生物分離原理及技術(shù)

1、其次章 過(guò)濾器的效率。2多數(shù)為液相3、去除發(fā)酵液中局部雜質(zhì)，以利于后續(xù)各步操作預(yù)處理的方法：1、加熱2、分散和絮凝3、助濾劑上的吸附分散指在投加的化學(xué)物質(zhì)如鋁、鐵的鹽類或石灰等作用下，膠體脫穩(wěn)并使離1mm 大小塊狀分散體的過(guò)程。分散劑的作用有：中和電荷、消退雙電荷層、通過(guò)氫鍵或其他形式與離子結(jié)合而產(chǎn)生分散。絮凝常為自然或合成的大分子量聚電解質(zhì)將膠體離子交聯(lián)成網(wǎng)，10mm 大小絮凝團(tuán)的過(guò)程。絮凝劑的主要作用起架橋作用。：膠體粒子(10-100nm)中性鹽促進(jìn)下脫穩(wěn)相互聚攏成大粒子1mm機(jī)理：a 中和粒子外表電荷b 消退雙電層構(gòu)造絮凝：大分子聚電解質(zhì)將膠體粒子交聯(lián)成網(wǎng)狀，形成絮凝團(tuán)的過(guò)程10mm機(jī)

2、理：架橋作用發(fā)酵液的帶電現(xiàn)象：的粒于即正離子被吸附在其四周，在界面上形成了雙電層。stern 平面以內(nèi)，正離子被嚴(yán)密束縛在膠核外表，稱為吸附層層的構(gòu)造模型。 s是整個(gè)雙電層的電位，Stern平面上的電位為 d，在滑移面上的電位為 ,稱 電位或稱電動(dòng)電位。這三種電位中只有 的電位，用來(lái)表征雙電層的特征，并作為爭(zhēng)辯分散機(jī)理的重要參數(shù)。分散價(jià)或分散值： 電位和脫除膠粒外表的表示，使膠粒發(fā)生分散作用的最小電解質(zhì)濃度毫摩爾升，稱為分散價(jià)或分散值。叔米-哈第法則：A1Fe3+Ca2 十Mg2KNa+LiAl2(SO4)318H2明礬33 MgCO3等。分散預(yù)處理方法： 高價(jià)無(wú)機(jī)離子的去除除硅藻土的用途：1

3、、作為深層過(guò)濾介質(zhì)過(guò)濾懸浮液,多孔性及吸附性,參加到溶液中.2、在擾性或剛性支持介質(zhì)外表上預(yù)先形成硅藻土薄層(預(yù)涂層),形成毛細(xì)孔道并保護(hù)介質(zhì).,提高過(guò)濾速度并延長(zhǎng)過(guò)濾操作周期.過(guò)濾好的定形的晶體，這是一種最直接的步驟。懸浮液過(guò)濾3種方式。濾渣層過(guò)濾截留，例如板框壓濾機(jī)的過(guò)濾?？椎?。過(guò)濾時(shí)，顆粒進(jìn)入后被吸附在孔道內(nèi)，例如多孔砂濾器的過(guò)濾。式經(jīng)常是同時(shí)或相繼消滅。However the small size of microorganisms make filtration of fermentation beers or other biological solutions considera

4、bly more complicated. If we attempt to filter these beers using purely conventional technology, the filtration is often too slow to be practical.依據(jù)推動(dòng)力的不同可分為四類重力過(guò)濾 自然過(guò)濾加壓過(guò)濾 板框過(guò)濾真空過(guò)濾 真空過(guò)濾器過(guò)濾介質(zhì)1、無(wú)定形顆粒：顆?；钚蕴?、沙、無(wú)煙煤2、成形顆粒：燒結(jié)金屬、燒結(jié)塑料3、非金屬織物：尼龍、玻璃纖維4、金屬織物：不銹鋼絲網(wǎng)5、無(wú)紡品：紙、石棉承受連續(xù)旋轉(zhuǎn)真空過(guò)濾機(jī)進(jìn)展過(guò)濾，整個(gè)過(guò)程包括哪幾步？1、濾餅的形成2、洗滌濾

