紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介

1、紫外可見(jiàn)光譜操作使用介紹紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第1頁(yè)基本知識(shí)電磁輻射與紫外光譜光是一個(gè)電磁輻射，從波長(zhǎng)極短宇宙射線至波長(zhǎng)很長(zhǎng)無(wú)線電組成一個(gè)連續(xù)光譜。 部分電磁輻射范圍遠(yuǎn)紫外 100200 nm近紫外 200400 nm可見(jiàn)光 400800 nm近紅外 8002500 nm遠(yuǎn)紅外 25003500 nm紫外光譜由分子外層電子在不一樣能級(jí)間躍遷產(chǎn)生。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第2頁(yè)朗伯比爾定律(Lambert-beer)A=吸光度 I0=入射光強(qiáng)度I=入射光經(jīng)過(guò)樣品后透射強(qiáng)度摩爾吸光度（cm-1.m-1）C=摩爾濃度(mol) l=光程(cm)紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方

2、法簡(jiǎn)介第3頁(yè) 當(dāng)產(chǎn)生紫外吸收物質(zhì)為未知物時(shí)，其吸收強(qiáng)度可 用表示: A=吸光度 c為100ml溶劑中溶質(zhì)克數(shù) l=光程(cm) 紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第4頁(yè) 選取溶劑需注意以下幾點(diǎn)： 1) 當(dāng)光波長(zhǎng)減小到一定數(shù)值時(shí)，溶劑會(huì)對(duì)它產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收(即溶劑不透明)，這即是所謂“端吸收”，樣品吸收帶應(yīng)處于溶劑透明范圍。透明范圍 最短波長(zhǎng)稱透明界限。 2) 樣品在溶劑中能到達(dá)必要濃度(此濃度值決定于樣品摩爾吸收系數(shù)大小)。 3) 要考慮溶質(zhì)和溶劑分子之間作用力。普通溶劑分子極性強(qiáng)則與溶質(zhì)分子作用強(qiáng)。所以應(yīng)盡可能采取低極性溶劑。 4) 為與文件對(duì)比，宜采取文件中所使用溶劑。 5) 其它如溶劑揮發(fā)

3、性、穩(wěn)定性、精制再現(xiàn)性等。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第5頁(yè)紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第6頁(yè)基本原理 電子躍遷產(chǎn)生紫外可見(jiàn)吸收光譜 分子總能量是其鍵能(電子能)、振動(dòng)能和轉(zhuǎn)動(dòng)能總和，當(dāng)分子從輻射電磁波吸收能量之后，分子會(huì)從低能級(jí)躍遷到較高能級(jí)。吸收頻率決定于分子能級(jí)差，其計(jì)算式為： E = h 或 E = hC / 式中 E為分于躍遷前后能級(jí)差； 、分別為所吸收電磁波頻率及波長(zhǎng) C為光速； h為普朗克常數(shù)。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第7頁(yè) 分子電子狀態(tài)能約為 8.38 1048.38 105 (J/mol) (4.19105相當(dāng)于286nm處發(fā)生紫外吸收) 分子振動(dòng)

4、能約為4.191032.09104 (J/mol)，分子轉(zhuǎn)動(dòng)能約為41941.9 (J/mol)。 即使每項(xiàng)能量不一樣,且有一定改變范圍,但其改變均是量子化 。由上可見(jiàn),分子從電子基態(tài)躍遷到電子激發(fā)態(tài) E遠(yuǎn)大于振動(dòng)能級(jí),轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)E。所以,電子躍遷所吸收電磁波是吸收光譜中頻率最高,即紫外可見(jiàn)光.紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第8頁(yè)紫外吸收譜帶形狀 紫外吸收譜帶之所以是較寬,純形狀,這可經(jīng)過(guò)下列圖加以說(shuō)明。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第9頁(yè)以雙原子分子為例 位能曲線上橫線表示振動(dòng)能級(jí)(轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)未表示)。分子吸收電磁波能量后,電子從基態(tài) s0躍遷到激發(fā)態(tài),其同時(shí)伴隨有振動(dòng)能級(jí)躍遷,躍遷

