梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷

1、梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷第1頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四一、概述-梅毒病原體（一）、名 詞由梅毒螺旋體感染引起的一種慢性全身性性傳播疾病是我國(guó)衛(wèi)生部規(guī)定的8種重點(diǎn)防治性病之一中華人民共和國(guó)傳染病防治法規(guī)定的乙類(lèi)傳染病世界衛(wèi)生組織列為世界上最常見(jiàn)的50種傳染病之一 梅毒螺旋體（Treponema pallidum，TP ）是梅毒的病原體，因其透明，不易著色，故又稱(chēng)蒼白螺旋體 第2頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四（二）、生物學(xué)特性小而纖細(xì)的螺旋狀微生物長(zhǎng)520m，粗細(xì)0.2m有6 12個(gè)規(guī)則的螺旋基本結(jié)構(gòu)為一原生質(zhì)的圓柱體，為兩層膜所圍繞行動(dòng)緩慢而有

2、規(guī)律 - 圍繞其長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)中前后移動(dòng) - 伸縮其圈間之距離而移動(dòng) - 全身彎曲如蛇行 第3頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四（三）、繁 殖繁殖方式與其生活環(huán)境有關(guān)近年來(lái)電子顯微鏡觀察，在培養(yǎng)條件下或在體內(nèi)適宜環(huán)境中為橫斷分裂，分裂時(shí)將軀干分裂成長(zhǎng)短兩段分裂增代時(shí)間為3033小時(shí)當(dāng)條件不利時(shí)，以分芽子繁殖生活發(fā)育周期:顆粒期、球形體期及螺旋體期，與所致疾病周期、隱伏發(fā)作及慢性病程有關(guān) 第4頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四（四）、培 養(yǎng)一般不能人工培養(yǎng)Nichols株（有毒株）能接種在家兔睪丸中或眼前房?jī)?nèi)繁殖，能保持毒力Reiter株能生長(zhǎng)繁殖，已喪

3、失致病力Nichols株和Reiter株已廣泛用作多種梅毒血清學(xué)的診斷抗原第5頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四(五）、生存條件厭氧寄生物，在人體內(nèi)可長(zhǎng)期生存，體外不易生存干燥、肥皂水及一般消毒劑如1：1000苯酚、新潔爾滅、稀酒精均可于短時(shí)間將其殺死在血液中4經(jīng)3日可死亡，故在血庫(kù)冰箱冷藏3日以上的血液就無(wú)傳染性溫度的影響：41-42時(shí)可生活1-2小時(shí)，在48僅半小時(shí)即失去感染力，100立即死亡。對(duì)寒冷抵抗力大，在0時(shí)，可生活48小時(shí)，如將梅毒病損標(biāo)本置于冰箱內(nèi)，經(jīng)1周仍可致病。在低溫（-78）保存數(shù)年，仍可保持其形態(tài)、活動(dòng)及毒性在封存的生理鹽水稀釋的組織液中可生活1

4、0小時(shí)左右在潮濕的器具或濕毛巾中，亦可生存數(shù)小時(shí)在干燥環(huán)境中可見(jiàn)迅速死亡 。第6頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四（六）、宿 主梅毒螺旋體只感染人類(lèi)人是梅毒的唯一傳染源 第7頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四（七）、毒力因子目前未證明具有內(nèi)毒素或外毒素粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子 第8頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四（八）、致 病 性由于其表面有賴(lài)以生存的莢膜樣的粘多糖，由于粘多糖是宿主組織和血管支架的重要基質(zhì)成分，粘多糖被梅毒螺旋體分解后，組織受到損傷破壞，從而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管腔閉合性動(dòng)脈內(nèi)膜炎，動(dòng)

5、脈周?chē)准皦乃?，潰瘍等病?第9頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四（九）、抗 原1表面特異性抗原：刺激機(jī)體產(chǎn)生特異凝集抗體及密螺旋體制動(dòng)或溶解抗體，后者加補(bǔ)體可溶解螺旋體2螺旋體內(nèi)類(lèi)屬抗原：可產(chǎn)生補(bǔ)體結(jié)合抗體，與非病原性螺旋體有交叉反應(yīng)3，螺旋體與宿主組織磷脂形成的復(fù)合抗原：當(dāng)螺旋體侵入組織后，組織中的磷脂可粘附在螺旋體上，形成復(fù)合抗原，此種復(fù)合抗原可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗磷脂的自身免疫抗體，稱(chēng)為反應(yīng)素（Aegagin），可與牛心肌或其他正常動(dòng)物心肌提取的類(lèi)脂質(zhì)抗原起沉淀反應(yīng)（康氏試驗(yàn)）或補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)（華氏試驗(yàn)） 第10頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四