5、餅去除常用的過(guò)濾設(shè)備有哪幾種？1、板框壓濾機(jī)2、垂直葉片式硅藻土過(guò)濾機(jī)空轉(zhuǎn)鼓過(guò)濾機(jī)第三章 離心與沉降一、傳統(tǒng)的沉降設(shè)備：矩形水平流淌池圓形水平徑向流淌池垂直流淌式沉降池斜板式沉降池Fr2rFr2rgFr 的大小對(duì)離心機(jī)分類：Fr50000 高速離心機(jī)Fr 20220-1000000 超速離心機(jī) 3000-6000rpm。四、利用試驗(yàn)室小試數(shù)據(jù)對(duì)現(xiàn)有型號(hào)的離心機(jī)的生產(chǎn)力量進(jìn)展估算推測(cè) ,有兩種估算方法:1te 的近似方法；2、應(yīng)用離心機(jī)的幾何特征參數(shù)進(jìn)展定量分析。te=2R0t/gt-分別時(shí)間，ste，再估算五、以離心力作為推動(dòng)力，在具有過(guò)濾介質(zhì)(如濾網(wǎng)、濾布)的有孔轉(zhuǎn)鼓中參加懸 浮液，固體粒子

6、截留在過(guò)濾介質(zhì)上，液體穿過(guò)濾餅層而流出，最終完成濾液和濾餅分別的過(guò)濾操作。六、常用于生物分別的離心裝備有哪幾種？一類是離心沉降設(shè)備：管式離心機(jī) 碟片式離心機(jī)一類是離心過(guò)濾設(shè)備：三足式離心機(jī)臥式刮刀卸料離心機(jī) 螺旋卸料離心機(jī)第四章細(xì)胞裂開(kāi)胞裂開(kāi)常用的方法有哪些，并分別表達(dá)其特點(diǎn)化學(xué)法：滲透沖擊法 增溶法脂溶法機(jī)械裂開(kāi)法：勻漿法 研磨法超聲波法 珠磨裂開(kāi)法其中勻漿法、珠磨裂開(kāi)法適用于大規(guī)模生產(chǎn)。除此之外，還有凍結(jié)-溶化法、枯燥法、自溶法等凍結(jié)溶化法：一是：在冷凍過(guò)程中會(huì)促使細(xì)胞膜的疏水鍵構(gòu)造破壞，從而增加枯燥法可承受空氣枯燥、真空枯燥、噴霧枯燥和冷凍枯燥?？菰?、噴霧枯燥簡(jiǎn)潔抽提。冷凍枯燥適用于較穩(wěn)

7、定的生化物質(zhì)。將冷凍枯燥后的菌體在冷凍條件下磨成粉，然后用緩沖液抽提。真空枯燥適用于細(xì)菌的枯燥。自溶法是利用微生物自身產(chǎn)生的酶來(lái)溶菌，而不需要外加其他酶， 影響自溶過(guò)程的因素有溫度、時(shí)間、pH、緩沖液濃度、細(xì)胞代謝途徑。微生物細(xì)胞的自溶常承受加熱或枯燥法。八、選擇裂開(kāi)方法時(shí)，需要考慮以下因素： 一、細(xì)胞的數(shù)量和細(xì)胞壁的強(qiáng)度；溫度、化學(xué)試劑、酶等)的敏感性；三、要到達(dá)的裂開(kāi)程度及裂開(kāi)所必要的速度等。五、還應(yīng)把裂開(kāi)條件和后面的提取步驟結(jié)合起來(lái)考慮進(jìn)展權(quán)衡。利用在兩個(gè)互不相溶的液相中各種組分包括目的產(chǎn)物溶解度的不同，從而到達(dá)分別的目的。按反響機(jī)理分為：物理萃取和化學(xué)萃取。律。物理萃取利用溶劑對(duì)需分別