5、時(shí)核間距離保持不變(Franck-Condon原理)。它們和原能級(jí)(s0，v0 )之間能級(jí)差分別為I、II、III。因?yàn)榇藭r(shí)還伴伴隨轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷,所以圍繞I、II、III,有一系列分立轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷譜線(圖a),這種譜只能在稀薄氣態(tài)下測(cè)得,當(dāng)氣態(tài)壓力增大,即濃度增大時(shí),轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)受限制,形成連續(xù)曲線(b)，在低極性溶劑中測(cè)定紫外吸收,還能保留一些紫外吸收精細(xì)結(jié)構(gòu)(c),在高極性溶劑中作圖,精細(xì)結(jié)構(gòu)完全消失(圖d)。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第10頁(yè)多原子分子電子能級(jí)躍遷種類(lèi) 有機(jī)化合物外層電子為:鍵電子;鍵電子;未成鍵孤電子對(duì)n電子,它們所可能發(fā)生躍遷,定性地可用下列圖表示。紫外可見(jiàn)光譜

6、儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第11頁(yè)基本術(shù)語(yǔ) a.生色團(tuán)(chromophore)：產(chǎn)生紫外(或可見(jiàn))吸收不飽和基團(tuán)，如CC、CO、NO2等。 b.助色團(tuán)(auxochrome)：其本身是飽和基團(tuán)(常含雜原子)，它連到生色團(tuán)時(shí)，能使后者吸收波長(zhǎng)變長(zhǎng)或吸收強(qiáng)度增加(或同時(shí)二者兼有)，如：OH、 NH2、Cl等。 c.深色位移(bathochromic shift) ：因?yàn)榛鶊F(tuán)取代或溶劑效應(yīng)，最大吸收波長(zhǎng)變長(zhǎng)。深色位移亦稱為紅移(red shift)。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第12頁(yè) d.淺色位移(hypsochromic shift) 因?yàn)榛鶊F(tuán)取代或溶劑效應(yīng)，最大吸收波長(zhǎng)變短。淺色位移亦

7、稱為藍(lán)移(blue shift)。 e.增色效應(yīng)(hyperchromic effect) 使吸收強(qiáng)度增加效應(yīng)。 f.減色效應(yīng)(hypochromic effect) 使吸收強(qiáng)度減小效應(yīng)。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第13頁(yè)各類(lèi)化合物紫外吸收簡(jiǎn)單分子 A.飽和有機(jī)化合物 a.飽和碳?xì)浠衔?唯一可發(fā)生躍遷為 * ，能級(jí)差很大，紫外吸收波長(zhǎng)很短，屬遠(yuǎn)紫外范圍。如甲烷、乙烷最大吸收分別為125nm、135nm。 b.含雜原子飽和化合物 雜原子含有孤電子對(duì)，普通為助色團(tuán)，這么化合物有n *躍遷。但大多數(shù)情況，它們住近紫外區(qū)仍無(wú)顯著吸收。硫醚、二硫化物、硫醇、胺、溴化物、碘化物在近紫外有弱吸收

8、，但其大多數(shù)均不顯著。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第14頁(yè)B.含非共軛烯、炔基團(tuán)化合物 這些化合物都含電子，能夠發(fā)生*躍遷，其紫外吸收波長(zhǎng)較 *為長(zhǎng)，但乙烯吸收在165nm、乙炔吸收在173nm。所以，它們雖名為生色團(tuán)，但若無(wú)助色團(tuán)作用，在近紫外區(qū)仍無(wú)吸收。C.含不飽和雜原子化合物 在這類(lèi)化合物中， *、 *屬遠(yuǎn)紫外吸收， n *亦屬遠(yuǎn)紫外吸收，不便檢測(cè)，但n *躍遷吸收波長(zhǎng)在紫外區(qū)，能夠檢測(cè)。即使n *躍遷為禁阻躍遷，吸收強(qiáng)度低，但畢竟其吸收位置較佳，易于檢測(cè)。所以，在紫外判定中是不應(yīng)忽略。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第15頁(yè)紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第16頁(yè)含有共

