實(shí)驗(yàn)細(xì)胞工程試驗(yàn)報(bào)告

1、參觀我校海藻生物技，了解植物細(xì)胞工的基構(gòu)、常用儀器設(shè)備及其用途參觀我校海藻生物技，了解植物細(xì)胞工的基構(gòu)、常用儀器設(shè)備及其用途等相關(guān)內(nèi)容在進(jìn)行植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)工作之前，首先應(yīng)對(duì)工作中需要哪基本的設(shè)備條件有個(gè)全面的了解，以便因地制宜地利用現(xiàn)有房屋，或建、改。的大小取決于工作的目的和規(guī)模，在設(shè)計(jì)室時(shí)，應(yīng)按組織與細(xì)胞培養(yǎng)程序來(lái)沒(méi)計(jì)，避免某些環(huán)節(jié)倒排，引起工細(xì)胞培養(yǎng)是在嚴(yán)格無(wú)菌的條件下進(jìn)行的要做到無(wú)菌的條需要一定的設(shè)備、器材和用具，同時(shí)還需要人工控制的培養(yǎng)條1用于進(jìn)行培養(yǎng)器皿、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)物質(zhì)的準(zhǔn)備以及供應(yīng)物品的保存等。準(zhǔn)備室應(yīng)通風(fēng)、采光良好。室內(nèi)應(yīng)有下列和各種用具（1）基本實(shí)驗(yàn)水槽和盛物準(zhǔn)備臺(tái)

2、鈴及消防設(shè)柜等（2）基本即冰箱（普通冰箱、低溫冰箱、超低溫冰箱）、天平（電平、托盤(pán)天平、便攜式天平）、電即冰箱（普通冰箱、低溫冰箱、超低溫冰箱）、天平（電平、托盤(pán)天平、便攜式天平）、電熱鼓風(fēng)干燥箱、高壓蒸汽滅菌鍋純化裝置、pH 計(jì)、電熱磁力攪拌器、微波爐、電爐、超聲（3）培養(yǎng)即各種規(guī)格的試管、培養(yǎng)皿、三角燒瓶等（4）玻璃器皿即帶蓋螺口試劑瓶、燒杯、容量瓶、量筒、刻度移液管等（5）接種器械即鑷子、剪刀、解剖刀、接種針等（6）雜物品類(lèi)即醫(yī)用小推車(chē)、水盆桶、白瓷盤(pán)、棉線、棉塞、無(wú)口膜等接種室即無(wú)菌操作室，應(yīng)設(shè)置的最里面，防止空引起污染，它的組成部分，它直接關(guān)系到整個(gè)實(shí)驗(yàn)工作成敗，一般面積在 3-5

3、m2 為宜，室內(nèi)需安裝紫外燈。除設(shè)置無(wú)菌室外通常主要存放無(wú)菌操作臺(tái)等設(shè)備提供無(wú)菌的操作空間他設(shè)備為無(wú)過(guò)濾裝置、取材和繼代培養(yǎng)中切割組織的器械，包括手術(shù)刀柄、刀片組織剪、鑷子等無(wú)菌操作室內(nèi)密閉不透風(fēng)，溫濕度濃度較高，易滋菌，故有可能損的身體健康，應(yīng)裝置過(guò)濾空氣的恒溫恒濕節(jié)器。設(shè)計(jì)無(wú)菌操作室時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：a.為防止室內(nèi)溫度增節(jié)器。設(shè)計(jì)無(wú)菌操作室時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：a.為防止室內(nèi)溫度增高，要選擇陽(yáng)無(wú)菌操作室在條件限制的情況下可用無(wú)菌操作臺(tái)來(lái)替代，無(wú)菌臺(tái)種類(lèi)很多，有平行氣流和垂直氣流，有整機(jī)和組合式，有單人和操作之分，其工作原理是利用鼓風(fēng)機(jī)，使經(jīng)高效過(guò)濾的空氣徐徐通過(guò)面形成無(wú)菌的正氣壓，使外周有菌的