8、組分有較高的溶解力量，分別過(guò)程純屬物理過(guò)程化學(xué)萃取溶劑有選擇性地與溶質(zhì)化合或絡(luò)合從而在兩相中重安排而到達(dá)分別目的。萃取體系的構(gòu)成溶質(zhì)：被萃取的物質(zhì)：原先溶解溶質(zhì)的溶劑萃取劑：參加的第三組分萃取劑選擇原則：使溶質(zhì)在萃取相中有最大的溶解度安排系數(shù)-萃取體y合理的重要參數(shù)：y-平衡時(shí)溶質(zhì)在輕相中的濃度X平衡時(shí)溶質(zhì)在重相中的濃度應(yīng)用前提條件稀溶液溶質(zhì)對(duì)溶劑互溶沒(méi)有影響必需是同一分子類型，不發(fā)生締合或離解l和重相(h)中的化學(xué)勢(shì)相等。 ( l ) ( h )安排系數(shù)為y (h) (l)k expxRT要提高溶質(zhì)的安排系數(shù)可以實(shí)行的方法：有些萃取劑價(jià)高、易揮發(fā)、易燃或有生物毒性，故難于使用轉(zhuǎn)變?nèi)苜|(zhì)的特性生

9、成有用離子對(duì)可溶于萃取劑的離子對(duì)。三丁胺鹽等pH值。有機(jī)溶劑的選擇：黏度小，外表張力適中，相分散和相分別簡(jiǎn)潔，簡(jiǎn)潔回收，毒性低，腐蝕性小，不與目標(biāo)產(chǎn)物反響。常用于萃取的有機(jī)溶劑有環(huán)己烷,石油醚,苯,氯仿,乙醚,乙酸乙酯,正丁醇,丙酮,乙醇,甲醇等。比水重的有機(jī)溶劑：氯仿極性最大的有機(jī)溶劑：甲醇極性最小的有機(jī)溶劑：環(huán)己烷溶解范圍最廣的有機(jī)溶劑：乙醇環(huán)己烷,石油醚,苯,氯仿,乙醚,乙酸乙酯,正丁醇,丙酮,乙醇,甲醇推舉的化學(xué)萃取劑：轉(zhuǎn)移。氨基酸萃取劑：氯化三辛基甲銨。抗生素萃取劑：月桂酸、其它有機(jī)酸或胺類。烷、十二烷、四氯化碳、苯。液和溶劑接觸和流淌狀況，可以將萃取操作過(guò)程分成：?jiǎn)渭?jí)萃取過(guò)程多級(jí)萃

10、取過(guò)程多級(jí)萃取可分為錯(cuò)流接觸和逆流接觸萃取過(guò)程。依據(jù)操作方式不同，萃取操作又可分成間歇萃取和連續(xù)萃取操作。 多級(jí)逆流萃?。悍謩e效率高產(chǎn)品回收率高溶劑用量少混合沉降器 離心萃取器旋轉(zhuǎn)圓盤(pán)塔于其臨界點(diǎn)的溫度和壓力之下則稱之為超臨界流體。密度接近液體萃取力量強(qiáng)粘度接近氣體傳質(zhì)性能好超臨界萃取工藝具有如下特點(diǎn)：1、由于超臨界流體的黏度低、集中系數(shù)高，因此，超臨界萃取體系的傳質(zhì)效率大大高于液-液兩相體系。2、由于超臨界流體的外表張力極低，其在固態(tài)物料中的滲透速度格外快。3、超臨界萃取同時(shí)具有精餾和液相萃取的特點(diǎn)，即在萃取過(guò)程中由于被分別物生相際分別效果。4、超臨界萃取具有獨(dú)一無(wú)二的優(yōu)點(diǎn)是它的萃取力量的大

11、小取決于流體的密度，而流體密度很簡(jiǎn)潔通過(guò)調(diào)整溫度和壓力來(lái)加以把握。5、超臨界萃取的溶劑回收方法簡(jiǎn)潔并且大大節(jié)約能源。被萃取物可通過(guò)等溫降壓或等壓升溫的方法與萃取劑分別；而萃取劑只需再經(jīng)壓縮便可循環(huán)使用。6、高沸點(diǎn)物質(zhì)往往能大量地、有選擇性地溶解于超臨界流體中而形成超臨界流解的物質(zhì)。超臨界萃取常用萃取劑：極性萃取劑：乙醇、甲醇、水難劑：二氧化碳易超臨界二氧化碳萃?。簝?yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：臨界條件溫存產(chǎn)品分別簡(jiǎn)潔不燃無(wú)腐蝕性價(jià)格廉價(jià)萃取設(shè)備選擇考慮的原則： (1)穩(wěn)定性和停留時(shí)間； (2)溶劑物系的澄清特性；(3)所需要的理論級(jí)數(shù)； (4)設(shè)備投資費(fèi)和修理整；(5)設(shè)備裝置所占的場(chǎng)地面積和建筑高度(6)處理