9、軛體系分子 A.共軛體系形成使吸收移向長(zhǎng)波方向 右圖顯示了從乙烯變成共軛丁二烯時(shí)電子能級(jí)改變。原烯基兩個(gè)能級(jí)各自分裂為兩個(gè)新能級(jí)，在原有*躍遷長(zhǎng)波方向出現(xiàn)新吸收。 普通把共軛體系吸收帶稱為K帶(源于德文konjugierte)。K帶對(duì)近紫外吸收是主要，因其出現(xiàn)在近紫外范圍，且摩爾吸收系數(shù)也高，普通10000。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第17頁(yè)共軛烯吸收計(jì)算值紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第18頁(yè)紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第19頁(yè)注意：用上述規(guī)則進(jìn)行計(jì)算時(shí)，有計(jì)算誤差較大例外情況。當(dāng)存在環(huán)張力或兩個(gè)烯鍵不處于同一平面而影響共扼體系形成時(shí)，計(jì)算值都偏離實(shí)測(cè)，菠烯即是一例：

10、 因兩個(gè)環(huán)張力，提升了電子基態(tài)能量。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第20頁(yè)共軛醛、酮紫外吸收(K帶)計(jì)算紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第21頁(yè)紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第22頁(yè)紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第23頁(yè)，不飽和酸、酯紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第24頁(yè)一些共軛羧酸UV吸收： 化合物 實(shí)測(cè)值（104）計(jì)算值CH2=CHCO2H 200（1.0）CH3CH=CHCO2H 205（1.4） =CHCO2H 220（1.4）222（2175）CH3(CH=CH)2CO2H 254（2.5）256（3018208）CH3(CH=CH)3CO2H 294（3

11、.7）286（6018208）CH3(CH=CH)4CO2H 332（4.9）316（9018208）紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第25頁(yè)芳香族化合物苯 苯環(huán)顯示三個(gè)吸收帶，它們均起源于苯環(huán)* 躍遷，以下表所表示。其中II、III為禁戒躍遷。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第26頁(yè)烷基苯 烷基無(wú)孤電子對(duì)，但它超共軛效應(yīng)使苯環(huán)B吸收帶略有深色位移，對(duì)E吸收帶效應(yīng)不顯著。 苯環(huán)上有CH2OH、(CH2)nOH、CH2NH2等取代時(shí)，助色團(tuán)被一個(gè)或多個(gè)CH2與苯環(huán)隔離開(kāi)了，所以它們紫外吸收光譜與甲苯相近。 苯環(huán)上有CH2ph、CH2CHO、CH2CH=CH2等取代基時(shí)，生色團(tuán)被CH2隔開(kāi)

12、而不能和苯環(huán)形成共軛體系，所以紫外吸收不發(fā)生紅移。CH2這種作用稱為“隔離效應(yīng)”。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第27頁(yè)助色團(tuán)在苯環(huán)上取代衍生物 助色團(tuán)有孤電子對(duì)，它能與苯環(huán)電子共軛，所以助色團(tuán)在苯環(huán)上取代使B帶、E帶均移向長(zhǎng)波方向，B帶被強(qiáng)化，同時(shí)精細(xì)結(jié)構(gòu)常消失。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第28頁(yè)紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第29頁(yè)生色團(tuán)在苯環(huán)上取代衍生物 生色團(tuán)在苯環(huán)上取代后，苯環(huán)大鍵和生色團(tuán)鍵相連產(chǎn)生更大共扼體系，這使B帶產(chǎn)生強(qiáng)烈深色位移且在200250nm之間出現(xiàn)一個(gè)K帶(10000)，有時(shí)B帶淹沒(méi)在K帶之中。 若按對(duì)E2帶深色位移大小，生色團(tuán)排列次序?yàn)椋?NO

