhuǎn)換突變,因?yàn)榘娜〈诵叵倏κ傻募谆@樣則增加了烯 醇式互變異構(gòu)物與鳥喋吟而不是腺喋吟進(jìn)行堿基配對的可能性。咪唾硫喋吟可轉(zhuǎn)變?yōu)?琉基喋吟,后者是喋吟的類似物。乙基乙磺酸可通過使鳥喋吟 烷基化引起轉(zhuǎn)換突變。(D) 5澳尿喀呢可代替胸腺喀呢參入到 DNA中,從而產(chǎn)生密度較高的DNA 然后可在氯化葩密度梯度中用離心法對新合成的DNA8行定量分析。DNA
30、中的5澳尿喀噬較正常胸喀呢既不更活潑又不更易被斷裂,也不能象口丫呢染料那樣引起移碼突變。(B) RN臊合酶必須以DNAJ模板催化合成RNA通常只轉(zhuǎn)錄雙螺旋DNAM中的一條鏈。RN&S的合成方向是從5到3端,產(chǎn)物從來沒有環(huán)狀分子。 與DN咪合酶不同,RN臊合酶不需要引物。(A)因子是RN咪合酶的一個(gè)亞基,因子本身沒有催化功能,它的作用 是與核心酶結(jié)合,對轉(zhuǎn)錄的起始特異性起決定性的作用。 在有6因子的情況 下,RN咪合酶將選擇DNAt備轉(zhuǎn)錄的那條鏈,并在適當(dāng)?shù)膯?dòng)基因部位開 始轉(zhuǎn)錄。(B)真核生物有三種RN咪合酶,它們分別催化45S rRNA(RANS合酶I) mRNA口 SnRNARNAK合酶
31、H),以及 tRNA和 5S rRNA (RNAK合酶田)的 合成。這三種酶可以根據(jù)它們對抗生素a 一鵝膏蕈堿的敏感度不同加以區(qū) 別:RNA合酶I耐受;RNAK合酶H極敏感;RNAK合酶田中等敏感。RNA 聚合酶I催化合成的45S原始轉(zhuǎn)錄本,經(jīng)轉(zhuǎn)錄后加工而成為成熟的18S-rRNA 5.8S rRNA和 28S rRNA(D)真核生物DNA&多個(gè)復(fù)制叉上按半保留方式復(fù)制。真核生物有三種DNA聚合酶:a、B及丫。分別參加細(xì)胞核 DNAS制,細(xì)胞核DNA多復(fù),以及線 粒體DNA復(fù)制。真核生物DNA聚合酶一般都不具有核酸酶活性。真核 DNA 復(fù)制時(shí),組蛋白不從DNAS離下來,而是留在含有領(lǐng)頭子鏈的雙
32、鏈 DNA。 新合成的組蛋白則與隨從子鏈結(jié)合。(C)原核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄終止不是隨機(jī)進(jìn)行的, 據(jù)目前所知有兩種轉(zhuǎn)錄終止方式即 依賴Rho ( p )因子與不依賴Rho因子的方式。不依賴 Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止 與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物形成二級結(jié)構(gòu)有關(guān),即在基因的末端含 GHC豐富的回文結(jié)構(gòu), 當(dāng)RNA專錄延長至該部位時(shí),按模板轉(zhuǎn)錄出的RNA1基序列會立即形成發(fā)夾 型的二級結(jié)構(gòu),這種二級結(jié)構(gòu)是阻止轉(zhuǎn)錄繼續(xù)向下游推進(jìn)的關(guān)鍵。Rho因子是RNA合酶之外的一種蛋白質(zhì),有控制轉(zhuǎn)錄終止的作用。Rho因子本身似乎就具有ATP酶的活性。B: DNA1接酶催化DNAS兩段之間形成磷酸二酯鍵, 但這兩段必須是在DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)之中,它
33、不能將兩條游離的單鏈DN砌子連接起來。在大腸桿菌 中,成鍵所需能量來自NAD產(chǎn)物是AMPF口煙酰胺單核甘酸;而在某些動(dòng)物 細(xì)胞以及噬菌體中,則以ATP作為能源。DNA接酶在DN*成、修復(fù)以及 重組中都是十分重要的。24.B:真核mRN是從2至20千堿基長的細(xì)胞核RNA體核不均一RNAhnRNA 形成的。所有真核mRNA(瑞均具有5 5焦磷酸連接的7-甲基鳥昔(帽結(jié) 構(gòu))。大多數(shù)真核mRNA勺3端連有150至200個(gè)核甘酸長度的聚腺甘酸尾 鏈。從mRNAf體切除內(nèi)含子是由具有高度專一性的酶性催化完成的。內(nèi)含 子是不被翻譯的。真核生物mRNA1單順反子的。(四)是非題1.對2.對3.錯(cuò)4 .錯(cuò)5.