4、空氣不易流入潔凈臺(tái)，達(dá)到操作無(wú)菌的目的。因此，在使用時(shí)，周?chē)荒苡休^大的氣流，最好潔凈臺(tái)置在清潔無(wú)塵的房間，防止灰塵堵塞濾器，延長(zhǎng)使用時(shí)間培養(yǎng)室是防止微生物的污染和有害物的影響，是接種后的材料培養(yǎng)、生長(zhǎng)的場(chǎng)所，其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則最重要的因子是溫度根據(jù)培養(yǎng)物的最適生長(zhǎng)溫度設(shè)置培養(yǎng)室的溫度具備熱冷空調(diào)以調(diào)節(jié)溫度。由于植物不同種類(lèi)要求不同溫度，最好不種類(lèi)有不同的培養(yǎng)室（或培養(yǎng)箱）。室內(nèi)濕度也要求恒定，相對(duì)濕度保持在 70%-80%為好，可安裝加濕器?？刂乒庹諘r(shí)間可安裝定時(shí)開(kāi)關(guān)鐘，一般需要每天的搖床或轉(zhuǎn)床等；而動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要 CO2 培養(yǎng)箱4該室用于對(duì)培養(yǎng)物的觀察分析與培養(yǎng)物的計(jì)數(shù)

5、等。主要設(shè)備生物顯微鏡、倒置生物顯微鏡及顯微照相設(shè)備等。小型儀器設(shè)備有球計(jì)數(shù)器過(guò)濾滅磁力加熱攪拌器低速臺(tái)式離心機(jī)等簡(jiǎn)述我校海藻生物技的組成簡(jiǎn)述細(xì)胞工常用儀器設(shè)備簡(jiǎn)述我校海藻生物技的組成簡(jiǎn)述細(xì)胞工常用儀器設(shè)備的原理和用途一、實(shí)驗(yàn)?zāi)客ㄟ^(guò)實(shí)驗(yàn)，掌握植物組織培常用玻璃器、干燥包扎技術(shù)；了解干熱滅菌和濕熱滅菌的原理及異同，并掌握有關(guān)的操技術(shù)，為相關(guān)實(shí)驗(yàn)做好準(zhǔn)備工二、實(shí)驗(yàn)器培養(yǎng)皿、三角燒瓶、試管三、玻璃器皿的實(shí)驗(yàn)用具的清潔和滅菌是組織培養(yǎng)成功的關(guān)鍵所在，是物免受污染的前提。為了保證培養(yǎng)物不受污染，第一關(guān)就是要實(shí)驗(yàn)用具的清潔和滅菌是組織培養(yǎng)成功的關(guān)鍵所在，是物免受污染的前提。為了保證培養(yǎng)物不受污染，第一關(guān)就

6、是要對(duì)各種皿進(jìn)和，為保持滅菌后的無(wú)菌狀態(tài)，需要對(duì)培養(yǎng)皿、吸管進(jìn)行包扎，對(duì)試管和三角瓶等加塞棉花塞，做這些工作同樣有一套科的方法和需要熟練的技巧，了解無(wú)菌操作相關(guān)儀器的結(jié)構(gòu)、主要用途性能是十分必要的，有利于保障以后各實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)玻璃器皿是細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)中使用最多的一類(lèi)物品，其洗滌注意和方法如下任何洗滌方法，都不應(yīng)對(duì)玻璃器皿有所損傷，所以不能用有腐皿一般新的玻璃器皿用 2%的鹽酸溶液浸泡數(shù)小時(shí)，再用水沖洗干凈用過(guò)的器皿應(yīng)立即洗滌，可用去污粉、洗衣粉，放置太會(huì)增加洗滌難度；難洗滌的器皿不要與易洗滌的器皿放在一起例油的器皿不要與無(wú)油的器皿放在一起洗強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、瓊脂等腐蝕或阻塞管道的物質(zhì)不能直接倒在洗滌內(nèi)