13、2CHOCOCH3CO2HCOO-CN 上述生色團(tuán)都是苯環(huán)間位定位取代基。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第30頁(yè)紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第31頁(yè)多取代苯環(huán)a.對(duì)位取代 當(dāng)兩個(gè)取代基屬相同類(lèi)型時(shí)，雙取代最長(zhǎng)吸收波長(zhǎng)近似為二者單取代時(shí)最長(zhǎng)波長(zhǎng)。當(dāng)兩個(gè)取代基類(lèi)型不一樣時(shí)(即一個(gè)是間位定位取代基，另一個(gè)是鄰、對(duì)位定位取代基)，兩個(gè)取代所產(chǎn)生深色位移大于單個(gè)取代基產(chǎn)生深色位移之和。這種現(xiàn)象可用共振效應(yīng)來(lái)解釋：紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第32頁(yè)鄰位或間位取代 此時(shí)兩個(gè)基團(tuán)產(chǎn)生深色位移近似等于它們單取代時(shí)產(chǎn)生深色位移之和。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第33頁(yè)紫外可見(jiàn)光譜儀

14、原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第34頁(yè)雜芳環(huán)化合物 五員雜芳環(huán)按照呋喃、吡咯、噻吩次序增強(qiáng)芳香性，其紫外吸收也沿此次序逐步靠近于苯吸收。在上述三種雜芳環(huán)中，硫電子較氮、氧能更加好地和二烯電子共軛，所以噻吩紫外吸收在最長(zhǎng)波長(zhǎng)。生色團(tuán)、助色團(tuán)取代，造成五員雜芳環(huán)紫外吸收發(fā)生較大改變(深色位移和增色效應(yīng))。 吡啶共軛體系和苯環(huán)相類(lèi)似，故吡啶紫外吸收類(lèi)似于苯紫外吸收， 吡啶在251nm處吸收強(qiáng)，也顯示精細(xì)結(jié)構(gòu)。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第35頁(yè)紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第36頁(yè)紫外譜圖解析隔離效應(yīng)與加和規(guī)律 設(shè)A為生色團(tuán)，B為生色團(tuán)或助色團(tuán)。當(dāng)A與B相連生成AB時(shí)，若B為生色團(tuán)，二者形成更

15、大共軛體系；若B為助色團(tuán)，助色團(tuán)孤電子對(duì)與A形成p、共軛，相比于A，AB出現(xiàn)新吸收(一般均為強(qiáng)化了吸收)。 設(shè)C為不含雜原子飽和基團(tuán)，在ACB結(jié)構(gòu)中，C阻止了A與B之間共軛作用，亦即C具有隔離效應(yīng)。從其次來(lái)看，ACB紫外吸收就是A、B紫外吸收之加和。這稱為“加和規(guī)律”。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第37頁(yè)紫外譜圖提供結(jié)構(gòu)信息 紫外譜圖提供主要信息是相關(guān)該化合物共軛體系或一些碳基等存在信息。能夠粗略地歸納為下述幾點(diǎn)： 化合物在220800nm內(nèi)無(wú)紫外吸收，說(shuō)明該化合物是脂肪烴、脂環(huán)烴或它們簡(jiǎn)單衍生物(氯化物、醇、醚、羧酸等)，甚至可能是非共軛烯。 220250nm內(nèi)顯示強(qiáng)吸收(近1000