34、錯(cuò)6 .錯(cuò)7 .對8.錯(cuò)9.對10 .對11.對12 .對(五)問答題.答:在細(xì)胞分裂過程中通過 DNAB復(fù)制把遺傳信息由親代傳遞給子代,在子 代的個(gè)體發(fā)育過程中遺傳信息由 DNA專遞到RNA最后翻譯成特異的蛋白 質(zhì);在RNA病毒中RNAM有自我復(fù)制的能力,并同時(shí)作為 mRNA指導(dǎo)病 毒蛋白質(zhì)的生物合成;在致癌 RNAW毒中,RNA以逆轉(zhuǎn)錄的方式將遺傳 信息傳遞給DN的子。.答:(1)復(fù)制過程是半保留的。(2)細(xì)菌或病毒DNAB復(fù)制通常是由特定的復(fù)制起始位點(diǎn)開始,真核細(xì)胞染色 體DNAg制則可以在多個(gè)不同部位起始。(3)復(fù)制可以是單向的或是雙向的,以雙向復(fù)制較為常見,兩個(gè)方向復(fù)制的速 度不一定
35、相同。(4)兩條DNA!合成的方向均是從5向3方向進(jìn)行的。(5)復(fù)制的大部分都是半不連續(xù)的,即其中一條領(lǐng)頭鏈?zhǔn)窍鄬B續(xù)的,其他隨 后鏈則是不連續(xù)的。(6)各短片段在開始復(fù)制時(shí),先形成短片段RNA乍為DNA成的引物,這一 RNA 片段以后被切除,并用DNAK補(bǔ)余下的空隙。.答:DNAM制從特定位點(diǎn)開始,可以單向或雙向進(jìn)行,但是以雙向復(fù)制為主。由于DNA雙鏈的合成延伸均為5 -3的方向,因此復(fù)制是以半不連續(xù)的方式 進(jìn)行,可以概括為:雙鏈的解開;RN聞|物的合成;DNAS1的延長;切除RN聞| 物,填補(bǔ)缺口,連接相鄰的DNAt段。(1)雙鏈的解開 在DNA勺復(fù)制原點(diǎn),雙股螺旋解開,成單鏈狀態(tài),形成復(fù)
36、制叉,分別作為模板,各自合成其互補(bǔ)鏈。在復(fù)制叉上結(jié)合著各種各樣與復(fù)制有關(guān) 的酶和輔助因子。RNA引物的合成 引發(fā)體在復(fù)制叉上移動(dòng),識別合成的起始點(diǎn),引發(fā) RNA 引物的合成。移動(dòng)和引發(fā)均需要由 ATP提供能量。以DNA為模板按5 -3的 方向,合成一段引物RNA鏈。引物長度約為幾個(gè)至10個(gè)核甘酸。在引物的5 端含3個(gè)磷酸殘基,3端為游離的羥基。DNAg的延長 當(dāng)RNA引物合成之后,在DN咪合酶田的催化下,以四種 脫氧核糖核甘5-三磷酸為底物,在RNA引物的3端以磷酸二酯鍵連接上脫氧 核糖核甘酸并釋放出PPio DNAg的合成是以兩條親代DNA!為模板,按堿基配 對原則進(jìn)行復(fù)制的。親代 DNA的