6、(十）、免 疫以細(xì)胞免疫為主，體液免疫只有一定的輔助防御作用當(dāng)螺旋體從體內(nèi)清除后可再感染，而且仍可出現(xiàn)一期梅毒癥狀此病周期性潛伏與再發(fā)的原因可能與體內(nèi)產(chǎn)生的免疫力有關(guān)第11頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四二、檢測(cè)方法-病原體檢查梅毒螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法。 診斷一期梅毒、二期梅毒時(shí)，可取患者的滲出液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下觀察螺旋體的特征性形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式.病原學(xué)檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法第12頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色和熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體等檢查

7、方法，直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。暗視野顯微鏡檢查已被世界衛(wèi)生組織指定為性病實(shí)驗(yàn)室必備項(xiàng)目之一。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對(duì)于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見(jiàn)到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，第13頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四第14頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四暗視野顯微鏡檢查第15頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四鍍銀染色第16頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-血清學(xué)檢測(cè) 根

8、據(jù)檢測(cè)所用抗原不同，臨床血清試驗(yàn)分為兩大類(lèi)：1.非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)2.梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)第17頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR、TRUST）第18頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)所有的非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)的抗原基本成分都一樣,其基本成分是心磷脂 、卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物 凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒 被肉眼所見(jiàn)上述方法的敏感性和特異性都基本相似第19頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月2

9、0日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)RPR試驗(yàn)特點(diǎn)： 在USR試劑成分的基礎(chǔ)上 加入黑色碳顆粒 作為沉淀的指示物 用白色的硬紙片替代玻片 血清不需要滅活 不需要顯微鏡觀測(cè)結(jié)果 可作定量試驗(yàn) 有現(xiàn)成的試劑盒 攜帶方便 操作簡(jiǎn)單 價(jià)格便宜 試驗(yàn)的結(jié)果可長(zhǎng)期保存 第20頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)甲苯胺紅試驗(yàn)(TRUST)特點(diǎn)： 其原理和成分與RPR試驗(yàn)相同 用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒 其余的特點(diǎn)均與RPR相同第21頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)原理示意圖第22頁(yè)，共48

10、頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四RPR結(jié)果第23頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四TRUST結(jié)果第24頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽(yáng)性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。第25頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)特點(diǎn)前帶現(xiàn)象 指非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的抗

11、體時(shí)出現(xiàn)的弱陽(yáng)性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此時(shí)將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽(yáng)性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱(chēng)為前帶現(xiàn)象。第26頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四第27頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四第28頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn) 采用梅毒螺旋體作抗原，是特異性的抗原體反應(yīng)。梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TP-PA）熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）、梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELSA-TP）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB-Test）

12、第29頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn) TPPA TPPA試驗(yàn)原理與TPHA試驗(yàn)基本相同。TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒替代TPHA試驗(yàn)中致敏羊紅細(xì)胞，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性。明膠粒子為洋紅色，在操作部步上也較為方便，出結(jié)果較快。檢測(cè)IgM或IgG抗體第30頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn)FTA-ABS FTA-ABS試驗(yàn)是檢測(cè)梅毒的“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗(yàn)。其原理是將有完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Reiter螺旋體

13、制備而成）吸收過(guò)的梅毒患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（FTIC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，形成熒光的抗原抗體復(fù)合物。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯出蘋(píng)果綠色的熒光，即為陽(yáng)性反應(yīng)。 第31頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四+Sheep red cellT.pallidum+Sensitised cellSensitised cellSpecific AntibodyHemagglutinationTPPA/TPHA第32頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn)梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELSA-TP抗

14、原采用超聲破碎的螺旋體抗原或重組抗原檢測(cè)IgM或IgG敏感性和特異性與其他試劑基本一致應(yīng)作進(jìn)一步評(píng)價(jià)第33頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四梅毒診斷方法比較 RPR、TRUST、USR、VDRL TPHA、FTA-ABS 間接EIA、雙抗原夾心EIA 牛心磷脂 完整病原體 純化抗原 梅毒非特異性抗原 梅毒特異性抗原 梅毒特異性抗原特異性中 特異性高 特異性高敏感性低 敏感性中 敏感性高 肉眼判讀結(jié)果 肉眼判讀結(jié)果 機(jī)器判讀結(jié)果 自動(dòng)化程度低 自動(dòng)化程度低 自動(dòng)化程度高 單獨(dú)適用血液篩查 單獨(dú)不適用血液篩查 單獨(dú)適用血液篩查 適用少批量樣本檢測(cè) 適用少批量樣本檢測(cè) 適用大

15、批量樣本檢測(cè) 價(jià)格低 價(jià)格高 價(jià)格中 注：反應(yīng)素存在生物學(xué)真陽(yáng)性反應(yīng)、生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)、人工假陽(yáng)性反應(yīng)。第34頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四 梅毒各期血清學(xué)檢驗(yàn)的陽(yáng)性率（%） 試驗(yàn) 一期梅毒 二期梅毒 三期梅毒 RPR 85 100 75FTA-ABS 86 100 97 TPHA 77 100 100 第35頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四 2008年梅毒試劑評(píng)估 參比試劑： 1. 美國(guó)BD公司生產(chǎn)的“梅毒快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)診斷試劑盒(RPR試劑盒)(批號(hào)：8095883) ” 2. 日本富士株式會(huì)社生產(chǎn)的“梅毒螺旋體抗體診斷試劑