16、0或更大)，這表明K帶存在。即存在共扼兩個(gè)不飽和鍵(共軛二烯或， 不飽和醛、酮)。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第38頁(yè) 250290nm內(nèi)顯示中等強(qiáng)度吸收，且常顯示不一樣程度精細(xì)結(jié)構(gòu)，說(shuō)明苯環(huán)或一些雜芳環(huán)存在。 250350nm內(nèi)顯示中、低強(qiáng)度吸收，說(shuō)明碳基或共軛羰基存在。 300nm以上高強(qiáng)度吸收，說(shuō)明該化合物含有較大共軛體系。若高強(qiáng)度吸收含有顯著精細(xì)結(jié)構(gòu)。說(shuō)明稠環(huán)芳烴、稠環(huán)雜芳烴或其衍生物存在。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第39頁(yè)解析紫外譜圖方法及相關(guān)注意事項(xiàng)a.紫外光譜也是吸收光譜，解析譜圖時(shí)，應(yīng)同時(shí)顧及吸收帶位置、強(qiáng)度和峰形狀三個(gè)方面：從吸收帶位置可預(yù)計(jì)產(chǎn)生該吸收共軛體

17、系大??；吸收強(qiáng)度有利于K帶、B帶和R帶識(shí)別；從吸收帶形狀可幫助判斷產(chǎn)生紫外吸收基團(tuán)。如一些芳環(huán)衍生物，在峰形上顯示一定程度精細(xì)結(jié)構(gòu)。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第40頁(yè)b.立體位阻作用常使一些共軛體系吸收帶發(fā)生顯著藍(lán)移。這是因?yàn)楣曹楏w系共平面性受到破壞所致。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第41頁(yè)C.介質(zhì)影響 在進(jìn)行紫外測(cè)定時(shí)，介質(zhì)常有較主要影響。總說(shuō)來(lái)，相對(duì)于該化合物蒸汽紫外吸收，低極性溶劑溶液其紫外吸收改變小，高極性溶劑溶液其紫外吸收改變大，且精細(xì)結(jié)構(gòu)消失。所以普通應(yīng)盡可能采取低極性溶劑。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第42頁(yè) n*躍遷，當(dāng)溶劑極性增強(qiáng)時(shí)，有顯著藍(lán)移，其原

18、因?yàn)榛衔锘鶓B(tài)較激發(fā)態(tài)極性強(qiáng)，它和極性溶劑形成較強(qiáng)烈氫鍵，從而增加了躍遷能量，造成藍(lán)移。 紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第43頁(yè) *躍遷，當(dāng)溶劑極性增強(qiáng)時(shí)，常有紅移(不如n*躍遷溶劑極性增加時(shí)藍(lán)移顯著)。其原因?yàn)榧ぐl(fā)態(tài)極性較基態(tài)大，當(dāng)溶劑極性增加時(shí)，激發(fā)態(tài)因生成較強(qiáng)氫鍵，能量降低較多，因而有紅移。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第44頁(yè)苯環(huán)E2帶(204nm)溶劑效應(yīng)需視衍生物個(gè)取代基性質(zhì)而定。取代基為鄰、對(duì)位取代基時(shí)，溶劑效應(yīng)很小；取代基為間位取代基時(shí)，隨溶劑極性增加而產(chǎn)生紅移。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第45頁(yè)對(duì)含有酸堿性一些有機(jī)物，如：酚、苯胺等，溶液PH值對(duì)其吸收位

19、置有很顯著影響。最慣用標(biāo)推譜圖仍為薩特勒(Sadtler)紫外譜圖，因它同時(shí)有核磁共振氫譜、核磁共振碳譜、紅外譜，且有上述譜圖綜合索引，所以查閱薩特勒譜圖是十分方便，其查閱方式和查薩特勒紅外譜相同。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第46頁(yè)紫外光譜應(yīng)用舉例 紫外光譜在決定一系列維生素、抗菌素及一些天然物結(jié)構(gòu)曾起過(guò)主要作用，如維生素A1、A2、B12、B1、青霉素、鏈霉素、土霉素、螢火蟲(chóng)尾部發(fā)光物質(zhì)等。比如：CS2CH3CHO C5H10N2S2 有兩種可能結(jié)構(gòu)，利用UV譜進(jìn)行判斷。NH3紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第47頁(yè)(A)(B)解：先選取兩個(gè)模型化合物max：276（2.110