12、量和通量；(7)各種萃取設(shè)備的特性；(8)系統(tǒng)的物理性質(zhì)。超臨界萃取典型流程：等溫法等壓法吸附法雙水相萃?。?雙水相現(xiàn)象是當(dāng)兩種聚合物或一種聚合物與一種鹽溶于同一溶劑值時(shí)，就會(huì)分成不互溶的兩相。因使用的溶劑是水，因此稱為雙水相，在這兩相中水分都占很大比例 (85一95)這就抑制了有機(jī)溶劑萃取中蛋白簡(jiǎn)潔失活和強(qiáng)親水性蛋白難溶于有機(jī)溶劑的缺點(diǎn)。雙水相萃取是利用物質(zhì)在不相溶的兩水相間安排系數(shù)的差異進(jìn)展萃取的方法是否分層或混合成一相，取決于：熵增與分子數(shù)目有關(guān)可以構(gòu)成雙水相的體系有：離子型高聚物非離子型高聚物分子間斥力PEGDEXTRAN高聚物相對(duì)低分子量化合物鹽析作用PEG硫酸銨雙水相萃取的優(yōu)點(diǎn)：1

13、、操作條件溫存，在常溫常壓下進(jìn)展；不會(huì)引起生物活性物質(zhì)的失活或變性。2、兩相的界面張力小，萃取時(shí)兩相能高度分散，傳質(zhì)速度快。分的脫水變性4、溶質(zhì)對(duì)目標(biāo)組分選擇性強(qiáng)，大量雜質(zhì)能與全部固形物一同除去，使分別操作5、過(guò)程簡(jiǎn)化，易于連續(xù)操作，處理量大，適合工業(yè)應(yīng)用。缺點(diǎn)：系統(tǒng)易乳化，成相聚合物的本錢(qián)較高，水溶性高聚物大多數(shù)粘度較大，不易定量把握，高聚物回收困難。雙水相萃取的原理：浮粒子與其四周物質(zhì)具有的簡(jiǎn)單的相互作用靜電作用疏水作用和生物親和作用氫鍵、電荷力、疏水作用范德華力構(gòu)象效應(yīng)雙水相系統(tǒng)中目標(biāo)物安排系數(shù)的影響因素： 成相高聚物濃度界面張力電化學(xué)安排疏水反響生物親和安排 ：在非極性溶液中，外表活性

14、劑的極性頭朝內(nèi)，疏水的尾部向外，中間形反微團(tuán)的優(yōu)點(diǎn)：1、極性“水核”具有較強(qiáng)的溶解力量。劑接觸，削減變性作用。3、由于“水核”的尺度效應(yīng)，可以穩(wěn)定蛋白質(zhì)的立體構(gòu)造，增加其構(gòu)造的剛性，提高其反響性能。構(gòu)成反膠團(tuán)的外表活性劑種類：陰離子外表活性劑活性劑第六章吸附與離子交換吸附吸附劑外表的過(guò)程。吸附過(guò)程通常包括：待分別料液與吸附劑混合、吸附質(zhì)被吸附到吸附劑外表、 料液流出、吸附質(zhì)解吸回收等四個(gè)過(guò)程。常見(jiàn)的吸附類型及其主要特點(diǎn)：物理吸附： 吸附作用力為分子間引力(范德華力、無(wú)選擇性、無(wú)需高活化能、吸附層可以是單層，也可以是多層、吸附和解吸附速度通常較快。擇性強(qiáng)、吸附和解吸附速度較慢。上的吸附力就越強(qiáng)。