37、雙股鏈呈反向平行,一條鏈?zhǔn)?5 -3方向, 另一條鏈?zhǔn)? -5方向。在一個(gè)復(fù)制叉內(nèi)兩條鏈的復(fù)制方向不同,所以新合 成的二條子鏈極性也正好相反。由于迄今為止還沒有發(fā)現(xiàn)一種DNA聚合酶能按3 -5方向延伸,因此子鏈中有一條鏈沿著親代 DNAI鏈的3 -5方向(亦 即新合成的DNA& 5 -3方向)不斷延長。(4)切除引物,填補(bǔ)缺口,連接修復(fù)當(dāng)新形成的岡崎片段延長至一定長度,其3 -OH端與前面一條老片斷的5斷接近時(shí),在DN咪合酶I的作用下,在 引物RNAf DNAt段的連接處切去RNA引物后留下的空隙,由DN咪合酶I催化 合成一段DNAM補(bǔ)上;在DNA連接酶的作用下,連接相鄰的 DNA鏈;修復(fù)摻入
38、 DNAg的錯(cuò)配堿基。這樣以兩條親代 DNAg為模板,就形成了兩個(gè)DNAO殳螺旋 分子。每個(gè)分子中一條鏈來自親代 DNA另一條鏈則是新合成的。.答:(1)原核細(xì)胞大腸桿菌的 RNA聚合酶研究的較深入。這個(gè)酶的全酶由5種亞基(a 20 B 6)組成,還含有2個(gè)Zn原子。在RN的成起始之后,6 因子便與全酶分離。不含6因子的酶仍有催化活性,稱為核心酶。6亞基具有與 啟動(dòng)子結(jié)合的功能,B亞基催化效率很低,而且可以利用別的DNA勺任何部位作 模板合成RNA加入6因子后,則具有了選擇起始部位的作用,6因子可能與核 心酶結(jié)合,改變其構(gòu)象,從而使它能特異地識別 DNA真板鏈上的起始信號。(2)真核細(xì)胞的細(xì)胞
39、核內(nèi)有 RNA合酶I、II和III ,通常由46種亞基組成, 并含有Zn2+0 RNA合酶I存在于核仁中,主要催化rRNA前體的轉(zhuǎn)錄。RNAK合 酶II和田存在于核質(zhì)中,分別催化 mRNAf體和小分子量RNA勺轉(zhuǎn)錄。此外線粒 體和葉綠體也含有RNA合酶,其特性類似原核細(xì)胞的 RNA合酶。.答:RNA專錄過程為起始位點(diǎn)的識別、起始、延伸、終止。(1)起始位點(diǎn)的識別 RNA聚合酶先與DNA模板上的特殊啟動(dòng)子部位結(jié)合,(T 因子起著識別DNA子上的起始信號的作用。在亞基作用下幫助全酶迅速找到 啟動(dòng)子,并與之結(jié)合生成較松弛的封閉型啟動(dòng)子復(fù)合物。 這時(shí)酶與DNA#部結(jié)合, 識別部位大約在啟動(dòng)子的-35位點(diǎn)處。接著是DNA勾象改變活化,得到開放型的 啟動(dòng)子復(fù)合物,此時(shí)酶與啟動(dòng)子緊密結(jié)合,在-10位點(diǎn)處解開DNASES,識別其 中的模板鏈。由于該部位富含A-T堿基對,故有利于DNA單鏈。開放型復(fù)合物一 且形成,DNAg繼續(xù)解鏈,酶移動(dòng)到起始位點(diǎn)。(2)起始留在起始位點(diǎn)的全酶結(jié)合第一個(gè)核甘三磷酸。第一個(gè)核甘三磷酸常是 GTP或ATR形成的啟動(dòng)子、全酶和核甘三磷酸復(fù)合物稱為三元起始復(fù)合物,第 一個(gè)核甘酸摻入的位置稱為轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)。這時(shí)6亞基被釋放脫離核心酶。(3)延伸 從
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