20、4） 246（8103）max：217（8000）實(shí)測(cè)未知物（A或B）UV數(shù)據(jù)為：由此推測(cè)為化合物A。max：288（1.28104） 243（8000）紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第48頁(yè) 松香酸235248nm左旋海松酸260283nm紫外吸收光譜用來(lái)決定雙鍵位置，既簡(jiǎn)單又有效，比如：紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第49頁(yè)又如：紫羅蘭酮紫羅蘭酮紫羅蘭酮因?yàn)殡p鍵共軛，其紫外吸收波長(zhǎng)較紫羅蘭酮顯著地到了長(zhǎng)波方向。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第50頁(yè)UV-1201紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)使用一、整機(jī)結(jié)構(gòu)UV-1201紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)分光光度計(jì)主機(jī)由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)系統(tǒng)

21、、電機(jī)驅(qū)動(dòng)、計(jì)算機(jī)接口，電源等部分組成。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第51頁(yè)軟件開(kāi)啟：開(kāi)啟UV-1201紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)應(yīng)用程序，軟件將自動(dòng)進(jìn)入到自檢畫(huà)面，自檢前請(qǐng)先將儀器預(yù)熱最少10分鐘。 紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第52頁(yè)基本操作：設(shè)置換燈點(diǎn)：（1）在“設(shè)置-儀器”菜單欄中能夠設(shè)置換燈點(diǎn)，提議除特殊測(cè)量（如氘燈譜線）外不要更改。（2）開(kāi)關(guān)氘燈和鎢燈：假如長(zhǎng)時(shí)間不用 氘燈或鎢燈，能夠在自檢后點(diǎn)擊“設(shè)置-儀器”菜單下氘燈或鎢燈鍵將其關(guān)閉以節(jié)約燈壽命。但在關(guān)閉之后需間隔最少1分鐘才能重新開(kāi)啟，并需要預(yù)熱最少10分鐘才能使儀器到達(dá)最正確測(cè)量效果。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法

22、簡(jiǎn)介第53頁(yè)光譜掃描光譜掃描測(cè)量方式可用于樣品定性分析，它如實(shí)地顯示樣品全波長(zhǎng)圖譜，或打印出來(lái)，是化學(xué)分析工作者常規(guī)分析伎倆。（1）開(kāi)啟光譜掃描功效點(diǎn)擊工具欄上“光譜“項(xiàng)，再點(diǎn)擊“參數(shù)”進(jìn)入?yún)?shù)頁(yè)面；參數(shù)有兩種類(lèi)型：選擇型和輸入型。選擇型：用戶將鼠標(biāo)指點(diǎn)到對(duì)應(yīng)選項(xiàng)單擊即可。如測(cè)量方式、取樣間隔、光譜帶寬。輸入型：需輸入數(shù)字量。如：波長(zhǎng)范圍、光度范圍紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第54頁(yè)以下幾個(gè)參數(shù)在使用中應(yīng)注意：A、光度范圍：此參數(shù)與測(cè)量無(wú)關(guān)。如選擇不妥，顯示圖譜會(huì)失真或根本看不見(jiàn)，但測(cè)量結(jié)束或測(cè)量過(guò)程中可重新將其調(diào)到適當(dāng)范圍。B、取樣間隔：光譜峰谷尖銳應(yīng)選取較小取樣間隔，但間隔越小測(cè)量

23、所需時(shí)間越長(zhǎng)。同時(shí)掃描點(diǎn)數(shù)（波長(zhǎng)范圍除以取樣間隔）不應(yīng)超出10000點(diǎn)。C、掃描速度：掃描速度選擇取決于所需要測(cè)量精度，速度越慢測(cè)量精度越高，但測(cè)量時(shí)間也越長(zhǎng)，普通測(cè)量快速即可。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第55頁(yè)（2）測(cè)量運(yùn)行a設(shè)置好參數(shù)后，將參比和樣品分別放入樣池參比位和樣品位，蓋好樣品室蓋。按下“測(cè)量”按鈕，選擇好樣品所在樣池，便可進(jìn)行測(cè)量。早測(cè)量中途若需中止，可單擊“停頓”按鈕，或直接關(guān)閉此頁(yè)面（畫(huà)面右上角第二排“關(guān)閉”欄）。B假如在參數(shù)設(shè)置“參比測(cè)量”項(xiàng)中選擇了“單次”，則在波長(zhǎng)范圍和取樣間隔都不改變情況下，下一次測(cè)量將直接測(cè)量樣品；假如選擇“重復(fù)”，則每次測(cè)量都會(huì)重新測(cè)量參