15、常用吸附劑種類：活性炭類樹(shù)脂吸附劑通常應(yīng)具備以下特征：有較高的吸附選擇性機(jī)械強(qiáng)度高價(jià)格低廉?；钚蕴繉?duì)物質(zhì)的吸附規(guī)律：最強(qiáng)。針對(duì)不同的物質(zhì)，活性炭的吸附遵循以下規(guī)律：氨基酸大于對(duì)中性氨基酸。對(duì)芳香族化合物的吸附力量大于脂肪族化合物氨基酸，多糖單糖。pH堿性洗脫使用活性炭應(yīng)留意：在首次分別料液時(shí)，一般先選用顆粒狀活性炭；如待分別的物質(zhì)不易被吸附，則改用粉末狀活性炭；不集中時(shí)，則改用錦綸活性炭。大孔網(wǎng)狀吸附劑：特點(diǎn)：脫色去臭效果抱負(fù)；對(duì)有機(jī)物具有良好的選擇性；物化性質(zhì)穩(wěn)定；機(jī)械強(qiáng)度好；吸附速度快；解吸、再生簡(jiǎn)潔。大孔網(wǎng)狀吸附樹(shù)脂的種類：非極性吸附樹(shù)脂：以苯乙烯為單體，交聯(lián)劑為二乙烯苯，又稱芳香族吸附

16、劑。又稱脂肪族吸附劑。大孔吸附樹(shù)脂的吸附機(jī)理：的化學(xué)構(gòu)造、物理性能以及與溶質(zhì)、溶劑的性質(zhì)有關(guān)。通常遵循以下規(guī)律：極性吸附劑可從非極性溶劑中吸附極性物質(zhì)； 中等極性吸附劑兼有以上兩種力量遵循“類似物簡(jiǎn)潔吸附類似物”的原則常用的解吸方法：低級(jí)醇、酮或水溶液解吸堿解吸附 原理：成鹽，主要針對(duì)弱酸性溶質(zhì),酚-氫氧化鈉酸解吸附原理同上水洗解吸原理如吸附是在高濃度鹽類溶液中進(jìn)展時(shí)降低體系中的離子強(qiáng)度，降低溶質(zhì)的吸附量吸附等溫線：c間的函數(shù)關(guān)系稱為吸附等溫線。0Kcqkg溶質(zhì)/kg吸附劑C溶液中溶質(zhì)濃度，kg溶質(zhì)/m3溶液 Km3溶液/kg吸附劑qoK是閱歷常數(shù)， qo為飽和吸附量k11qqcq00截距是q

17、o-1，斜率是 Kqo提純時(shí)適合此吸附方程。影響吸附的主要因素：吸附劑的性質(zhì)：比外表積粒度大小pH 值、鹽濃度是利用溶質(zhì)和吸附劑之間特別的化學(xué)作用，從而實(shí)現(xiàn)分別。吸附劑由載體Carrier和配位體(Ligand)組成載體吸附的效果有親熱的關(guān)系。這種作用表示為“鑰匙和鎖”的機(jī)制： 配基固定化的配基與不溶性的支撐載體偶聯(lián)或共價(jià)結(jié)合成具有特異親和性的分別介質(zhì)。 吸附樣品附介質(zhì)選擇性吸附酶或其他生物活性物質(zhì)雜質(zhì)與介質(zhì)間沒(méi)有親和作用，故不能被吸附而被去除。樣品解析 選擇適宜的條件，使被吸附的親和介質(zhì)上的酶或其他生物活性物質(zhì)解吸。親和吸附的特點(diǎn)：以8000 倍通用性較差，洗脫條件苛刻親和吸附劑的組成是由惰

18、性的載體,經(jīng)活化,再與配基偶聯(lián)而成。 活化的方法主要有：高碘酸活化法：氧化多糖，生成烷基胺甲苯磺酰氯法：雙功能試劑法 二乙烯砜載體經(jīng)活化后，就可以進(jìn)展與配基的偶聯(lián)反響。具體方法如下： 碳二亞胺縮合法(脫水)酸酐法疊氮化法重氮化法影響親和吸附的因素：配基濃度 配基濃度高有利于它在配基上的吸附和濃集；配基與載體的結(jié)合位點(diǎn)質(zhì)等大分子作為配基時(shí)與載體連接的鍵越少越好，利于保持高級(jí)構(gòu)造載體孔徑：孔道大小，應(yīng)適宜微環(huán)境：載體或“手臂鏈”的極性、電性常用的吸附單元操作方式：間歇吸附連續(xù)攪拌吸附固定床吸附離子交換法是通過(guò)帶電的溶質(zhì)分子與離子交換劑中可交換的離子進(jìn)展交換而到達(dá)的，都可使其帶電，所以離子交換法已廣