7、，必須倒在廢缸內(nèi)等待無(wú)污染處理如果器皿沾焦油及樹(shù)脂類(lèi)的一些物質(zhì)用濃硫酸或 40 （載玻片或蓋玻片可先在 2%鹽酸溶液中浸1 小時(shí)，然后在水中沖洗23 凡遇有傳染性材料的器皿，洗滌前應(yīng)經(jīng)高壓滅菌后。8. 洗滌后的玻璃器皿要求玻璃能被水均勻濕潤(rùn)而無(wú)條紋和水珠四、培養(yǎng)皿、干燥、包扎和滅用過(guò)的培養(yǎng)皿先浸泡在8. 洗滌后的玻璃器皿要求玻璃能被水均勻濕潤(rùn)而無(wú)條紋和水珠四、培養(yǎng)皿、干燥、包扎和滅用過(guò)的培養(yǎng)皿先浸泡在洗潔精溶液中 24 h 左右，再進(jìn)用海綿蘸洗潔精對(duì)培養(yǎng)皿的反復(fù)刷洗，直到培養(yǎng)皿能被均勻濕潤(rùn)而無(wú)水珠掛在壁上自來(lái)水沖洗培養(yǎng)皿 洗滌的培養(yǎng)皿倒置時(shí)，水順著器壁流下，且不掛水珠，表明已潔干凈蒸餾水沖洗

8、3 次，洗去自來(lái)水中的雜質(zhì)，倒扣在瓷盤(pán)上晾晾干后將培養(yǎng)皿倒扣、轉(zhuǎn)移到烘箱中烘干（100，1 h），烘干后關(guān)閉玻璃器皿的包扎：為保持器皿滅菌后的無(wú)菌狀態(tài)，需在滅菌前行包扎. 層b. 刻度吸管：洗凈、烘干后的吸管，在吸口的一頭塞入脫脂棉花，以防在使用時(shí)造成污染。每支吸管用一條 試管和三角瓶：試管和三角瓶都需要做合適的棉塞（料試管塞），棉試管和三角瓶：試管和三角瓶都需要做合適的棉塞（料試管塞），棉塞可起過(guò)濾作用，避免空氣中的微生入容器。制作棉塞時(shí)，要求棉花緊貼玻璃壁，沒(méi)有皺縫隙，松緊適宜。棉塞的長(zhǎng)度不小于管口直徑的 2 倍，約 五、高壓蒸汽滅關(guān)好排水閥門(mén)，倒入蒸餾水至標(biāo)度。注意水量一定要加足，否干燒

9、容事故將需要滅菌的器皿裝入滅菌鍋中，加蓋密封。如果是盛有液體容器，則蓋子不能完全封閉，以防滅菌時(shí)體積增大發(fā)生爆裂使用需要旋螺旋密封的滅菌鍋時(shí)，先將每個(gè)螺旋旋轉(zhuǎn)到一定程（不要太緊），然后再旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺旋，以達(dá)到平衡旋緊否則易造成漏氣，達(dá)不到徹底滅菌的目通電加溫，打開(kāi)排氣閥門(mén)，排盡鍋內(nèi)的空氣。當(dāng)閥門(mén)沖出的全是蒸汽時(shí)可關(guān)閉排氣閥門(mén)，如果過(guò)早關(guān)閉閥門(mén)，冷空氣排氣不底，也達(dá)不到徹底滅菌的目的: 30 分鐘，即能達(dá)到完全滅菌的目的，然后停止加溫。降溫：自然降溫或打開(kāi)閥門(mén)排汽降溫。稍微打開(kāi)一點(diǎn)排氣閥門(mén)鍋內(nèi)蒸汽緩慢排出，然后逐漸開(kāi)大閥門(mén)使氣壓慢慢下降，注意使排氣過(guò)否則會(huì)使鍋內(nèi)的器皿因壓力和溫度變化過(guò)大使排