24、比。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第56頁(yè)（3）波長(zhǎng)掃描功效下圖譜處理單擊“數(shù)據(jù)處理“下圖譜處理菜單功效項(xiàng)，便可進(jìn)行圖譜處理。A、標(biāo)尺查數(shù)： 選擇工具欄上“標(biāo)尺”鈕或菜單數(shù)據(jù)處理-標(biāo)尺查數(shù)“選項(xiàng)可顯示標(biāo)尺（在按隱藏），左右挪動(dòng)鼠標(biāo)或按鍵盤(pán)方向鍵，可使標(biāo)尺移動(dòng)到要觀察圖譜點(diǎn)，當(dāng)前標(biāo)尺所在點(diǎn)數(shù)據(jù)將顯示在右方導(dǎo)航器中。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第57頁(yè)b峰谷檢測(cè)： 峰谷檢測(cè)靈敏度是進(jìn)行峰谷判斷唯一標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度選擇應(yīng)依據(jù)用戶需要進(jìn)行，靈敏度值過(guò)小會(huì)造成峰谷過(guò)多，不好判斷。靈敏度值過(guò)則可能檢測(cè)不到需要峰谷。峰谷檢測(cè)最多顯示100個(gè)檢測(cè)數(shù)據(jù)。單擊“峰谷檢測(cè)”按鈕，依據(jù)需要在彈出對(duì)話框中輸入

25、峰谷檢測(cè)靈敏度數(shù)值，單擊“確定”按鈕便可檢測(cè)出當(dāng)前圖譜峰谷，綠“+”為峰，紅“+”為谷，同時(shí)顯示檢測(cè)峰谷數(shù)值，數(shù)據(jù)后面P代表峰值，V代表谷值。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第58頁(yè)光度測(cè)量此測(cè)量方法可用于多個(gè)波長(zhǎng)定點(diǎn)測(cè)量，最大波長(zhǎng)點(diǎn)數(shù)10個(gè)。開(kāi)啟光度測(cè)量功效單擊工具欄上“光度”按鈕，再點(diǎn)“參數(shù)”進(jìn)行參數(shù)設(shè)置：測(cè)量是依次進(jìn)行，輸入時(shí)若按波長(zhǎng)從大到小排列能夠加緊測(cè)量速度。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第59頁(yè)測(cè)量運(yùn)行假如選擇了“比色皿校正”功效，在測(cè)量前必須進(jìn)行比色皿配對(duì)測(cè)量。設(shè)置好參數(shù)后，在參比池和樣品池中都加入?yún)⒈热芤?，蓋好樣品室蓋；按下“校正”按鈕，儀器自動(dòng)進(jìn)行校準(zhǔn)。校正完成后即

26、可進(jìn)行正式樣品測(cè)量（使用同一比色皿時(shí)可屢次測(cè)量而不需要重新校正）。假如沒(méi)有選擇“比色皿校正”功效，則直接放入?yún)⒈群蜆悠?，單擊“測(cè)量”按鈕進(jìn)行測(cè)量。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第60頁(yè)時(shí)間測(cè)量用此測(cè)量方法能夠觀察樣品隨時(shí)間改變情況、計(jì)算樣品活性值，還能夠用此功效考查儀器穩(wěn)定性及噪聲。開(kāi)啟時(shí)間測(cè)量功效單擊工具欄上“時(shí)間”按鈕。 紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第61頁(yè)進(jìn)行參數(shù)設(shè)置選擇測(cè)量方式：系光度（Abs）、透過(guò)率（T%）并輸入顯示光度范圍、測(cè)量時(shí)間、測(cè)量波長(zhǎng)和取樣間隔。測(cè)量運(yùn)行假如選擇了“比色皿校正”功效，在測(cè)量前必須進(jìn)行比色皿配對(duì)測(cè)量，設(shè)置好參數(shù)后，在參比池和樣品池中都加入?yún)⒈热?/p>