19、泛用于生物大分子的分別純化技術(shù)。洗脫下來(lái)，到達(dá)分別、濃縮和提純的目的。大孔樹(shù)脂、親和吸附、離子交換分別利用吸附劑和溶質(zhì)間的范德華力、特別的 親和力、庫(kù)侖力作用的。離子交換樹(shù)脂：其構(gòu)造由三局部組成：載體活性基團(tuán)平衡離子離子交換樹(shù)脂構(gòu)造由三局部組成：樹(shù)脂骨架為載體,與骨架相聯(lián)的活性基團(tuán),及其平衡活性離子離子交換的分類：-醛型等。按聚合的化學(xué)反響分類，有共聚型和縮聚型。微孔型大孔樹(shù)脂離強(qiáng)弱程度具體又可以分為：強(qiáng)陽(yáng)、弱陽(yáng)；強(qiáng)陰、弱陰對(duì)于陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，pK 越小，酸性越強(qiáng) 對(duì)于陰離子交換樹(shù)脂，pK 越大，堿性越強(qiáng)位鍵；主要用于脫除金屬離子；*多糖基離子交換樹(shù)脂：固相載體為生物來(lái)源的多糖類物質(zhì)，親水性強(qiáng)

20、、交換空間大、對(duì)生物大分子無(wú)致變性作用離子交換樹(shù)脂的理化性能：外觀：球形、淺色為宜，粒度大小為 1660 目90%機(jī)械強(qiáng)度：商品樹(shù)脂90%；生物分別95%含水量：0.30.7g/g 樹(shù)脂；濕態(tài)密封包裝，防凍在某一條件下；穩(wěn)定性：化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性；度、骨架構(gòu)造等因素影響孔度、孔徑、比外表積滴定曲線：鑒別樹(shù)脂的酸堿度及其強(qiáng)弱性，即功能團(tuán)性質(zhì),估量交換總量.影響交換速度的因素：顆粒大?。河≡娇旖宦?lián)度：交聯(lián)度小，樹(shù)脂易膨脹,交換速度快溫度：越高越快離子化合價(jià)：化合價(jià)越高，庫(kù)侖力越大，交換越快,集中越慢離子大小：越小交換越快,集中越快,分子篩作用.攪拌速度：在肯定程度上，越大越快影響離子交換選擇性

21、的因素：離子化合價(jià)：稀溶液中高價(jià)離子易于被吸附；溶液 pH：影響樹(shù)脂交換基團(tuán)和交換離子的解離程度，;由于水合作用降低交換速度。越低越好；,對(duì)難洗脫溶質(zhì)有益.交聯(lián)度、膨脹度、分子篩：交聯(lián)度大，膨脹度小，篩分力量增大,吸附量大,交換常數(shù)大；交聯(lián)度小，膨脹度大，吸附量削減。粒子間的關(guān)心力：除靜電力以外，還有氫鍵和范德華力等關(guān)心力；離子交換操作方法：樹(shù)脂預(yù)處理離子交換吸附洗脫樹(shù)脂預(yù)處理：先用物理方法，再用化學(xué)方法化學(xué)處理：轉(zhuǎn)型氫型或鈉型方式有：順流再生和逆流再生蛋白質(zhì)離子交換分別的根本步驟：平衡 上樣吸附洗脫第七章 色譜技術(shù)色譜分別技術(shù)反復(fù)屢次的安排，從而使各物質(zhì)到達(dá)分別。流淌相：指色譜過(guò)程中攜帶組分