16、(凝集法)(TPPA試劑盒)(批號(hào)：VN80807) ” 3. 抗梅毒螺旋體抗體(IgG)檢測(cè)試劑盒(免疫印漬法)(16人份/盒)（批號(hào)：D081009A1） 第36頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)用試劑敏感性和特異性 試劑名稱(chēng) 生產(chǎn)廠家 生產(chǎn)批號(hào) 敏感性(%) 特異性(%) 梅毒快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀 上?？迫A生物技術(shù)有限公司 20070620 97.2 93.4 卡片試驗(yàn)診斷試劑盒(RPR) 梅毒甲苯胺紅不加熱血清 上海榮盛生物技術(shù)有限公司 20070501 95.4 95.1 試驗(yàn)診斷試劑盒(TRUST) 梅毒甲苯胺紅不加熱血清 蘭州生物制

17、品研究所 20070201 92.2 96.2 試驗(yàn)診斷試劑盒(TRUST) 梅毒甲苯胺紅不加熱血清 英科新創(chuàng)(廈門(mén))科技有限公司 2008067602 97.2 93.4 試驗(yàn)診斷試劑(TRUST) 梅毒甲苯胺紅不加熱血清 鄭州安圖綠科生物工程有限公司 20070509 87.1 94.4 試驗(yàn)診斷試劑盒(TRUST) 第37頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四梅毒螺旋體血清學(xué)檢測(cè)用試劑(ELISA法)的敏感性和特異性 試劑名稱(chēng) 生產(chǎn)廠家 生產(chǎn)批號(hào) 敏感性(%) 特異性(%) 梅毒螺旋體抗體診斷試劑 珠海麗珠試劑有限公司 20080618 99.6 99.6 (雙抗夾心

18、法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋體抗體診斷試劑 英科新創(chuàng)(廈門(mén))科技有限公司 2008077506 99.6 98.3 (雙抗夾心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋體抗體診斷試劑 北京華大吉比愛(ài)生物技術(shù)有限公司 20080912 99.6 97.1 (雙抗夾心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋體抗體診斷試劑 北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限 N20080606 99.2 99.6 (雙抗夾心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋體抗體診斷試劑 北京現(xiàn)代高達(dá)生物技術(shù) 200806003 98.9 99.6 (雙抗夾心法)(ELISA-TP) 有限責(zé)任公司 梅毒螺旋體抗體診斷試劑 北京金豪制藥股份有限公司 20

19、0807076 98.9 98.3 (雙抗夾心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋體抗體診斷試劑 上海科華生物技術(shù)有限公司 20080714 97.7 93.8 (雙抗夾心法)(ELISA-TP) 第38頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四梅毒螺旋體血清學(xué)檢測(cè)用試劑(快速)的敏感性和特異性 試劑名稱(chēng) 生產(chǎn)廠家 生產(chǎn)批號(hào) 敏感性(%) 特異性(%) 梅毒螺旋體抗體診斷 北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司 020080803 98.1 96.3 試紙盒(膠體金法) 梅毒螺旋體抗體檢測(cè) 英科新創(chuàng)(廈門(mén))科技有限公司 027122702 95.8 93.8 試紙條(膠體金) 梅毒螺旋體抗體膠

20、體 韓國(guó)SD公司 025035 91.6 99.2 金診斷試劑 梅毒螺旋體抗體膠體 艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司 200810216 87.8 100 金診斷試劑 第39頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四檢測(cè)方法-梅毒螺旋體血清試驗(yàn)的臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如RPR等)初篩陽(yáng)性標(biāo)本的確證試驗(yàn)。梅毒患者經(jīng)過(guò)抗梅治療后，ELSA、TPPA試驗(yàn)仍可陽(yáng)性，故TPPA試驗(yàn)陽(yáng)性不能作為療效觀察的指標(biāo)。ELSA、TPPA陽(yáng)性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。第40頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四非梅毒螺旋體

21、抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋示意圖早期晚期一期二期早期潛伏晚期潛伏三期 治療前 治療后 陽(yáng)性陰性第41頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋示意圖早期一期二期早期潛伏晚期晚期潛伏三期 治療前 治療后陽(yáng)性陰性第42頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月20日，23點(diǎn)17分，星期四梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯USR ELISA 意義RPR TPPAVDRL FTA-ABS _ _ 排除梅毒 一期梅毒的早期 艾茲病患者合并梅毒 + + 現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生的嬰兒除外) + - 生物學(xué)假陽(yáng)性- + 早期梅毒經(jīng)治療后或晚期梅毒 注：檢驗(yàn)結(jié)果要結(jié)合臨床，才能作出完全正確判斷 第43頁(yè)，共48頁(yè)，2022年，5月2