27、液，蓋好樣品室蓋；按下“校正”按鈕，儀器自動(dòng)進(jìn)行校準(zhǔn)。校正完成后即可進(jìn)行正式樣品測(cè)量（使用同一比色皿時(shí)可屢次測(cè)量而不需要重新校正）。假如沒(méi)有選擇“比色皿校正”功效，則直接放入?yún)⒈群蜆悠?，單擊“測(cè)量”按鈕進(jìn)行測(cè)量。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第62頁(yè)定量分析定量分析有多中測(cè)量方式：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)系數(shù)法、雙波長(zhǎng)等吸收點(diǎn)法、雙波長(zhǎng)系數(shù)倍率法、三波長(zhǎng)法。關(guān)于雙波長(zhǎng)法與三波長(zhǎng)法理論與應(yīng)用請(qǐng)參看相關(guān)資料。開(kāi)啟定量分析功效單擊工具欄上“定量”按鈕 紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第63頁(yè)單波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)系數(shù)法進(jìn)入定量分析功效后，點(diǎn)擊“參數(shù)“按鈕，進(jìn)入?yún)?shù)頁(yè)面，以下列圖：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)系數(shù)法有兩種測(cè)量方式：濃度

28、和系數(shù)。假如已知回歸函數(shù)系數(shù)，則采取系數(shù)法，假如用已知標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液來(lái)建立曲線來(lái)測(cè)量，則采取濃度法。曲線擬合方式有兩種：線性擬合和2次擬合。在測(cè)量前首先確定測(cè)定波長(zhǎng)值，選擇好擬合方式，確定是否需要將零點(diǎn)作為擬合有效點(diǎn)（僅對(duì)濃度法有效，即已知標(biāo)樣在寧德為零時(shí)吸光度值也為零，所以直接將零點(diǎn)加入數(shù)據(jù)中參加最小二乘法擬合）。紫外可見(jiàn)光譜儀原理及使用操作方法簡(jiǎn)介第64頁(yè)濃度法在定量分析參數(shù)設(shè)置對(duì)話框中，輸入測(cè)量波長(zhǎng)值，選擇擬合方式，選擇是否插入零點(diǎn)，輸入標(biāo)樣濃度個(gè)數(shù)，同時(shí)在濃度標(biāo)樣中輸入對(duì)應(yīng)濃度值。設(shè)置完成后，按下“確定“按鈕，進(jìn)入測(cè)量界面。假如用戶已經(jīng)知道標(biāo)樣吸光度，也可直接雙擊標(biāo)樣測(cè)量界面下對(duì)應(yīng)吸光度欄，以輸入法來(lái)快速建立曲線（這時(shí)可跳過(guò)a2、a3和a4步驟）。假如選擇了“比色皿校正”功效，在測(cè)量前必須進(jìn)行比色皿配對(duì)測(cè)量，設(shè)置好參數(shù)后，在參比池和樣品池中都加入?yún)⒈热芤?，蓋好樣品室蓋；按下“校正”按鈕，儀器自動(dòng)進(jìn)行校準(zhǔn)。校正完成后即可進(jìn)行正式樣品測(cè)量（使用同一比色皿時(shí)可屢次測(cè)量而不需要重新校正）。假如沒(méi)有選擇“比色皿校正”功效，則直接放入?yún)⒈群蜆悠?，單擊“測(cè)量”按鈕進(jìn)行測(cè)量。紫外可見(jiàn)光譜