22、向前移動(dòng)的物質(zhì)。體。色譜法的優(yōu)點(diǎn)：分別效率高。簡(jiǎn)單混合物，有機(jī)同系物、異構(gòu)體。手性異構(gòu)體。 400的各種有機(jī)或無(wú)機(jī)試樣的分析。液相色譜：高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定、生物試樣的分別分析。分析速度快。一般在幾分鐘或幾格外鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣的分析。樣品用量少。靈敏度高?？梢詸z測(cè)出g.g-1 (10-6 )級(jí)甚至 ng.g-1(10-9)級(jí)的物質(zhì)量。分別和測(cè)定一次完成?？梢院投喾N波譜分析儀器聯(lián)用缺乏之處：難。dc對(duì)于不同的分別機(jī)理，K 的含義不同:吸附色譜稱吸附系數(shù)安排色譜稱安排系數(shù)離子交換色譜稱離子交換系數(shù)分子排阻色譜稱分子排阻系數(shù)Kd-安排系數(shù)q、c-溶質(zhì)在固相和液相中的濃度阻滯因子是在色譜系統(tǒng)中溶質(zhì)的移

23、動(dòng)速度和標(biāo)準(zhǔn)物與固定相沒(méi)有親和力的流動(dòng)相 Kd=0的遷移率之比 溶質(zhì)的遷移距離Rf流淌相在色譜系統(tǒng)中的遷移距離其意義在于表達(dá)某一種溶質(zhì)與固定相之間的親和力大小保存時(shí)間tR和保存體積VR溶質(zhì)通過(guò)色譜柱所需時(shí)間，即待測(cè)組分從進(jìn)樣到消滅峰最大值所需的時(shí)間。 在值一樣的作用，可作為色譜定性分析的依據(jù)。 反響樣品在柱子中的保存或阻滯t力量，是色譜過(guò)程的根本熱力學(xué)參數(shù)之一tt：N 5.54 (WR)21/ 2N 16 (R)2WbN-理論塔板數(shù)tR-保存時(shí)間HLNW1/2-半峰寬Wb -峰底寬度L-柱長(zhǎng)一般色譜系統(tǒng)的操作程序：依據(jù)要分別組分的性質(zhì)包括極性、分子量、分子結(jié) 構(gòu)選擇適宜的固定相和流淌相吸附操作

24、：選擇適宜的操作條件pH測(cè)定穿透樣品含量以調(diào)整操作參數(shù)洗脫：承受有機(jī)溶劑洗滌、調(diào)整pH值以及體系離子強(qiáng)度，最大限度地回收目標(biāo)產(chǎn)物色譜柱：裝柱 平衡 上樣量和上樣體積 洗脫流速及把握集洗脫方式有三種：一步洗脫、階段洗脫、梯度洗脫吸附色譜：利用溶質(zhì)與吸附劑之間的分子吸附力(范德華力，包括色散力、誘導(dǎo)力、定向力以及氫鍵)的差異而實(shí)現(xiàn)分別(固體外表的吸引力)關(guān)鍵要素：吸附劑和開(kāi)放劑的選擇吸附劑：氧化鋁、硅膠、聚酰胺等，均含有不飽和的(未公用的氧原子或氮原子以及能夠形成氫鍵的基團(tuán)，如-OH和-NH2色散力:在非極性或弱極性分子之間由于分子內(nèi)電子運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的瞬時(shí)偶極而引起的作用力即色散力。極性吸附劑與極性

25、吸附分子永久偶極之間的作用力稱為定向力。吸附在吸附劑外表上，這種作用力就是誘導(dǎo)力。XHY表示。4 種作用力的強(qiáng)弱次序是吸附劑的選擇對(duì)吸附劑的要求：(2)不應(yīng)與流淌相發(fā)生化學(xué)反響。度要細(xì)，一般要200 目(0.1mm)。常用的吸附劑：氧化鋁 硅膠聚酰胺吸附劑的活度及其調(diào)整吸附劑的活性取決于它們含水量的多少，活性最強(qiáng)的吸附劑含有最少的水。示活性越小，一般常用。去吸附劑中的局部水，則可以增加其活性，后者稱為吸附劑的活化。開(kāi)放劑的選擇：性質(zhì)等狀況綜合而定。Rf 值大；極性小的溶 也小。二是開(kāi)放劑對(duì)被分別的組分有肯定的溶解度，由于被解吸下來(lái)的組分只有能溶解在開(kāi)放劑中才能隨開(kāi)放劑向前移動(dòng)?？捎糜诖_定開(kāi)放劑