10、氣過(guò)否則會(huì)使鍋內(nèi)的器皿因壓力和溫度變化過(guò)大而破或者容器中的液體會(huì)沖出容器7. 當(dāng)鍋內(nèi)蒸汽完全排盡時(shí)即壓力表指針降到零時(shí)，即可打開(kāi)鍋蓋待鍋內(nèi)溫度下降到 60左右時(shí)取出滅菌物品8. 將包扎好的、滅菌過(guò)的玻璃器皿擺入電熱烘箱中，相互間要留一定的空隙，以便空氣流通，直至完全烘干9. 將滅菌好的器皿置于柜中，并盡快使用六、實(shí)：1. 玻璃器皿和滅菌的重要性及注意事項(xiàng)2. 高壓蒸汽滅菌前為什么要排出滅菌鍋內(nèi)的冷空氣3. 濕熱滅菌和干熱滅菌的區(qū)別一、實(shí)驗(yàn)?zāi)客ㄟ^(guò)壇紫菜葉狀體切段再生實(shí)驗(yàn)，掌握植物組織培養(yǎng)的基本流觀察切段再生情況并分析壇紫菜葉狀體的極性二、實(shí)驗(yàn)材料及壇紫菜葉狀體、單面刀片棉花、鑷子毛筆墊板海水、顯

11、微鏡、載玻片、培養(yǎng)皿、吸水紙、直尺等三、實(shí)驗(yàn)步二、實(shí)驗(yàn)材料及壇紫菜葉狀體、單面刀片棉花、鑷子毛筆墊板海水、顯微鏡、載玻片、培養(yǎng)皿、吸水紙、直尺等三、實(shí)驗(yàn)步 測(cè)量葉狀體的長(zhǎng)度和寬度；將切段玻片上，觀察邊緣刺、細(xì)胞結(jié)構(gòu)（星狀色素體）葉狀體表面附著污染物等將切段置滅菌培養(yǎng)皿中，1.020棉重復(fù)上一步驟 2-3 次，直至鏡檢無(wú)污染為止。每次重復(fù)時(shí)將切段將切段置墊板上，用取孔器取一個(gè)圓盤(pán)，并在圓盤(pán)靠近狀體稍部處切一小口，然后全部轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，加 2/3 體1 個(gè)切段和一塊圓盤(pán)，培養(yǎng)皿下蓋外側(cè)注明組別、名字和日期）； 培養(yǎng)第三周時(shí)總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果四、實(shí). 2. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析壇紫菜葉狀體的極性一、實(shí)驗(yàn)

12、目通過(guò)壇紫菜葉狀體單離細(xì)胞的分離與培養(yǎng)，掌握分離和培養(yǎng)植一、實(shí)驗(yàn)?zāi)客ㄟ^(guò)壇紫菜葉狀體單離細(xì)胞的分離與培養(yǎng)，掌握分離和培養(yǎng)植細(xì)胞的基本方法與技術(shù)，觀察壇紫菜單細(xì)胞的再生方式并分析其意義二、實(shí)驗(yàn)器玻璃棒、10mL9cm的培養(yǎng)皿、低速離心機(jī)、光照培三、實(shí)驗(yàn)步酶液的配制：1mL，CaCl2（2*104ppm）1mL，葡萄糖（2.0M）1葉狀體無(wú)雜藻處理：用毛筆反復(fù)刷洗葉狀體表面，直至無(wú)污染存在（詳見(jiàn)實(shí)驗(yàn)三將葉狀體放在 1.0M 的葡萄糖溶液中洗三遍，以除去葉狀體表面的鹽分葉狀體用吸水紙吸干，放墊板片切碎（碎片大小 0.5g5mL葉狀體酶解：將三角瓶置 29 培養(yǎng)箱內(nèi) 細(xì)胞解離后，迅速用細(xì)胞漏斗將組織塊和酶液分離，并加適量 最后一次離心得 最后一次離心得到的細(xì)胞沉淀的培養(yǎng)皿中，細(xì)胞密度不超過(guò)104 個(gè)/mL，培養(yǎng)液加至培養(yǎng)皿的1/3 體積，放置于培養(yǎng)第三天后打開(kāi)培養(yǎng)箱的光照，光強(qiáng)設(shè)置為 1000 lux，光周期為 12 12D1.0262/3每周更換 1/2 培養(yǎng)液并觀察細(xì)胞的再生情況第三周總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并將皿中再生體用毛筆刷下后轉(zhuǎn)移到充瓶中充氣第四周更換 1/2 培養(yǎng)液并挑出生長(zhǎng)快、形狀好的再生