26、的大致范圍。選擇的具體方法：微園環(huán)試驗(yàn)和小板試驗(yàn)確定Rf值太大，選開(kāi)放劑極性比原來(lái)的小的溶劑。Rf值太小，選開(kāi)放劑極性比原來(lái)的大的溶劑。之間分布狀況不同而使混合物得到分別。這種分別不經(jīng)過(guò)吸附程序，僅由溶劑提取而完成，因此叫安排色譜法分別作用。用作沖洗的液體稱流淌相。到分別。載體種類：硅膠 硅藻土 纖維素 葡聚糖凝膠流淌相的吸附色譜中，由于硅膠SiO2XH2O外表大量硅羥基的存在，其極色譜。反相高效液相色譜是應(yīng)用最廣的一類高效液相色譜法。由固體剛性基質(zhì)和鍵合在基質(zhì)上的配基組成。疏溶劑理論： 一個(gè)分子有親水局部和疏水局部?jī)深惢鶊F(tuán)。親水基團(tuán)如 OH、-NH2、-COOH 和-SH 等極性官能團(tuán)，疏水

27、基團(tuán)如苯環(huán)-CH3、-CH2-即疏水性基團(tuán)溶劑的接觸面積的效應(yīng)叫做疏水作用或疏溶劑效應(yīng)。子保存在柱子上時(shí)，樣品分子與配基接觸，兩者之間結(jié)合面上的溶劑化分子被Z 個(gè)。當(dāng)樣品分子被洗脫下Z個(gè)，與保存時(shí)被“擠”走的溶劑分子相等。質(zhì)依據(jù)其離子交換親合力的不同而得到分別的方法。使不同相對(duì)分子量的組分得以分別。凝膠色譜的特點(diǎn)：分別介質(zhì)一一(凝膠)完全不需要像離子交換劑那樣簡(jiǎn)單的再生過(guò)程便可重復(fù)使 用。100。分別物的活性沒(méi)有不良影響。純化，脫鹽、濃縮以及分析測(cè)定等。難以到達(dá)很好的分別。此外，凝膠層析要求樣品粘度不宜太高。凝膠顆粒有時(shí)還有非特異吸附現(xiàn)象。定的固定配基之間的親和力不同而使生物分子得以分別。親和

28、色譜原理1、原理間構(gòu)造的識(shí)別。親和色譜優(yōu)點(diǎn)高選擇性，待分別物質(zhì)與配基專一性結(jié)合，區(qū)分率高。具有濃縮作用，可純化幾千倍，適用于含量極少的活性物質(zhì)分別。親和配基的分類依據(jù)配基的特性可分為有機(jī)小分子類、生物大分子類和染料化合物三類。僅對(duì)某種生物物質(zhì)具對(duì)某類化學(xué)基團(tuán)或某一類生物分子具有結(jié)合作用兩類。親和色譜制備選擇適宜的活化劑和活化方法 活化載體配基偶聯(lián)親和色譜法的操作過(guò)程配基固相化樣品制備、裝柱、平衡親和吸附解吸附色譜柱再生HPLC具有如下特點(diǎn)：高壓以上。(15)mL100mLmin 以上。高靈敏度 承受了基于光學(xué)原理的檢測(cè)器，如紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá) (510-10)mgL的數(shù)量級(jí)；熒光檢測(cè)器的靈敏度可達(dá)10-11g。高壓液相色譜的高靈敏度還表現(xiàn)在所需試樣很少，微升數(shù)量級(jí)的樣品就足以進(jìn)展全分折。5000 100 個(gè)以上的組分。膜分別的概念：利用膜的選擇性孔徑大小動(dòng)力，由于溶液中各組分透過(guò)膜的遷移率不同而實(shí)現(xiàn)分別的一種技術(shù)。膜的分類按外形可分為：平板膜、管式膜、中空膜等。按相態(tài)分：固體膜和液體膜。按來(lái)